全 文 ：Science of Sericulture 蚕业科学
收稿日期:2015 － 10 － 22 接受日期:2015 － 11 － 25
资助项目:现代农业产业技术体系建设专项(No． CAＲS-22) ，辽宁省
科技厅农业攻关计划项目(No． 2014209001)。
第一作者信息:王林美(1966—)，女，副研究员。
Tel:0411-84790092，E-mail:wlm660925@ 126． com
通信作者信息:李树英，研究员。
E-mail:13804965751@ 163． com
* Corresponding author． E-mail:13804965751@ 163． com
2016，42(2) :0331 － 0335
ISSN 0257 － 4799;CN 32 － 1115 /S
DOI:10． 13441 / j． cnki． cykx． 2016． 02． 021
柞树叶提取液的体外抑菌活性试验
王林美1 岳冬梅1 夏兴宏2 李树英1
(1辽宁省农业科学院大连生物技术研究所，辽宁 大连 116024; 2辽宁省蚕业科学研究所，辽宁 凤城 118100)
摘 要 以不同浓度乙醇和水为提取介质，浸提柞树叶中的抑菌活性成分，获取对食源性细菌有抑制作用的柞树叶提取液。
采用抑菌圈法分别检测不同提取介质获取柞树叶提取液在不同溶液 pH值和不同处理温度条件下，对痢疾志贺氏菌、金黄色
葡萄球菌、普通变形杆菌、大肠杆菌、肠道沙门氏菌 5 种目标细菌的体外抑制作用，同时观察柞树叶提取液对新鲜果蔬的防腐
保鲜效果。结果显示，采用不同提取介质获得的柞树叶提取液在体外对 5 种目标细菌的生长均有抑制作用，以 75%乙醇作介
质获得的提取液的抑菌效果最好(P ＜ 0. 05);酸性条件及热处理能在一定程度上增强柞树叶提取液的抑菌效果，pH 为 8 时，
抑菌活性稍有减弱，温度为 100 ℃时，抑菌效果显著;柞树叶提取液可延长果蔬的储藏保鲜期。试验结果初步提示:柞树叶提
取液在体外对食源性细菌的生长有较强的抑制作用，有望进一步开发为天然食品防腐剂。
关键词 柞树叶;提取液;抑菌活性;防腐
中图分类号 S889 + . 1 文献标识码 A 文章编号 0257 － 4799(2016)02 － 0331 － 05
In vitro Bacteriostatic Test of Querus mongolica Fisch Leaf Extract
Wang Linmei1 Yue Dongmei1 Xia Xinghong2 Li Shuying1*
(1Dalian Institute of Biotechnology，Liaoning Academy of Agricultural Sciences，Dalian Liaoning 116024，China;2The
Sericultural Ｒesearch Institute of Liaoning Province，Fengcheng Liaoning 118100，China)
Abstract The Querus mongolica Fisch leaf extract which has inhibitory effect on food-borne bacteria was acquired by
extracting its antibacterial active ingredients with different concentrations of ethanol and water as extraction medium． In
vitro bacteriostatic effects of the Q． mongolica Fisch leaf extract obtained with different extraction medium on five target
bacteria Shigella dysenteriae，Staphylococcus aureus，Proteus vulgaris，Escherichia coli and Salmonella enterica at dif-
ferent pH values of solution and different treatment temperatures were investigated by bacteriostatic circle method，and
the antisepsis and fresh-keeping effects of the leaf extract on fresh fruits and vegetables were observed as well． The re-
sults showed that the leaf extracts obtained with different extraction media could inhibit the growth of these five kinds of
target bacteria in vitro． Among them，the extract obtained with 75% ethanol had the best bacteriostasis effect (P ＜
0. 05)． Acidic condition and heat treatment could strengthen the bacteriostatic effect to a certain extent． The bacterio-
static activity was weakened slightly at the pH value of 8，while the leaf extract exhibited better effect at the temperature
of 100 ℃． In addition，the leaf extract could prolong the freshness period of fruits and vegetables． According to the pre-
liminary results，it is suggested that the Q． mongolica Fisch leaf extract had strong inhibitory effect on the growth of food-
borne bacteria in vitro，and it is expected to be further developed as natural food preservatives.
Keywords Querus mongolica Fisch leaf;Extract;Antib-
acterial activity;Anticorrosion
柞树(Querus mongolica Fisch)为壳斗科(Fagaceae)
栎属(Quercus)落叶乔木，少数为灌木。我国柞
林面积约 700 万 hm2，广泛分布于东北、华北以及内
蒙古等地区，资源十分丰富［1 － 2］。柞树叶为柞蚕主要
332 蚕 业 科 学 2016;42 (2)
饲料，其富含粗蛋白、粗脂肪、粗灰分、粗纤维、矿物质
元素、维生素等营养成分以及单宁、黄酮类等生物活
性物质［3 － 4］，具有清热利湿、解毒、抗氧化、抗肿瘤、抗
癌变、护肝利脾和提高免疫力等功效［5］。很早以前柞
树叶就被应用于食品、药品或易于降解的食品包装材
料，另外，柞树叶还可发酵分解成棕黑色呈中性的有
机肥料［6］。近年来，随着对绿色有机食品生产与储藏
的要求越来越高，在天然资源中寻找活性物质代替化
学食品防腐剂成为食品工业的热门课题。本课题组
以柞树叶为原料，采用乙醇和水为介质提取抑菌活性
物质，并研究柞树叶提取液的体外抑菌作用及对新鲜
果蔬的防腐保鲜效果，为柞树资源的综合开发利用寻
求新途径。
1 材料与方法
1. 1 材料
柞树叶(辽东栎，Quercus wutaishansea Mary)于
夏季采自辽宁省凤城市，用清水清洗后 25 ℃阴干，
粉碎过 40 目筛，－ 20 ℃冰箱中保存。
供试菌株痢疾志贺氏菌［Shigella dysenteriae，CM-
CC(B)51105］、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，
ATCC25923)、普通变形杆菌［Proteus vulgaris，CMCC
(B)49027］、大肠杆菌(Escherichia coli，ATCC25922)、肠
道沙门氏菌(Salmonella enterica，ATCC14028)，均购自
中国普通微生物菌种保藏管理中心。
1. 2 柞树叶抑菌活性物质提取
从 －20 ℃冰箱中取出柞树叶粉，按料液质量浓
度 66. 7 g /L，分别加入去离子水、65%乙醇、75%乙
醇、85%乙醇、95%乙醇，20 ℃浸提 12 h，浸提 3次，合
并提取液，过滤，3 000 r /min 离心 10 min，得到浸提
液。用去离子水将去离子水组浸提液稀释至 0. 01 g /
mL。将不同浓度乙醇浸提组的浸提液 60 ℃回流浓
缩至原体积的 6. 67%，得到第 1 次浓缩液，向第 1 次
浓缩液中加入其 10 倍体积的去离子水，60 ℃回流浓
缩至第 1次浓缩液的体积，得到质量浓度为 1 g /mL
的浓缩液，再用去离子水稀释至 0. 01 g /mL，过滤，将
滤液装入截留分子质量 5 000 kD 的超滤膜装置内，
0. 05 ～0. 08 MPa下过滤，得到柞树叶提取液。
1. 3 培养基配制
营养琼脂培养基配制:将牛肉膏 3 g、蛋白胨 10
g及氯化钠 5 g 溶解于 1 000 mL 蒸馏水中，用 150
g /L氢氧化钠溶液调 pH 至 7. 2 ～ 7. 4，加入 20 g 琼
脂，加热煮沸使琼脂融化，分装于烧瓶内，并于 121
℃下高压灭菌 15 min［7］。营养肉汤培养基的配制:
将牛肉膏 3 g、蛋白胨 10 g 及氯化钠 5 g 溶解于
1 000 mL蒸馏水中，调节 pH至 7. 4，分装于各试管、
烧瓶内，121 ℃下高压灭菌 15 min［7］。
1. 4 菌悬液制备
将供试菌株用相应的斜面培养基活化培养 24
h，用接种环挑取一环菌体放入装有无菌 9 g /L NaCl
溶液的锥形瓶中，充分摇匀，用血球计数板计数，配
制成浓度为 5 × 106 CFU /mL的菌悬液备用。
1. 5 抑菌试验及抑菌活性测定
在直径为 9 cm的培养皿中加入 15 mL营养肉汤
琼脂培养基，分别吸取上述各种菌悬液 0. 5 mL 加入
培养基中，混匀，凝固后每个培养皿等距离放置 5 个
灭菌牛津杯，于其中分别滴加 0. 2 mL柞树叶提取液，
对照滴加无菌 9 g /L NaCl溶液，每种供试菌设置 5个
平行试验，普通变形杆菌在 30 ℃，其余菌种在 37 ℃
条件下培养 24 h，移去牛津杯，测量各组试验的抑菌
圈直径。试验重复 3次，取平均值。
1. 6 提取液 pH 和处理温度对抑菌效果影响的单
因素试验
1. 6. 1 提取液 pH 的影响试验 用 0. 1 mol /mL
HCl溶液和 0. 1 mol /mL NaOH 溶液将 75%乙醇柞
树叶提取液配制成 pH值分别为 4. 0、5. 0、6. 0、7. 0、
8. 0 的样品溶液，重复“1. 5”的试验操作，比较不同
pH值的柞树叶提取液的抑菌活性。每组试验重复
3 次，取平均值。
1. 6. 2 处理温度的影响试验 分别取 75%乙醇作
介质提取获得的柞树叶提取液 0. 2 mL 放入 5 支灭
菌试管中，将试管分别置于 40、60、80、100 ℃水浴和
121 ℃湿热条件下处理 15 min 后，重复“1. 5”的试
验操作，比较不同温度柞树叶提取液的抑菌活性。
每组试验重复 3 次，取平均值。
1. 7 防腐保鲜试验
将供试的新鲜青椒、番茄、黄瓜、樱桃和葡萄洗
净、沥干后，放入 20 倍稀释的 75%乙醇作介质提取
获得的柞树叶提取液中浸泡 5 min，取出晾干，装入
无菌、干燥的托盘中，每个处理重复 5 次，28 ℃阴凉
处存放 7 d。观察记录果蔬样品的变化。
1. 8 数据统计处理
采用 SPSS 19. 0 软件对试验数据进行 Duncan’s
多重分析，试验数据以平均值 ±标准差(x ± s)表示。
第 2 期 王林美等:柞树叶提取液的体外抑菌活性试验 333
2 结果与分析
2. 1 不同提取介质获得柞树叶提取液的抑菌活性
比较
由表 1 可知，以水或乙醇作提取介质获得的柞
树叶提取液对 5 种食源性有害细菌均有较好的抑
制作用。相对于水提取液来说，乙醇提取液的体
外抑菌效果更好，尤其是用 75%乙醇提取获得的
柞树叶提取液的抑菌效果最佳，与其他几组柞树
叶提取液的抑菌活性相比有统计学差异(P ＜
0. 05)。以 75%乙醇提取获得的柞树叶提取液对
5 种细菌的体外抑制作用由强到弱依次为:痢疾志
贺氏菌、金黄色葡萄球菌、普通变形杆菌、大肠杆
菌、肠道沙门氏菌。
表 1 不同提取介质获得柞树叶提取液对 5 种细菌的体外抑制活性比较(x ± s，n = 15)
Table 1 A comparison on in vitro inhibitory effect of Querus mongolica Fisch leaf extracts obtained with different extraction media on 5
kinds of bacteria (x ± s，n = 15)
供试菌株
Tested strain
不同提取介质获得提取液的抑菌圈直径 / cm
Bacteriostatic circle diameter of extracts obtained with different extraction media
去离子水
Deionized water
65%乙醇
65% ethanol
75%乙醇
75% ethanol
85%乙醇
85% ethanol
95%乙醇
95% ethanol
金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus 1. 32 ± 0. 19 1. 32 ± 0. 21 1. 64 ± 0. 32* 1. 46 ± 0. 25 1. 48 ± 0. 29
大肠杆菌 Escherichia coli 1. 35 ± 0. 15 1. 25 ± 0. 23 1. 56 ± 0. 26* 1. 38 ± 0. 18 1. 46 ± 0. 22
普通变形杆菌 Proteus vulgaris 1. 41 ± 0. 24 1. 30 ± 0. 14 1. 58 ± 0. 27* 1. 45 ± 0. 21 1. 42 ± 0. 20
痢疾志贺氏菌 Shigella dysenteriae 1. 44 ± 0. 22 1. 41 ± 0. 21 1. 92 ± 0. 33* 1. 55 ± 0. 28 1. 75 ± 0. 32
肠道沙门氏菌 Salmonella enteria 1. 25 ± 0. 13 1. 05 ± 0. 08 1. 46 ± 0. 19* 1. 17 ± 0. 11 1. 07 ± 0. 09
* 代表 P ＜ 0. 05，差异有统计学意义。表 2 ～ 3 同。
* represents P ＜ 0. 05，and the difference was statistically significant． The same in Table 2 and 3.
2. 2 柞树叶提取液的 pH值对抑菌活性的影响
柞树叶提取液的 pH对其抑菌活性有一定的影
响，对 5 种细菌都表现为偏酸性条件下的体外抑菌
效果较好，当 pH 达到 8 时，抑菌活性稍有减弱，与
提取液在其他 pH值条件下的抑菌活性相比有统计
学差异(P ＜ 0. 05) (表 2)。因此，柞树叶提取液不
仅可用于酸性食品的储藏保鲜，还可以用于弱碱性
食品的储藏。
表 2 不同 pH值的柞树叶提取液的体外抑菌活性比较(x ± s，n = 15)
Table 2 A comparison on in vitro inhibitory effect of Querus mongolica Fisch leaf extracts of different pH values (x ± s，n = 15)
pH值
pH value
抑菌圈直径 / cm Bacteriostatic circle diameter
金黄色葡萄球菌
Staphylococcus aureus
大肠杆菌
Escherichia coli
普通变形杆菌
Proteus vulgaris
痢疾志贺氏菌
Shigella dysenteriae
肠道沙门氏菌
Salmonella enteria
4. 0 2. 03 ± 0. 23 1. 91 ± 0. 25 1. 98 ± 0. 31 2. 24 ± 0. 29 1. 89 ± 0. 22
5. 0 1. 77 ± 0. 19 1. 82 ± 0. 17 1. 81 ± 0. 24 2. 19 ± 0. 27 1. 75 ± 0. 21
6. 0 1. 73 ± 0. 18 1. 71 ± 0. 22 1. 73 ± 0. 19 2. 01 ± 0. 25 1. 68 ± 0. 17
7. 0 1. 68 ± 0. 14 1. 59 ± 0. 16 1. 61 ± 0. 19 1. 93 ± 0. 23 1. 50 ± 0. 20
8. 0 1. 55 ± 0. 23* 1. 47 ± 0. 30* 1. 45 ± 0. 16* 1. 69 ± 0. 22* 1. 37 ± 0. 13*
以 75%乙醇作介质提取的柞树叶提取液供试。表 3 ～ 4 同。
Querus mongolica Fisch leaf extract obtained with 75% ethanol was used． The same in Table 3 and 4.
2. 3 不同处理温度对柞树叶提取液抑菌活性的影响
由表 3 可知，随着温度升高，提取液的抑菌活性
明显增强，当处理温度达到 100 ℃时，抑菌效果显
著，与提取液在其他温度条件下的抑菌效果相比有
统计学差异(P ＜ 0. 05)。这可能是由于随着温度上
升，柞树叶提取液中水分蒸发使得活性成分的浓度
增大，从而增强了抑菌效果，同时也说明柞树叶提取
物的热稳定性好，因此将柞树叶提取液应用于需进
行加热处理的食品生产中会有较好的防腐效果。另
外，当处理温度达到 121 ℃时，抑菌作用降低，这可
能是因为高温破坏了柞树叶提取液中的活性成分，
使其抑菌活性有所下降。
334 蚕 业 科 学 2016;42 (2)
表 3 不同处理温度条件下柞树叶提取液的体外抑菌活性比较(x ± s，n = 15)
Table 3 A comparison on in vitro inhibitory effect of Querus mongolica Fisch leaf extract under different treatment temperatures (x ±
s，n = 15)
温度 / ℃
Temperature
抑菌圈直径 / cm Bacteriostatic circle diameter
金黄色葡萄球菌
Staphylococcus aureus
大肠杆菌
Escherichia coli
普通变形杆菌
Proteus vulgaris
痢疾志贺氏菌
Shigella dysenteriae
肠道沙门氏菌
Salmonella enteria
40 1. 69 ± 0. 23 1. 61 ± 0. 17 1. 63 ± 0. 26 1. 94 ± 0. 31 1. 52 ± 0. 22
60 1. 81 ± 0. 31 1. 76 ± 0. 26 1. 78 ± 0. 29 2. 06 ± 0. 32 1. 65 ± 0. 18
80 1. 93 ± 0. 27 1. 91 ± 0. 25 1. 93 ± 0. 28 2. 13 ± 0. 28 1. 84 ± 0. 29
100 2. 03 ± 0. 26* 2. 05 ± 0. 27* 2. 09 ± 0. 30* 2. 21 ± 0. 33* 1. 96 ± 0. 31*
121 1. 82 ± 0. 27 1. 79 ± 0. 23 1. 90 ± 0. 19 2. 19 ± 0. 22 1. 77 ± 0. 18
2. 4 柞树叶提取液对果蔬的防腐保鲜效果
由表 4 可知，以 75%乙醇浸提获得的柞树叶提
取液经 20 倍稀释后处理果蔬样品，其贮藏保鲜效果
较好。贮藏第 7 天，未经处理的果蔬样品已经出现
严重失水、变软、腐烂和果枝分离现象，而经过柞树
叶提取液处理的果蔬仅表现失水和松软，尚未出现
变软和腐烂现象。由此初步表明新鲜果蔬用柞树叶
提取液处理后，可延长果蔬的贮藏期。
表 4 75%乙醇浸提柞树叶提取液经 20 倍稀释处理果蔬后的保鲜防腐效果
Table 4 Preservative and anticorrosive effect of 20 time diluted solution of Querus mongolica Fisch leaf extract obtained with 75% eth-
anol on fruit and vegetable
果蔬名称
Name of fruit
and vegetable
贮藏时间
Storage time
处理组
Treatment group
对照组
Control group
青椒
Green pepper
番茄
Tomato
黄瓜
Cucumber
樱桃
Cherry
葡萄
Grape
0 d
翠绿鲜艳，果硬，无破损
Bright green，hard fruit，undamaged
翠绿鲜艳，果硬，无破损
Bright green，hard fruit，undamaged
表皮光滑，鲜艳均匀
Smooth surface，bright and even
表皮光滑，鲜艳均匀
Smooth surface，bright and even
顶着黄花，表面带刺
With yellow flowers，thorn on the surface
顶着黄花，表面带刺
With yellow flowers，thorn on the surface
颜色鲜红，玲珑剔透
Bright red，crystalline
颜色鲜红，玲珑剔透
Bright red，crystalline
紫色，饱满，表面有白霜
Purple，full，hoar on the surface
紫色，饱满，表面有白霜
Purple，full，hoar on the surface
青椒
Green pepper
番茄
Tomato
黄瓜
Cucumber
樱桃
Cherry
葡萄
Grape
4 d
略显黄绿，失水较轻
Slightly yellow green，mild water loss
变黄，失水变皱
Yellow，water loss and wrinkled
鲜艳，果硬，光滑
Fresh，hard fruit，smooth
较鲜艳，轻度失水
Ｒelatively fresh，mild water loss
黄花脱落，表面带刺，坚硬
Yellow flower abscission，thorn on the surface，hard
黄花脱落，表面失水皱缩，坚硬度下降
Yellow flower abscission，water loss and
wrinkled surface，decreased hardness
颜色鲜艳，光滑，坚硬
Fresh，smooth，hard
颜色较鲜艳，轻度失水
Ｒelatively fresh，mild water loss
果实连接紧密，坚硬，有光泽
Hard and glossy fruit with close connection
枝干干枯，表面变暗，连接变松，果实易脱落
Withered branches，dim surface，
loose connection，caducus fruit
青椒
Green pepper
番茄
Tomato
黄瓜
Cucumber
樱桃
Cherry
葡萄
Grape
7 d
变黄发皱，枝枯，失水变软
Yellow and wrinkle，withered branch，dehydrated and soft
腐烂严重，出现黑斑
Badly decayed，dark spots appeared
表面失水，有一定硬度
Water loss on the surface，with a certain hardness
变暗，变软，变质
Dark，soft，metamorphism
顶部皱，底部变干，中部新鲜，坚硬
Wrinkled top，dry bottom，fresh central，hard
失水严重，发蔫，有烂点
Seriouslydehydration，drooping，with rotten specks
枝干变干，颜色鲜艳，有硬度
Dry branch，bright color，hardness
枝干变干，果实缩小，有烂点
Dry branch，shrunken fruit，with rotten specks
枝干变干，果实间松散，大小均匀，硬度略有下降
Dry branches，loosely connected fruits，
uniform size，hardness reduced slightly
枝干变黑变干，果实脱落变软，有烂点
Black and dry branches，soft fruit abscission，
with rotten specks
第 2 期 王林美等:柞树叶提取液的体外抑菌活性试验 335
3 讨论
抗菌防腐是食品加工、储藏的关键环节。柞树
叶提取液中含有丰富的黄酮类、木脂素类及糖苷类
等成分［3］，有良好的防腐抑菌及抗氧化等生物学功
能，同时柞树叶资源丰富、天然、安全，活性成分提取
方法简单，抑菌效果明显。通过体外抑菌试验发现，
用不同提取介质获得的柞树叶提取液的抑菌效果不
同，而且对不同细菌的抑制效果也不同。然而，本试
验仅选择了痢疾志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、普通变
形杆菌、大肠杆菌、肠道沙门氏菌 5 种常见细菌检测
柞树叶提取液的抑菌效果，对其他细菌及霉菌的抑
制作用仍需要进一步试验明确。
本试验中可见柞树叶提取液在酸性条件下的
抑菌活性较强，考虑细菌生长的适宜 pH 值环境为
偏碱性，故不排除细菌在酸性条件下生长受到抑
制的可能。试验结果表明柞树叶提取液在 pH为 8
的偏碱性条件下亦具有抑菌活性，因此其可添加
的食品较为广泛。此外，柞树叶提取物的热稳定
性较佳，因此也可将其应用于需要高温加热的食
品防腐中，同时还可增加食品的营养保健价值。
综上认为，柞树叶的提取液作为一种纯天然食品
防腐剂有着较大的市场开发潜力，进一步通过各
种分离手段及药理学筛选，明确其中的活性成分
及其作用机制，有望实施对柞树叶的深度、高附加
值开发。
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·稿件规范化与标准化·
计量单位
为执行国务院发布的《关于在我国统一实行法定计量单位的命令》的规定，计量单位和单位符号按国家技术监督局发布
的 GB3100-3102—93《量和单位》执行。单位符号均用英文小写(正体) ，不允许随便对单位符号进行修饰。现将本刊常用计
量单位和符号介绍如下，希作者参照执行。
时间:年用 a，日用 d，小时用 h，分钟用 min，秒用 s表示。
面积:用 m2、hm2，不用亩。
溶液浓度:用 mol /L，不用 M(克分子浓度)和 N(当量浓度)。
旋转速度:用 r /min，不用 rpm。
蒸汽压力:用 Pa或 kPa、MPa表示。
光密度(吸光度):用 D(斜体)表示，如 D(260 nm)。
生物大分子的分子质量:蛋白质用 D或 kD，核酸用 bp或 kb表示。
图表中的物理量符号(斜体)与(正体)之间用斜线隔开，例如:t / h(表示时间，单位是小时)。
带数值的计量单位不能省略，例如:20 cm × 0. 3 cm，不能写成 20 × 0. 3 cm。
一个组合单位不得有 1 条以上的斜线，否则则采用负数幂的形式表示，如:“g /L /h”应改为“g /(L·h)”或“g /L·h －1”。