全 文 ：◇药学研究◇
正交设计优选醉鱼草果实总三萜提取工艺
沈炳香1，吴德玲2，3，任亚硕2，3，王 权2，3
( 1．安徽医科大学附属六安医院，安徽 六安 237005; 2．安徽中医学院药学院，安徽 合肥 230031;
3．安徽省现代中药重点实验室，安徽 合肥 230031)
摘要:目的 优选醉鱼草果实总三萜的最佳提取工艺。方法 以醉鱼草果实总三萜提取率及浸膏得率为考察指标，采用正交试
验，对乙醇浓度(A)、提取时间(B)、提取次数(C)、料液比(D)4 个因素进行考察，筛选出最佳提取工艺。结果 优选出最佳提
取工艺为 80%乙醇，料液比 1∶10，回流提取 3 次，每次 1 h。结论 优选的提取方法适于醉鱼草果实总三萜的提取。
关键词:醉鱼草果实;总三萜;紫外分光光度法;提取工艺;正交试验
Orthogonal test for optimization of total triterpenoids extracting
procedure from the fruits of Buddleja lindleyana
SHEN Bing-xiang1，WU De-ling2，3，REN Ya-shuo2，3，et al
(1． Lu’an Affiliated Hospital of Anhui Medical University，Lu’an，Anhui 237005，China;2． College of Pharmacy，
Anhui University of Traditional Chinese Medicine，Hefei，Anhui 230031，China;3． Anhui Key Laboratory
of Modern Chinese Medicine，Hefei，Anhui 230031，China)
Abstract:Objective To optimize the extraction technology of total triterpenoids in the fruits of Buddleja lindleyana．Methods The ex-
traction rate of total triterpenoids and the yield of extractum were selected as the evaluating indexes． An orthogonal test was carried out to
observe the influences of the alcohol concentration(A) ，extraction hours(B) ，extraction times(C)and material-lipuid ratio(D)． Results
The optimized extraction technology for total triterpenoids from the fruits of Buddleja lindleyana was as follows:extracting with 10 times
80% alcohol，3 times reflux，and 1 hour per time． Conclusion The optimized extracting procedure is fit for the extraction of total triter-
penoids from the fruits of Buddleja lindleyana．
Key words:the fruits of Buddleja lindleyana;total triterpenoids;ultraviolet spectrophotometry;extracting procedure;orthogonal test
基金项目:安徽省教育厅基金重点项目(No KJ2011A185) ;安徽中医学
院自然科学基金项目(No 2010ZR009B)
通信作者:吴德玲，男，教授，硕士生导师，研究方向:中药有效成分和创
新药物研究，E-mail:dlwu7375@ sina． com
醉鱼草果实是马钱科植物醉鱼草(Buddleja lindleyana
Fort．)的果实，具有祛风除湿、止咳化痰、散瘀之功效［1］。本
课题组通过前期研究发现，醉鱼草果实中三萜类化合物种类
较多［2-3］，且具有神经细胞的保护活性［4-5］，并建立了分光光
度法测定醉鱼草果实中总三萜含量的方法。在以上实验的基
础上，本研究以总三萜提取率和浸膏得率为考察指标，采用正
交试验法，对其提取工艺进行优选，为后续研究奠定基础。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 UV-757CRT 型紫外—可见分光光度计(上海精
科) ;AB135-S 十万分之一分析天平(瑞士 METTLER TOLE-
DO) ;AS3120 超声清洗仪(天津奥特塞恩斯) ;HH-S恒温水浴
锅(江苏金坛市国胜实验仪器厂) ;FZ-02 型高速中药粉碎机
(温岭市百乐粉碎设备厂)。
1． 2 试药 齐墩果酸对照品(批号:110709-200505，中国药
品生物制品检定所) ;醉鱼草果实药材:采自安徽舒城万佛
山，经安徽中医学院药学院刘守金教授鉴定为马钱科植物醉
鱼草 Buddleja lindleyana Fort． 的果实;香草醛、冰醋酸、高氯
酸、甲醇、无水乙醇等均为分析纯;水为娃哈哈纯净水。
2 方法及结果
2． 1 醉鱼草果实总三萜的含量测定 醉鱼草果实总三萜含
量测定的常规方法以齐墩果酸等三萜化合物为对照品，用冰
醋酸—香草醛和高氯酸为显色剂，用紫外可见分光光度计测
定总三萜的含量。
2． 2 对照品溶液及供试品溶液的制备 对照品溶液:精密称
取在五氧化二磷减压干燥器中干燥 36 h 的齐墩果酸对照品
约 1． 47 mg，置 10 mL 量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即
得;对照品浓度为 0． 147 g·L －1。
供试品溶液:精密称取醉鱼草果实 2 g，转移至 50 mL 圆
底烧瓶中，加 95%乙醇 30 mL回流提取 1 h，放冷，过滤，滤液
转移至 100 mL容量瓶中，定容摇匀，即得。
2． 3 显色方法及检测波长的确定 分别精密吸取上述对照
品溶液 0． 30 mL、供试品溶液 0． 10 mL，置 10 mL具塞试管中，
60℃水浴中挥干，依次加入新配制的 5%香草醛-冰醋酸溶液
0． 20 mL，高氯酸 0． 80 mL 混匀，密塞，于 60℃水浴中加热 20
min，取出，冷却至室温后，加入冰醋酸 5． 00 mL，混匀，用紫外
分光光度仪进行全波长扫描，结果显示对照品及供试品溶液
在 540 nm波长处有最大吸收峰，因此选择 540 nm 作为测定
波长。
2． 4 标准曲线的绘制 分别精密吸取对照品溶液 0、0． 10、
0． 30、0． 50、0． 70、0． 80、1． 00 mL，至 10 mL 具塞磨口试管中，
按“2． 3”所示方法在 540 nm处，以 0 mL为空白对照测定其吸
光度。以对照品浓度(mg·L －1)X 为横坐标、吸收度 Y 为纵
坐标绘制标准曲线:Y = 0． 059 4X － 0． 037 9，R2 = 0． 999 8。在
·681· 安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2013 Feb; 17( 2)
2． 45 ～ 24． 5 mg·L －1的浓度范围内，样品的吸光度与浓度呈
良好的线性关系。
2． 5 提取溶剂的选择 精密称取醉鱼草果实粉末 2 g，分别
量取 50%、65%、80%、95%乙醇及甲醇 5 种提取溶剂 30 mL，
对其进行提取，计算其总三萜提取率及浸膏得率。结果见表 1。
表 1 不同提取溶剂总三萜提取率和浸膏得率的比较
乙醇浓度 /% 总三萜提取率 /% 浸膏得率 /%
50 1． 41 9． 14
65 2． 98 15． 90
80 3． 01 15． 23
95 3． 15 14． 67
甲醇 3． 21 13． 12
从表 1 可以看出，随着乙醇浓度不断加大，总三萜提取率
升高;甲醇提取与 95%乙醇提取效果相当，考虑到试剂的成
本以及安全性，选用乙醇作为提取溶剂。
2． 6 提取方法的选择 考察浸渍提取、超声提取、回流提取
和索氏提取四种提取方法的总三萜提取率及浸膏得率，以确
定合适的提取方法。
2． 6． 1 浸渍提取 精密称取醉鱼草果实 2 g，转移至 50 mL
圆底烧瓶中，加 95%乙醇 40 mL浸渍 24 h，过滤后定容至 100
mL容量瓶中，根据“2． 4”步骤绘制的齐墩果酸标准曲线，测
定其总三萜提取率;同时精密量取 50 mL，水浴挥干后，置
105℃烘箱中烘至恒重，计算浸膏得率。
2． 6． 2 超声提取 精密称取醉鱼草果实 2 g，转移至 50 mL
圆底烧瓶中，加 95%乙醇 40 mL于最大功率超声提取 30 min，
测定总三萜提取率及浸膏得率。
2． 6． 3 回流提取 精密称取醉鱼草果实 2 g，转移至 50 mL
圆底烧瓶中，加 95% 乙醇 40 mL，80℃水浴中回流提取 30
min，测定总三萜提取率及浸膏得率。
2． 6． 4 索氏提取 精密称取醉鱼草果实 2 g，转移至索氏提
取器中，加 95%乙醇 80 mL，提取 4 h，测定总三萜提取率及浸
膏得率。实验结果见表 2。从表 2 可以看出，4 种提取方法比
较:索氏提取 ＞回流提取 ＞超声提取 ＞浸渍提取，索氏提取效
果最好，但所用提取溶剂最多，耗时较长。回流提取较超声提
取和浸渍提取效果好，且回流提取 30 min 尚未提取完全，综
合考虑，回流提取为较佳工艺。故对其进行正交设计，以期提
高醉鱼草果实总三萜的提取率。
表 2 不同处理方法总三萜提取率和浸膏得率比较
提取方法 总三萜含量 /% 浸膏得率 /%
浸渍提取 2． 84 9． 13
超声提取 3． 14 11． 57
回流提取 3． 44 12． 80
索氏提取 3． 97 15． 25
2． 7 正交试验设计
2． 7． 1 因素水平表 根据相关文献报道［6-7］，三萜类的理化
性质，以及单因素考察实验的结果，分别选定乙醇回流提取的
4 个条件:乙醇浓度(A)、提取时间(B)、提取次数(C)、料液
比(D)。见表 3。
表 3 正交实验因素水平表
水平
因素
乙醇浓度
A /%
提取时间
B /h
提取次数
C /次
料液比
D /倍
1 65 1 1 8
2 80 1． 5 2 10
3 95 2 3 12
2． 7． 2 正交试验结果 精密称取醉鱼草果实粗粉 2 g，按
L9(3
4)正交实验表进行实验(平行 3 次，取平均值)。按
“2． 3”步骤的方法测定总三萜提取率，并精密量取 50 mL 提
取液测浸膏得率。正交试验结果见表 4，方差分析结果见表 5。
表 4 正交试验设计与结果
实验号
因素
A B C D
总三萜
含量 /%
浸膏
得率 /%
1 1 1 1 1 2． 17 10． 07
2 1 2 2 2 3． 14 18． 36
3 1 3 3 3 3． 64 24． 76
4 2 1 2 3 3． 58 19． 55
5 2 2 3 1 3． 85 19． 99
6 2 3 1 2 2． 94 12． 97
7 3 1 3 2 4． 38 21． 73
8 3 2 1 3 3． 53 13． 86
9 3 3 2 1 3． 35 14． 77
K1 2． 983 3． 377 2． 880 3． 123
K2 3． 457 3． 507 3． 357 3． 487
K3 3． 753 3． 310 3． 957 3． 583
R 0． 770 0． 197 1． 077 0． 460
K1’ 17． 730 17． 117 12． 300 14． 943
K2’ 17． 503 17． 403 17． 560 17． 687
K3’ 16． 787 17． 500 22． 160 19． 390
R’ 0． 943 0． 383 9． 860 4． 447
表 5 方差分析结果
指标 因素 偏差平方和 自由度 F P
总三萜
提取率
A 0． 905 2 15． 083
B 0． 060 2 1． 000
C 1． 746 2 29． 100 ＜ 0． 05
D 0． 353 2 5． 883
误差 0． 06 2
浸膏
得率
A 1． 455 2 6． 113
B 0． 238 2 1． 000
C 146． 047 2 613． 643 ＜ 0． 05
D 30． 200 2 126． 891 ＜ 0． 05
误差 0． 24 2
注:F0． 05(2，2)= 19
由表 4 直观分析得，四个因素中，提取次数(C)对总三萜
提取率影响最大，其次是提取溶剂(A)和料液比(D) ，影响最
小的是提取时间(B)。从总三萜提取率看，不同浓度的乙醇
回流提取的最佳工艺为 A3 B1 C3D2，即乙醇浓度为 95%，提取
3 次，每次 1 h，料液比 1∶10。由方差分析表 5 可知，提取次数
因素差异有显著性。另从浸膏得率看，最佳提取工艺为 A1B3
C3 D3，即 65%乙醇，提取 3 次，每次 2 h，料液比 1∶12。提取次
·781·安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2013 Feb; 17( 2)
氨基葡萄糖中空栓剂的制备与质量控制
吴德敏，金 涌，蒋培培，余 芳，余 庆，许 曼
( 安徽医科大学药学院，安徽 合肥 230032)
摘要:目的 制备氨基葡萄糖中空栓，并建立其质量控制方法。方法 以半合成脂肪酸甘油酯为基质制备中空栓，采用邻苯二
甲醛(OPA)柱前衍生 HPLC法测定其中氨基葡萄糖含量及累积溶出度，检测波长为 330 nm。结果 氨基葡萄糖在 1 ～ 50 mg·
L －1范围内线性关系良好(r = 0． 999 8) ，平均回收率为 99． 73%(RDS = 0． 85%)。中空栓含量符合要求，体外溶出迅速，中空栓
剂在 20 min内累积溶出率达 98． 51%。结论 该制剂制备工艺简单易行，质量可控。中空栓剂比普通栓剂释药速度更快。
关键词:氨基葡萄糖;中空栓;制备;质量控制;溶出度
Preparation and quality control of glucosamine hollow suppository
WU De-min，JIN Yong，JIANG Pei-pei，et al
(School of Pharmacy，Anhui Medical University，Hefei 230032，China)
Abstract:Objective To prepare and establish quality control for the glucosamine hollow type suppository． Methods The hollow type
suppository was prepared with semi-synthetic fatty acid esters of glycerol as ground substance． The content of glucosamine was determined
by HPLC system with o-phthalaldehyde precolumn derivatization at the wavelength of 330 nm． Results The linear range of glucosamine
was 1 ～ 50 mg·L －1(r = 0． 999 8) ，with an average recovery rate of 99． 73%(RDS = 0． 85%)． The hollow type suppository was up to
the quality of content standard，and it released quickly． The hollow type suppository released 98． 51% in vitro for 20 minutes． Conclusion
This preparation is simple and feasible in technology and controllable in quality． Drug release rate of hollow type suppository is higher
than the conventional type suppository．
Key words:glucosamine;hollow suppository;preparation;quality control;dissolution rate
氨基葡萄糖是一种天然的氨基己糖，可特异性地作用于
通信作者:金 涌，男，博士，教授，研究方向:药剂学，药动学，E-mail:
jyayd@ sina． com
关节软骨，刺激软骨细胞产生有正常多聚体结构的蛋白多糖，
维护软骨基质的形态结构。大量临床研究表明，氨基葡萄糖
具有抗骨关节炎等作用［1］。近年来，氨基葡萄糖广泛应用于
数、料液比因素差异有显著性。通过两方面的综合考虑，确定
醉鱼草果实总三萜的最佳提取工艺为 A2B1C3D2，即 80%乙
醇，回流提取 3 次，每次 1 h，料液比 1∶10。这样既能保证总三
萜的转移率，也能在一定程度上提高浸膏得率，并在节约实验
成本，缩短实验周期方面都有一定的优势。
2． 8 验证试验 精密称取醉鱼草果实粉末 2 g，按优化的提
取工艺条件提取，平行 3 次。结果表明:正交试验优化的工艺
稳定、可行。结果见表 6。
表 6 验证试验
序号
总三萜提
取率 /%
平均提
取率 /%
RSD
/%
浸膏得
率 /%
平均得
率 /%
RSD
/%
1
2
3
4． 67
4． 74
4． 62
4． 68 1． 29
22． 05
22． 08
22． 05
22． 06 0． 08
3 讨论
本课题组前期研究表明，醉鱼草果实中含有丰富的三萜
类成分，且大多具有较好的药理活性，而关于醉鱼草果实总三
萜提取工艺的研究尚未有文献报道。前期研究从醉鱼草果实
中得到的单体化合物大多为五环三萜类成分，齐墩果酸是常
见的五环三萜类化合物，因此本实验以齐墩果酸为对照品考
察醉鱼草果实总三萜的提取率。
本实验正交设计的结果发现，醉鱼草果实总三萜与浸膏
得率两个参考指标的最佳提取溶剂结果不完全统一，可能是
由于三萜类成分大多为脂溶性成分，故 95%乙醇提取时，总
三萜提取率较高;而醉鱼草果实中还可能含有一些水溶性三
萜皂苷，此时 95%乙醇不易提取，故以浸膏得率作为考察指
标时，最佳提取溶剂为 65%乙醇提取;综合以上两方面因素
考虑，选定 80%乙醇为醉鱼草果实总三萜的最佳提取溶剂。
本研究通过正交试验优选出最佳提取工艺为:80%乙醇，
料液比 1∶10，回流提取 3 次，每次 1 h。实验结果表明，该工艺
提取率高，重现性好，回收率高，方法简便，为对醉鱼草果实中
总三萜类成分进行进一步的研究和开发提供依据。
参考文献:
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重庆中草药研究，2009，30(1) :14 － 16，22．
(收稿日期:2012 － 09 － 19，修回日期:2012 － 10 － 30)
·881· 安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2013 Feb; 17( 2)