全 文 ：由表 4 和表 5 可 以看出 , 紫外分光光度法无论是本身的准确度 , 抑或与 皮 粉 法 相
比 , 其测定的绝对误 差均在允许范围内 , 完全能够满足对拷胶单宁含量的测定要求 。
结 语
我们用蔡司通用分光光度计测定了 国产三种凝缩类拷胶的单宁含量 , 并与皮粉法进
行了对比试验 。 通过试验 , 我们有以下几点看法 :
1
. 紫外分光光度法测定拷胶溶液的单宁含量具有选择性 , 表现在对于水解类拷胶
不显示极大的特征吸收峰 。 因此 , 用其无法测定该类拷胶的单宁含量 。 然而 , 在测定凝
缩类拷胶时 , 却显示出明显 的最大特征峰 。 故可用紫外分光光度法测定国产凝缩类拷胶
的单宁含量 。
2
. 与皮粉法相比 , 紫外光度法具有快速准确的优点 。 测定一个样品只需 30 分钟 , 而
皮粉法却需 2 4一 36 小时 。 另外 , 用皮粉法测定 , 不仅吸收单宁 , 而且还吸收部分非单宁
物质 , 而紫外分光光度法的最大光密度只由单宁含量多少决定 , 而与非单宁无关 。 所以
紫外分光光度法能够更为准确的测定单宁含量 。 因此可以说 , 该法是一种多快好省的分
析方法 , 可以代替皮粉法用于分析测定凝缩类拷胶或揉液的单宁含量 。
3
. 紫外分光法可以分析某些用皮粉法无 法测定的含单宁量微小的溶液 , 如废渣浸
提液、 废揉液等 。
4
. 用紫外分光法分析拷胶溶液尚有如下局限性 , 例如 : 当设有纯的单宁作已知标
准样时 , 尚需用皮粉法标定 ; 除分析单宁含量外 , 而无法测定其它项 目 。
参
〔 1 〕 R o u x , D 。 G . , J A L C A
考 文 献
5 2 , 3 19 ( 19 5 7 )
。
〔 2 〕 G r e i f e n e r , J . G . , a n d K . W . B r o w n e . JA L C A , 6 2 , 6了0 ( 19 6了) .
〔 3 〕 中国科学院数学研究所 , 回归分析方法 , 科学出版社 , 19 7 4 , 5一 12 页 。
快速测定柞树叶凝缩类单宁的光谱分析法
由于植物单宁影响了食品的可 口 性 , 阻碍微生物 、 真菌和昆虫的生长 , 对小鸡和哺
乳动物的毒性 , 逐渐受到了重视 。 因此在一些研究场合迫切需要快速测定植物组织内单
宁含量 。
定量分析单宁传统方法如皮粉分析法和 L 6 w a nt h al 法有几个缺点 : 包括极费时 、 缺
乏专一性和依赖于植物组织内的水抽出物 , 它不能真正测定出单宁的含量 。 快速色层分
离谱法和光谱分析法已成功地应用于植物内简单酚的测定 。 但经证实它不可能从均匀纸
或薄层分离谱斑点上更多地洗提柞树叶内凝缩类单宁的微小的含量 。 虽 然用连续窄条洗
提在数量上可以从色层分离谱里得出水解单宁 , 但是凝缩类单宁不能从纤维素洗掉 , 大
量地 留在原处。 依赖于洗提酚类物料的分析方法 , 不论用或不用着色剂进行 光 谱 分 析
一 4 5 一
时 , 是不适用于测定凝缩类单宁 。
B r ad if le d和 F l。 。 d发现了在色层 分离谱斑点上简单酚量与分光光度计细胞 样本 内
切去斑纹后的直接光吸收读数之间的定量关系 。 由于原有的单宁浓度用显影试制形成不
匀颜色斑纹还不如简单的斑纹好 , 因此上述方法不适于测定柞树叶内凝 缩 类 单 宁 。 象
R e id 对烟叶萃取物那样切去斑纹的光电扫描也产生同样的障碍 。 也试 过 P r 王d h a m 的偶
氮染料法 , 但发现从柞树单宁中用重氮化了的硝基苯胺获得的橙色染料不能用甲醇化钾
洗提 。 由于凝缩类单宁对纤维 、 聚酞胺纤维凝胶 、 氧化铝和 S e p h a de x 的不可逆吸收 , 因此
圆柱色层分离方法被发现不适用于凝缩类单宁定量的测定 。 虽然个别单宁的定性制备按
S o m e r s法用过 S e p h a d e x 圆柱 ,但对凝缩类单宁不易测出其量 , 而是由于有些损失在圆柱
内 。 F 。 e n y 和 B o s t 。 。 k所采用的 比重乙醚沉淀法测定柞树叶萃取物内的单宁的含量是令
人厌烦的 , 并且它需要大量的乙醚 。 因此不适用于快速测定柞树叶萃取物内的单宁含量 。
下面所述的方法用硫酸溶解全被切去的条纹 , 克服了从纸色层分离谱洗提凝缩类单
宁的困难 。 用酸对单宁的递降分解产生了着色的溶液 , 它的强度可用色层分离谱法进行
测定 , 同时可用来测定原单宁浓度 。
试 验
两种方法纸色层分离谱 ( W h at m a n N o l ) 的起点应用新鲜植物原料的丙酮水溶液
萃取物样品 , 然后将这些纸色层分离谱在 2 %醋酸和正丁醇 : 醋酸 : 水 ( 6。 : 15 : 25 )溶剂
显色 , 以便从凝缩类单宁分离出水解类单宁和单体酚物质 。 纸色层分离谱干燥后 , 一个
啧上 F e C 1 3或 K , F e ( C N ) 。试剂使它显露出凝缩类单宁条纹的位置 。 将含有凝缩类单宁的
长方形面积从剩余的纸色层 分离谱上 ( 未喷的 ) 切割开来 , 将它与长方形纸色层分离谱
同大小的放在一起作空白试验 。 把这些长方形的纸色层分离谱置于 60 ℃的水浴锅内的试
管里 , 加进 2毫升的硫酸 ( 65 % 体积比水 ) 。 4 分钟后 , 经偶尔振荡置于 O ℃ 的冰水内冷
却 。 在这温度下几小时内颜色保持不变 , 颜色强度可从 4 65 毫微米 ( 与空白对比 )读出 ,
原样品内的凝缩类单宁含量从标准曲线即从含有已知单宁的色层分离谱制出的曲线确定
下来 。 4 65 毫微米吸收的与原样品内凝缩类单宁重量之 间的关系根据 B e e r定律 , 最 少达
2 毫克单宁 ( 表 1 ) 。
表 1 凝缩类单宁分解产物的标准曲线数据
应用在色层分离谱的单宁 (毫克数 ) { 在 6。拓 v( / v )硫酸
, 的吸收谱
,0
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1
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.U “ … 。 · 21 “
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书 从 4 65 毫微米读出来的数据
0
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5 5
0
。
86
1
。
0 6
讨 论
根据从单宁分解产物产生的最 大的颜色显色来选择时间 、 温度和酸浓度条件 , 同时
还要防止纤维素碳化以免 妨碍测定 。 在 70 ℃时纤维素碳化得快 , 而在 50 ℃时单宁的分解
相当慢 , 颜色显色不太明显 。 在 60 O c 时经 4 分钟后可控制住纤维素完全溶解使之成为尤
色溶液 。 8 分钟后这些溶液由于碳化而开始变黑 , 但是若在 4 分钟后使溶液冷却 , 则可
在 ) L小时内仍能防止纤维素分解产物变色的形成 。
根据」介呵情况 , 从柞树叶萃取出来的单宁使之发生红颜色溶液 , 最高可见吸收谱在
46 5毫微米 土 l 毫微米 ( 图 l ) 。 虽然凝缩类单宁在酸的作用下进一步聚合形成 无 定形
的红粉 , 但分解产物的正式性质是不清楚的 。 从柞树叶凝缩类单宁产生的氰定经稀酸处
理后 , 在 65 %的硫酸溶液内在 5 06 毫微米 士 1毫微米时具有最高的吸收谱 。 这种吸 收 谱
不受纤维素分解产物存在的影响 , 因此从单宁得来的在 4 “ 毫微米的吸收谱最高值 不 是
由氰定引起的 。 在 E . H a s la m 的 建议下 , 按上述的分析条件检验了葡萄糖和儿茶酸之 l可
的反应确定未知 的颜色种类是否来 自于葡荀糖的酸催化缩合和酚反应形成醒甲基化物结
构式 。 从溶解在0 . 5毫克的D 一儿茶酸和 10 毫克的 D一葡萄糖 ( 溶解在 3 毫升 65 % v / v 硫
酸水溶液 , 在 60 ℃时保持 4 分钟 ) 获得的溶液光谱 , 在 4 65 毫微米 士 I 毫微米 的可 见 范
围显示了单一的吸收高峰 。 在同样条件下由凝缩类单宁和纤维素获得的这些吸收高峰的
同一性提供了如下的证据 , 分析方法所用的着色产物 , 实际上可以 由儿茶酸和葡萄糖之
间的缩合而形成 , 儿茶酸和葡萄糖本身是由单宁和纤维素分解出来的。
图 1 斑 2 毫升65 书 ( V / V ) 硫酸溶解的纸色层分离条纹 ( 含有 1 . 2毫克柞树 凝 缩
类单宁 ) 得到的溶液吸收光谱 , 与 65 多 ( V / V ) 的硫酸空白试验对比之读数 。
本方法是 以纸上色层分离谱上测定凝缩类单宁 , 精确度达 0 . 2毫克或低刁: 0 . 2毫克 。
虽然本方法灵敏度低」二其他可测定简单酚的许多方法 , 但它用来快速测定柞树叶萃取物
内的凝缩类单宁 的含量已足够精确 了。 虽然根据不同的植物来源 , 有关的光谱可能有少
许变化 , 但由于从其它植物种类的凝缩类单宁有同样的性质 , 包括酸对单宁的性质 , 认
为本方法在一般情况下 一可广泛用在植物萃取物的单宁分析上 。 根据它的精确性 、 速度和
专一性 , 本方法 用来测定凝缩类单宁比其它方法具有更大的优点 。
〔刘南杰译 自 A n a l C h e m . 19 6 9 , 4 1( 10 ) 13 4 7~ 13 4 8〕
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