全 文 ：檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
气导滞，现代药理研究表明大腹皮对大鼠的胃排空
运动有较强的促进作用［5］。丹参其性寒凉，功善活
血祛瘀止痛、凉血消痈，可破宿血、生新血，可抑制血
小板聚集，激活纤溶酶原-纤溶酶纤维蛋白原溶解。
小鼠甩尾实验结果表明阿司匹林组、枳朴方①、
③、④组与蒸馏水空白组比较均能明显延长小鼠的
甩尾反应时间，枳朴方②组无统计学意义。小鼠二
甲苯致耳肿胀实验结果表明阿司匹林组、枳朴方①
与蒸馏水组比较均能显著抑制小鼠耳肿胀，枳朴方
② ～④组与蒸馏水组比较无统计学意义。小鼠肠推
进实验结果表明枳朴方给药组、西沙比利组与蒸馏
水组比较均能显著促进肠蠕动。综合分析，枳朴方
4 种工艺均具有一定的的镇痛、抗炎、促肠蠕动作用
可缓解腹部术后肠麻痹所致的腹痛、腹胀、不排气等
症状。以水煎提取方法简单，疗效确切。
［参考文献］
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版 ．北京:人民卫生出版社，2002:885，911．
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人民卫生出版社，1991:1136．
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［5］ 刘汶，张大炜 ． 中药对胃肠运动功曲的影响［J］． 中国
中西医结合脾胃杂志，1998，6(3) :192．
［责任编辑 仝燕］
［收稿日期］ 20110505(011)
［基金项目］ 广西教育厅科研立项项目(201010LX457) ;广西
科学基金项目(桂科青 0832091)
［第一作者］ 赖红芳，副教授，从事天然产物提取及成分分析研
究，Tel:0778-3141892，E-mail: laihongfang263 @
tom． com
［通讯作者］ * 黄秀香，副教授，Tel:0778-3141892，E-mail:
hxx1372@ 163. com
金樱根总黄酮提取工艺优选
赖红芳，韦瑞松，黄秀香 *
(河池学院化学与生命科学系，广西 宜州 546300)
［摘要］ 目的:优选金樱根总黄酮的最佳提取工艺。方法:用正交试验法对金樱根总黄酮的半仿生法提取工艺进行优
选。考察提取温度、提取时间、料液比对总黄酮提取率的影响，采用分光光度法，在 505 nm 测定金樱根总黄酮的含量。结果:
最佳工艺为分别以 pH 2，7. 5，8. 3 的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液作为提取液，固液比 1∶ 20，恒温水浴温度 60 ℃，提取时间 20
min，总黄酮提取率达到 9. 67%，RSD 1. 52%，加样回收率为 97. 10%。结论:半仿生法提取金樱根总黄酮明显优于乙醇回
流法。
［关键词］ 金樱根;总黄酮;半仿生法;正交试验;提取工艺
［中图分类号］ R283. 6 ［文献标识码］ B ［文章编号］ 1005-9903(2012)03-0013-03
金樱根又名金樱菇、脱骨丹，是广西特色妇科中
药花红片的主味药材之一。《本草纲目》记载金樱
子“性酸、涩、平、无毒;主治脾泻下痢，止水便利，涩
精气，久服令人耐寒轻身，补血益精，有奇效［1］”。
金樱子富含黄酮类成分［2］，具有保护心血管系统、
抗菌及抗病毒、抗肿瘤、抗氧化清除自由基等多种生
物活性［3-4］。半仿生提取法［5-7］模仿口服药物在胃
肠道的转运过程，采用选定 pH 的酸性水和碱性水
依次连续提取，尽可能地提取和保留原药中的有效
成分，具有绿色环保、高效安全、能缩短生产周期、降
低生产成本等特点［8］。本文采用半仿生法提取金
樱根总黄酮，通过单因素试验和正交试验考对金樱
根提取工艺参数进行优选，为金樱根的开发利用提
供依据。
1 材料
金樱根购于宜州药材市场，经河池学院邓晰朝
副教授鉴定为为蔷薇科植物金樱子 Rosa laevigata
的根或根皮。芦丁(购于中国生物制品检定所，批
号 2010-A0103，含量 ＞ 98%)、无水乙醇、氢氧化钠、
亚硝酸钠、九水合硝酸铝、柠檬酸、磷酸氢二钠均为
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第 18 卷第 3 期
2012 年 2 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 3
Feb．，2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.03.002
分析纯。
FZ102 型微型植物粉碎机(天津市泰斯特仪器
有限公司) ，UV-2102PCS 型紫外分光光度计(尤尼
科仪器有限公司) ，AE240S 型电子分析天平(梅特
勒一托利多) ，PHS-3B 型精密 pH 计(上海精密科学
仪器有限公司)。
2 方法及结果
2 ． 1 黄酮含量测定
2. 1. 1 样品的制备及处理 金樱根粉碎，过 20 目
筛，准确称取 5. 0 g 至 250 mL 圆底顶烧瓶中，分别
加入 pH 2. 0，7. 5，8. 3 缓冲溶液，加热回流一定时
间，过滤，合并 3 次滤液至 500 mL 量瓶中，定容，
备用。
2. 1. 2 标准曲线的绘制 精确称取芦丁对照品 5
mg，用 50% 乙醇溶解，转移至 50 mL 量瓶中，制成
0. 1 g·L － 1的芦丁对照品溶液。分别吸取上述溶液
0. 0，1. 0，2. 0，3. 0，4. 0，5. 0 mL 于 25 mL 的比色管
中，用 50% 乙醇稀释至 10 mL，加入 5% NaOH 0. 3
mL，摇匀，静置 6 min，再加 10% Al(NO3)3 0. 3 mL，
摇匀，静置 6 min，然后加 1 mol·L － 1 NaOH 2. 0 mL，
用 50%乙醇定容至 25 mL，摇匀，静置 15 min。以空
白液作参比液，测定吸光度。
得回 归 方 程 Y = 0. 087X + 0. 000 2 (r =
0. 999 5) ，结果表明芦丁在 4 ～ 20 mg·L － 1与吸光度
线性良好。
2. 1. 3 总黄酮的含量测定 精确吸取金樱根提取
液 1 mL 于 25 mL 的比色管中，按照 2. 1. 2 的方法进
行显色，用空白的 NaNO2-A1(NO3)3 -NaOH 溶液调
零，在 505 nm 测吸光度，代入回归方程计算总黄酮
质量浓度。
2. 1. 4 回收率试验 精密量取已知总黄酮含量的
提取液 6 分，分别加入 0. 1 mL·g － 1芦丁对照品溶液
0. 5 mL，按 2. 1. 2 项下方法，测定吸光度，算出黄酮
提取率。结果见表 1。
表 1 金樱根总黄酮提取液芦丁加样回收率试验
样液总黄酮含量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回收率
/%
0． 381 3 0． 429 1 95． 60
0． 381 3 0． 429 1 95． 60
0． 403 0 0． 450 9 95． 80
97. 10
0． 403 0 0． 453 0 100． 00
0． 387 8 0． 435 6 95． 60
0． 387 8 0． 437 8 100． 00
注:芦丁加入量均为 0. 05 mg。
2. 1. 5 精密度试验 精确吸取提取液 1 mL 置于
25 mL 比色管中，按 2. 1. 2 项下方法测定平均吸光
度0. 175 5，RSD 0. 48%。
2. 2 单因素考察
2. 2. 1 固液比对总黄酮提取率的影响 精确称取
金樱根粉 5. 00 g，恒温水浴温度 60 ℃，固液比分别
1∶ 5，1∶ 10，1 ∶ 15，1 ∶ 20，1 ∶ 25，1 ∶ 30，分别用 pH 2. 0，
7. 5，8. 3 缓冲液各回流 10 min，冷却，过滤，合并 3
次滤液。按 2. 1. 2 方法测吸光度，计算总黄酮提取
率分 别 为 7. 192%，7. 248%，7. 354%，7. 889%，
8. 060%，7. 410%，固液比 1 ∶ 25 时总黄酮提取率最
大，故选择 1∶ 25。
2. 2. 2 温度对总黄酮提取的影响 精确称取金樱
根粉 5. 00 g，固液比 1 ∶ 10，分别在温度 30，40，50，
60，70 ℃，用 pH 2. 0，7. 5，8. 3 缓冲液各提取 10
min，冷却，过滤，合并 3 次滤液。按 2. 1. 2 方法，测
定吸光度，计算总黄酮提取率分别为 7. 628%，
7. 629%，7. 954%，7. 516%，7，194%。由结果可知
随温度的升高提取率增大，50 ℃是急剧增大，随后
再升高温度其提取率快速下降。综合各方面因素，
提取温度以 40 ～ 60 ℃为宜。
2. 2. 3 时间对总黄酮提取的影响 精确称取金樱
根粉 5. 00 g，恒温水浴温度 60 ℃，固液比 1 ∶ 10，用
pH 2. 0，7. 5，8. 3 的缓冲液各提取 10，20，30，40，50，
60 min，冷却，过滤，合并 3 次滤液。按 2. 1. 2 方法
测吸光度，结果总黄酮提取率分别为 7. 248%，
7. 781%，8. 062%，7. 574%，7. 083%，7. 030%，30
min 提取率最大。
2. 3 正交试验 对各单因素的固液比(A)、提取温
度(B)、提取时间(C)三因素对黄酮提取工艺进行
正交试验，并以总黄酮含量作为提取工艺的判断指
标。根据设置选用 L9(3
4)正交表，试验方案设计及
结果见表 2，3。
表 2 金樱根总黄酮提取工艺正交试验因素水平
水平
A
固液比
/ g·mL － 1
B
提取温度
/ ℃
C
提取时间
/min
1 1∶ 20 40 20
2 1∶ 25 50 30
3 1∶ 30 60 40
从结果可知影响因素主次 C ＞ B ＞ A，即提取时
间对金樱根总黄酮的提取结果影响最大，提取温度
次之，料液比的影响最小。通过正交试验得出最优
方案为固液比 1 ∶ 20，提取温度 60 ℃，提取时间 20
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中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 3
Feb．，2012
min，即 A1B3C3D1。
2. 4 验证试验 精确称取 5. 00 g 金樱根药粉，按
优选最佳工艺进行提取，冷却，过滤，合并 3 次滤液，
按 2. 1. 2 方法，测定吸光度，算出黄酮平均提取率
9. 67%，RSD 1. 52%，说明该工艺稳定。
表 3 金樱根总黄酮提取工艺正交试验安排
No． A D B C 黄酮提取率 /%
1 1 1 1 1 8. 39
2 1 2 2 2 8. 44
3 1 3 3 3 8. 66
4 2 1 2 3 8. 12
5 2 2 3 1 8. 72
6 2 3 1 2 8. 23
7 3 1 3 2 8. 17
8 3 2 1 3 8. 23
9 3 3 2 1 8. 50
K1 8 ． 50 8． 23 8． 28 8． 57
K2 8 ． 37 8． 46 8． 35 8． 28
K3 8 ． 30 8． 46 8． 52 8． 34
R 0． 59 0． 71 0． 70 0． 77
2. 5 乙醇提取法 称取样品 3. 00 g，用 95% 乙醇
100 mL 回流提取 3 h，过滤后定容为 100 mL，吸取
提取液 1 mL 置于 25 mL 比色管中，按 2. 1. 2 方法测
定吸光度，黄酮提取率分别为 0. 54%，0. 55%，
0. 56%，RSD 1. 82%。可知半仿生法提取金樱根中
总黄酮明显优于传统的浸提法。
3 结论
本文探讨半仿生法提取金樱根中总黄酮的工
艺，以磷酸氢二钠-柠檬酸为溶剂，在 pH 2. 0，7. 5，
8. 3 各提取 1 次，合并 3 次滤液。通过考察固液比、
提取时间、恒温水浴温度三因素，用正交试验确定了
最佳工艺为固液比(g·mL － 1)1 ∶ 20，恒温水浴温度
60 ℃，提取时间 20 min，总黄酮提取率达到 9. 67%，
RSD 1. 52%。
半仿生法在提取过程中保留较多的有效成分，
得到含药理指标高的活性混合成分，在提取金樱根
总黄酮明显优于传统的浸提法，是一种行之有效的
提取方法。
［参考文献］
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［责任编辑 仝燕］
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赖红芳，等:金樱根总黄酮提取工艺优选