全 文 ：第 10 卷第 1 期
1 9 9 4 年 2月
生 物 化 学 杂 志
Ch in s e e B i oe h e mie alJu orn al
V ol
.
10
,
N o
.
1
F e b
.
,
1 9 9 4
岩豆凝集素的圆二色性与生物学活性关系的研究 `
曾仲奎 郑 建
(四川大学生化教研室 ,成都 6 1。。 6 4)
摘要 岩 豆凝集素 (M D )L 的远萦外 圆二 色性 语 ( c D 谱 ) 显示 2 16 一 2 1 7n m 处 的 单一 负峰 。 此 时
M D L 分 子 含有 16 . 2% 的 Q 螺 旋 , 4 6 . 3% 的 p折 受和 3 7 . 5% 的 无规卷 曲 。 p H g . 。 时 负峰红 移 至
2 2 o n m
, 且在 2 1 7一 2 2 2 n m 处 的峰 值几乎相 同 ;在 2 0一 4 o 0 C 范 围内 , C D 谱 的变化甚微 ; 6 0 0 C 时谱峰蓝
移 ;在 s o O C 或 l 0 0 0C 时 , Z1 2 n m 处 出现 一大 负峰 。 l m o l /L 或 Zm o l /L 脉时 , M D L 的 C D 语 已发生明 显
变化 , 二 级结 构单元也有变化 , 凝 集兔 红细胞 的活性也随之减弱 ; 随脉 浓度 的增 加 . M D L 的谱峰 蓝
移 , 最终在 21 2n m 处 出现大 负峰 。 当脉浓度 为 0 . 75 m ol /L 时 , M D L 的 C D 谱 即有明显变化 和活性 丧
失 ;脉浓度继续增加 , C D 谱逐渐成为特征的无规卷曲 的谱形 。 在 p H g . 。 、 温度超过 8 0o C 、 眼或孤浓度
分 别高于 Zm ol / L 和 0 . 75 m ol / L 时 , M D L 的 C D 语 发生 显著变化的同时 , 其凝集兔 红细胞 的生物 学
活性全部丧失 , 分子的二级结构单元也发生很 大改变 。
关键词 : 凝集素 ; 岩豆凝集素 ; 圆二 色性 ; 凝集素的圆二色性
近年来 , C D 谱 已广泛用于研究某些功能蛋白在溶液 中的构象三,弓。 在凝集素中对 C o n A 的
C D 谱研究比较深入 。 在夭然状态下 , C o n A 在溶液中的主要构象是 俘折叠 ,其 C D 谱在 2 2 3n m
处给出异常谱峰川 。 用 C D 谱对少数凝集素在溶液中的构象也进行 了研究阳一 6 〕。
从 岩豆 ( M i l l e t t i a d i e l s i a n a H a r m S ) 种子纯化的岩豆凝集素 ( 简称 M D L )分子的性质与其
两条寡糖链组成 已进行了研究比 8〕 。 本文报道用 C D 谱研究温度 、 p H 、 脉和盐酸肌对 M D L 构象
与生物学活性关系的研究结果 。
材 料 和 方 法
M D L 由本室亲和层析法纯化的聚丙烯酞胺凝胶 电泳显单一蛋白带的制剂川 ;兔红细胞采
自本校饲养场 ;脉和盐酸肌均经重结晶 ; N a C I 、 H e l 、 N a : H P o 、 、 N a H ZP o 、 、 N a Ze o 。 、 N a H e o 。 和
H A C 为分析纯试剂 。
1
.
M D L 凝集活性的测定 按常规法在微量血清稀释板上进行 。 在系列稀释的 “ V ” 型孔
中 , 加入兔血球振摇 10 im n , 2 5 “ C 放置 h2 后 ,显微镜下检查凝血结果 。
2
.
C D 谱的测定 C D 谱用 J一 s o oC 型 自动记录分光偏振仪测定 。 测定温度为 25 O C ; 蛋白质
浓度用分光光度法测定 。 测定不同温度处理后的 M D L 的 C D 谱时 , 系在样品经不同温度处理
` 国家自然科学基 金资助 项 目收稿 日期 : 2 9 9 2一 0 5一 2 5 ;修 回 日期 : 1 9 9 2一 1 2一 3 1
1 0 3
DOI : 10. 13865 /j . cnki . cj bmb. 1994. 01. 021
2 0 mn i后 , 缓慢平衡至 25 ℃ 再行测定 。 各实验待测样品均在配制后于 25 “ C 放置 2 h4 后测定 。
平均残基分子量取值 1 1 0 ,用 0 . cZ m 石英样品池 。 圆二色性用平均残基椭圆值「妇表示 ,单位为
度 · 厘米 , /分摩尔 ( deg · c m , d/ m ol ) 。 得 出远紫外 C D 谱后 , 用 C h en 和 Y a n g 的方法计算出 。
螺旋 ( X H ) 、 俘折叠 ( X 。)和无规卷 曲 ( Y R ) 的百分含量 巨, 〕。
结 果 和 讨 论
一 、 p H 对 M D L 的凝集活性和远紫外 c D 的影响
所用缓冲液均含有 0 . 1 5m o l / L N a C I的 0 . zm o l / L N a ZC O 3一 N a H C O 3 ( p H g . o )和 0 . Zm o l / L
N a
Z
H P O
4一 0
.
l m o l / L 柠檬酸钠缓冲液 ( p H 分别 3 . 0 、 4 . 0 、 5 . 5 、 6 . 0 、 7 . 0和 7 . 5 ) 。 不同 p H 溶液
对 M D L 凝集兔血球的凝集活性见 T ab l e l 。 在 p H S . 5一 7 . 5 范围内 M D L 的凝集活性无明显
改变 , 在 p H 3 . O和 4 . 0 时 , 25 ℃ 放置 h2 后 ,发生溶血 ,不能检查 ,但在放置过程中发现有少量
凝集 , 以后随溶血消失 。
T a b le 1 T h
e e ff e e t o f P H o n a e t iv i t y o f M D L
L e e t in e o n e 拜g / m L
10 0 0 50 0 2 5 0 1 2 5 6 2
.
5 3 1
.
2 5 1 5
.
6 7
.
8 3
.
9 1
.
9 5 0
.
9 5
H a e m o l y
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士十+十+ + ++
+ + ++
十+
十+
+ +十
十+亡J0Ud二dóhtl门I
9
.
0 二 儿
+
:
A g g lu t i n 一 : N o t a g g l u t i n
M D L 在不同 p H 溶液中远紫外 C D 谱变化不明显 ( iF g . 1 ) 。 特别在中性或近中性的溶液
中 , 谱形十分相似 ; 在 p H 6 . o 和 5 . 5 , p H 7 . 0 和 7 . 5 时 ,谱形几乎完全重合 ; 在 p H S . 5一 7 . 5 范
围内 , M D L 给出 2 1 6一 2 1 7 n m 的负峰 ,这与 C o n A ( 2 2 4 n m )和 白细胞凝集素 ( 2 2 5n m ) 巨, , ’ 〕所呈
现的负峰 n m 值明显不同 。 用 e h e n 和 Y a n g 的方法巨9〕计算 (在 2 0 1一 2 3 9 n m 范 围内 ,每 Z n m 取
一「6 ]值 , 计算机计算 ) ,在 p H 3 . o 、 6 . 0 和 9 . 0 时 , M D L 二级结构各构象单元如 T a b l e Z 所示 。
p H 6
.
O 时 , M D L 具有最大的凝集活性 , C D 谱给 出 2 1 6n m 负峰 , 结合 C h e n 和 Y an g 的计算结
果都说 明 M D L 是一种以 日折叠构象为主的凝集素 。 从 p H 6 . O时的生物学活性来看 ,此高 日折
叠构象是 M D L 的天然态结构 ; p H 3 . 0 时 , M D L 的负峰移至 2 1 8n m ,且峰值降低 ,计算表 明 , 其
构象单元含量已有改变 , p H 3 . 。 时的变化比 p H g . o 时更大 , 可能是因 p H 处于 M D L 等电点的
酸性一侧川 , 分子表 面电荷的改变 ,导致构象出现较大改变 。 p H g . 0 时 , M D L 的负峰红移至
2 2 o n m
,峰值在 2 1 7一 2 2 2 n m 范 围几乎一样 , 这与 C o n A 在 p H g . O 时所呈现的 2 1 4 n m 大负峰
截然不同 。
实 验 中还 用 p H 4 . o , 0 . zm o l / L , G l y 一 H C I ; p H 6 . O , 0 . l m o l / L N a A C 一 H A C 和 p H 7 . O ,
0
.
l m o l / L N a
Z
H P O
、 一
N a H
ZP O
4 缓冲液对 M D L 的活性和 C D 谱的影响进行对 比测定 , 发现溶
10 4
剂系统的改变 ,不影响其凝集活性和 C D 谱峰形 。
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1 T h e f a r U V
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s p e e t r a o f M D L a t
v a r i o u s P H
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一 一 P H g . O
一 . . 一 P H 7 . 5 o r P H 7 . 0
一 . 一 P H 6 . 0 o r P H S . 5
— 一 P H 4 . 0” ” “ ’ 二 p H 3 . O
F i g
.
2 T h e f a r U V
一
C D s p e e t
r a o f M D L a t
d i f f e
r e n t e o n e e n t r a t i o n s o f u
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一 . . 一 6 m o l / L u r e a
一 一 4 m o l / L u r e a
一 · 一 Z rn o l / L u r e a
· · · … … l m ol / L u er a
— 一 o m o l / L u r e a
T a b l e 2 T h
e e f f e e t o f P H o n s e e o n d a r y s t r u e t u r e o f M D L
X H (% ) X 日( % ) X R (% )一P H 3 . 0P H 6 . 0P H g . 0 1 7 . 3 3 6 . 5 4 5 . 2X H : a 一 H e l i x X p : 日一 P l e a t e d s h e e t X 。 : R a n d o m 一 e o i l二 、 变性剂服对 M D L 凝集活性和构象的影响用 0 . 1 5 m o l / L N a C I 作溶剂 , 配制 6m o l / L 、 4 m o l / L 、 3m o l / L 、 Zm o l / L 、 l m o l / L 和 o m o l / L的脉溶液处理 M D L ,结果表明 ,低浓度的脉仅使凝集活性部分丧失 , 浓度等于或高于 3m ol / L
时 ,凝集活性几乎全部丧失 ( T ab le 3 ) 。 M D L 经不同浓度的脉处理后的 C D 谱见 iF g . 2 。 在无脉
的 0 . 1 5m o l / L N a C I 溶液中 , M D L 显示 2 1 6一 2 1 7 n m 的负峰 ; l m o l / L 脉 中 , C D 谱峰位置不
变 ,但峰值略有减少 ; 随脉浓度增 加 ,峰位逐渐蓝移 ,峰值增大 。 脉浓度为 Zm ol / L 时 , M D L 的
C D 谱有 明显变化 , 出现 21 2一 2 1 9n m 的平坦宽峰 ; 在 4 m ol / L 和 6m ol / L 脉中 , M D L 原有的
2 16 一 2 1 7n m 负峰消失 ,代之以 2 1 2n m 的大负峰 。 不同脉浓度下 M D L 的二级结构单元含量见
T a b l e 4
。
1 0 5
T a bl e3 T h
e ef f e e to f u r ea o na e tiv i ty o f ML D
U r a em o l /L
L e e ti n eo n e拜g /r L n
1 0 0 0 50 0 2 50 1 2 56 2
.
53 1
.
21 5 5
+
:
Ag g l u ti n一 : N o ta g g lu ti n
根据脉对 ML D凝集活性和 C D谱的影响和用 C h e n和 Ya ng 的方法计算的 X H 、 X 。 、 X R 含
量 , 可以看出 , M D L 在 l m ol / L 脉中 , C D 谱基本未变 ,仅峰值略有减少 , 其 X H 由 16 . 2%减少
为 1 4 . 4% , X 。 由 46 . 3~ 4 . 6% , X R 则 有增加 , 其 凝血活性减 弱 ;脉浓度增 加至 Zm ol / L 时 ,
M D L 的 C D 谱发生明显改变 , 出现 2 12 一 2 1 9n m 的平坦宽峰 ,此时 x H 的变化甚微 , 但 x 。或 x R
有减少或增加 , 其凝血活性与 l m ol / L 脉相 比 , 尚无明显变化 。 此结果表 明 ,在 Zm ol / L 脉中 ,
M D L 分子 的活性区域结构没有受到破坏 (表现在 a 螺旋上无变化 ) ,活性区域外的骨架发生了
改变 (如 X 。的减少 ) ,导致 C D 谱有所改变 ,但维系活性 的 a 螺旋没有改变 , 故分子的凝血活性
也无明显变化 。
当脉浓度达 4 m ol / L 或更高时 , M D L 的 C D 谱原有的 2 1 7n m 负峰消失 ,代之以 2 1 2n m 的
大负峰 , H x 由 1 4 . 8 %~ 13 . 2% , X , 由 4 1 . 0% ~ 3 . 6% , X R 由 4 . 2%一 5 3 . 2% ,若脉浓度增加
达 6m ol / L , 构象单元的含量没有 明显变化 , 表明在 4 或 6m ol / L 脉中 ,其空间结构均 已遭受严
重破坏 ,生物学活性也全部丧失 。
T a b le 4 T h e e f f e e t o f u r e a o n s e e o n d a r y s t r u e t u r e o f M D L
U
r e a m o l / L X H (% ) X , (% ) X R (% )
X H
: a 一
H e l i x X ,
:
P l e a t e d s h e e t X R
:
R a n d o m
一 e o i l
为了排除脉在远紫外 区的吸收而造成对 C D 谱的影响 ,故在实验中用相 同脉浓度溶液作
空 白测定 , 同时作出各种脉浓度中 M D L 在 1 90 一 2 25n m 区域内的 C D 谱 ,结果发现 , 在此实验
条件下 ,脉仅有微弱吸收 。
三 、 温度对 M D L 的活性和 C D 谱的影响
1 0 6
M D L在 2 0℃ 和 0 4℃ 处理后的凝血活性基本不变 , 60 ℃ 处理后活性部分丧失 , 80 “ C 时全
部丧失 ( T a b l e s ) 。
T a b l e 5 T h
e e f f e e t o f t e m P e r a t u r e o n a e t iv i t y o f M D L
L e e t i n e o n e 拜 g / m L
T e m P e r a t u r e
1 0 0 0 5 0 0 2 5 0 1 2 5 6 2
.
5 3 1
.
2 5 1 5
.
6 7
.
8 9 5 0
.
9 5
士一十+一+一十+一+一+十+十+ +十2 0 0 C
4 0
o
C
6 0
O
C
8 0
o
C
10 0
o
C
+
:
A g g l u t i n 一 : N o t a g g lu t i n
M D L 经不同温度处理后的 C D 谱见 F i g . 3 。 在 2 0 0和 4 0 0 C 时 , C D 谱呈现 Z 1 7 n m 的负峰
60 ℃ 时 C D 谱稍有变宽 ,出现蓝移趋势 ; 80 。和 l 0 0 C 处理 20 m in 后 , C D 发生很大变化 , 峰形蓝
移 , 在 21 2n m 处出现大负峰 。
M D L 经不同温度处理后的 C D 谱 , 用 C h en 和 Y an g 的方法计算出分子的各构象单元见
T a b l e 6
。 当温度为 Z o O C 或 4 0 0 C 时 , M D L 的生物学活性 、 C D 谱的峰形和 X H 、 X 。以及 X R 都无
变化 ; 60 ℃ 处理后 ,其 C D 谱峰变宽并蓝移 ,分子 内的 X , 有少量破坏 , X R 明显增加 ,此时尚保
留了部分凝集活性 ; 温度升至 8 0℃ , X H 和 X 。均被破坏 ,此时谱峰蓝移 ,并在 2 1 2n m 处 出现大
负峰 ,其生物学活性全部丧失 。 从整个加温失活过程中 , 可以看到 M D L 分子的 日折叠结构破
坏较多 , X H 破坏较少 ,这与 O ob at a ke 等所报道的温度对 R N a s e T , 的影响有相似之处 10[ 〕。
在测定温度处理 C D L 后的 c D 谱中 , 系将温度处理后的 M D L 溶液缓慢平衡至 25 ℃ ,再
进行测定 。 此时测定的 C D 谱和计算 出的二级结构单元的含量 , 不能完全代表各种温度处理
M D L 的实际情况 , 因为当温度处理条件去除后 , 被破坏的各结构单元有可能回复重新形成 ,如
60 ℃ 时出现的 a 螺旋略有增加 , 即属此例 ,故本文的温度实验结果 ,还有待进一步修正 。 尽管
如此 , 因温度的增加 ,而使活性丧失的蛋 白质变性规律 ,也可体现出来 。
T a b le 6 T h e e f f e e t o f t e m P e r a t u r e o n s e e o n d a r y s t r u e t u r e o f M D L
T e m Pe r a t u
r e X H (% ) X p ( % ) X R ( % )
2 0
O
C
4 0
o
C
6 0
o
C
8 0
o
C
1 0 0
o
C
1 6
l 6
1 7
.
4
1 3
.
4
4 6
.
3
4 6
.
6
3 9
.
7
3 1
.
2
2 8
.
5
3 7
3 7
5 5
.
4
5 9
.
7
四 、 盐酸肌对 M D L 的活性和结构的影响
用 0 . 1 5m o l / L N a C I 配 制 含 肌 浓 度 为 0 . om o l / L 、 0 . 7 5m o l / L 、 1 . o m o l / L 、 1 . sm o l / L 、
1 0 7
3
.
o ml o/L 和 4ml o/L 的溶液 。 不同浓度的盐酸肌对M D L 的凝集活性的影响见Ta l be7 。 结果
表明低浓度的盐酸肌就足以使M D L 失活; 浓度为l ml o/L 时凝集活性几乎完丧失; 肌浓度超
过l l o m/L , 时间超过 h1 ,就会发生溶血作用 。
M D L 经盐酸肌处理后的远紫外 C D 谱见 iF g . 4 。 按 C h e n 和 Y a gn 的方法计算出 M D L 二
级结构各单元的含量见 T a bl e s 。
6
420-24书
ǎ一。已P、日。 .切.à,01义公
~ 一曰- 一~~ ~ ~~ ~ J一曰一一一月 一` -2 X() 2 10 2 0 2犯 24 0
W a v e le n g t h (皿 )
2 0 乳 0 2 0 23 0 24 0
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3 T h e e仃 e e t o f t e m p e r a t u r e o n t h e f a r U V 一 C D
s Pe e t r a o f M D L
一 . ’ 一 1 0 0 o C
一 一 8 0 o C
一 . 一 . 一 6 0o C
— 一 4 0 o C
. . …… ` 20 。
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.
4 T h e f a
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一
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s p e e t r a o f M D L
a t d i f f
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e o n e e n t r a t l o n s o f g u a n id i n e
一 一 3 . 0 o r 4 . 5 m o l / L g u a n ,d i n e
— 一 1 . 5 m o l / L g u a n id i n e· · · … … 1 . 0 rn o l / L g u a n id i n e
一 · · 一 0 . 7 5 m o l / L g u a n id i n e
一 · · 一 0 . 0 m o l / L g u a n 、d i n e
T a b l e 7 T h
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e o n a e t iv it y o f M D L
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G u a n id i n
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10 0 0 5 0 0 2 5 0 1 2 5 6 2
.
5 3 1
.
2 5 1 5
.
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.
8 3
.
9 1
.
9 5 0
.
9 5
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0
.
7 5 m o l / L
1
.
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1
.
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.
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4
.
5 m o l / L
+ + + + + +
H a e m o ly
s l s
+
:
A g g lu t l n i n 一 : N o t a g g lu t i n x n
M D L 在 0 . 75 m ol / L 肌 中的凝集活性 已大部分丧失 , C D 谱峰形略为变窄 , 负值稍有减少 ,
与无肛时 比较 ,谱形变化不大 ,但 x 。 值却明显减少 ,此 X 。 值与 8 0℃ 、 4 m ol / L 脉和 p H .3 。 时
X
H 值相同 : 肌浓度为 0 . 75 m ol / L 时 X 。值为 4 5 . 3% (有弱凝集活性 ) , 此 X 。值 比 4m ol / L 脉和
1 0 8
p H 3
.
o 时的 X 。值高得多 (分别为 31 . 2% 、 3 . 6%和 36 . 7% ) ,但在此三种条件下 , M D L 已全部
丧失活性 , 而在 0 . 75 m ol / L 肌中还保留有部分活性 。 此结果表明 ,俘折叠结构对维持 M D L 的
生物学活性 ,可能也有重要作用 。
T a b le 8 T h
e e
f f
e e t o f g
u a n i d i n e o n s e e o n d
a r y s t r u e t u r e o f M D L
G
u a n id i n e X
H (% ) S
;
( % ) X R (% )
0 m o l / L
0
.
7 5 m o l / L
1
.
0 m o l / L
3
.
0 m o l / L
16
13
4 6
4 5
3 7
4 l
11
.
9
.
5
.
4 5
3 5
1 0
53
.
6
8 3
.
6 5
随着肌浓度的增加 , M D L 分子的结构更加松散 , 维持蛋 白质构象的次级键因肌浓度的增
大而解体 , M D L 的 C D 谱变化很大 ,生物活性也随之丧失 。 肌浓度在 1 . sm ol / L 以内 ,峰形变
宽 , [剑值降低 ,浓度超过 1 . s m ol / L 时 , M D L 的 C D 谱形完全改变 , 无具体的吸收峰 ,似处于由
规则的 日折叠和 。 螺旋结构 向大量无规卷曲的过渡状态 , 这与肌对半夏蛋 白的远紫外 C D 谱
有相似之处 l[ 〕。 当肌浓度 增至 3 . 。 或 4 . s m ol / L 时 , M D L 的 C D 谱几乎完全相同 , 说明在
3
.
o m ol L/ 肌中 , M D L 分子 已完全变性 ,此时的 c D 谱属于较为典型的含大量无规卷曲构型的
C D 谱 、 当然生物学活性也不复存在 。
应用 C D 谱研究蛋白质的二级结构 ,虽然可 以为蛋 白质分子的构象变化与生物活性之间
的关系提供许多重要信息 ,但是蛋白质的生物活性还与其三级乃至 四级结构有关 ,本文仅从
C D 谱来表述结构与活性关 系 ,要阐明 M D L 的结构与活性关系 ,还有待于深入工作 。
参 考 文 献
1 鲁子贤等 . 圆二色性 和旋光色散在分子生物学中的应用 , 北京 : 科学 出版社 , 1 9 8 7
2 H e
r r
m
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B
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J B
之o c h e m , 1 9 7 9 , 8 6 : 5 5一 6 3
1 1 徐琴钮 ,等 . 生物化学与生物物理学报 , 1 98 1 , 1 3 : 3 7 9一 3 8 4
1 0 9
T h e Stui do s en T h eC D SP e ct rn a a dH e mag g lu tin atin g A cti vi tyo f
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et ti a di e ls in a aH ar ms L e ctin
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(刀`户a 叮m e n t Of B io l o舒 , S ic h u a n U n iv e r s i yt , C h e n g d u , 6 1 0 0 6 4 )
A b st r a e t M i l l e t t i a d i e l s i a n a H a r m s L e e t in (M D L ) e x h ib i t s a e h a r a e t e r i s t i e e i r e u l a r d i e h r o i e
( C D ) s p e e t r a l n e g a t i v e b a n d e e n t e r e d a t 2 1 7 n m
,
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s h i f t t o 2 2 On m
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T e m P e r a t u r e w i t h i n t h e r a n g e o f Z o
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C D s p e e t r a o f M D L
,
b u t t h e b a n d 15 b l u e s h i f t a t t e m P e r a t u r e a b o v e 6 0
O
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, a n d le a d s t o a
l且r g e n e g a t i v e b 欲n d e e n t e r e d a t 2 1 2n m a t t h e t e m p e r a t u r e a b o v e s o o C . T h e C D s p e e t r a o f
M D L a r e a p p a r e n t l y e h a n g e d i n i m o l / L o r Zm o l / L u r e a
, 5 0 t h e s e e o n d a r y s t r u e t u r e 15 a l s o
e h a n g e d a n d t h e h e m a g g l u t i n a t i n g a e t i v i t y 15 w e a k e r
.
T h e b a n d 15 b l u e
一 s h i f t w it h t h e i n
-
e r e a s e o f u r e a e o n e e n t r a t i o n
, a n d l e a d s t o a l a r g e n e g a t iv e b a n d e e n t e r e d a t Z 1 2 n m
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In
0
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7 5m o l / L g u a n id i n e
,
t h e h e m a g g l u t i n a t i n g a e t i v i t y 15 l o s t a n d t h e C D s p e e t r a o f M D L 15 o b
-
v i o u s e h a n g e d
.
M D L e x h ib i t s a e h a r a e t e r i s t ie C D s p e e t r a b a n d o f r a n d o m e o il w it h t h e i n
-
e r e a s e o f g u a n id in e e o n e e n t r a t i o n
.
T h e s t u d i e s s h o w t h a t M D I 15 i n a e t i v e a t p H g
.
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C a n d t h e e o n e e n t r a t i o n s o f u r e a a n d g u a n id i n e h i g h e r t h a n Zm o l / L a n d 0
.
7 5m o l / L r e s p e e t i v e l y w i t h t h e a p p a r e n t e h a n g e s o f C D s p e e t r a o f M D L
,
t h u s t h e s e e o n d a r y
s t r u e t u r e o f M D L 15 a l s o e h a n g e d
.
K e y w o r d s : L e e t i n ; M i l l e t t ia d i e l s i a n a H a r m s L e e t i n ; C i r e u l a r D i e h r o i s m ; C i r e u l a r d i e h r o
-
i s m o f l e e t i n
1 1 0