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南瓜叶中总黄酮的提取工艺优化研究



全 文 :   
kW;主轴转数:1 718.9 r·min-1 ;外形尺寸 (长×
宽×高):作业状态 950 mm×2 050 mm×1 800 mm ,
非作业状态 950 mm×620 mm×1 100 mm;转子直
径:500 mm;锤片数目:3组 24片 。
3 小结
CR-18型揉搓机解决了目前揉搓机工作效率和
寿命低的问题 , 机器结构简单 、制造方便成本低廉 ,
对提高我国秸秆的综合利用率 、促进畜牧业和饲料
业的发展必将产生积极的影响。该项设计已获国家
专利。
参考文献:
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[M] .北京:机械工业出版社 , 1973:541-559.
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社 , 2005.
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[ 4]  机械设计编写组.机械设计 [M] .北京:高等教育出版社 ,
1997.
[ 5]  北京农业工程大学农业机械学编写组.农业机械学 (下册)
[M] .北京:中国农业出版社 , 1999.
(责任编辑:吴益伟)
南瓜叶中总黄酮的提取工艺优化研究
徐海菊
(浙江台州科技职业学院 , 浙江台州 318000)
  摘 要:以南瓜叶为原料 , 采用正交试验方法研究了乙醇溶液浓度 , 浸提温度 , 浸提时间 , 料液比对南瓜
叶片中总黄酮提取效果的影响 , 确定最佳提取工艺条件为乙醇溶液浓度 75%, 浸提温度60 ℃, 浸提时间2 h , 料
液比1∶20。
关键词:南瓜叶;总黄酮;提取工艺;正交试验法
中图分类号:TS255.1   文献标识码:B   文章编号:0528-9017(2009)03-0626-03
  南瓜 [ Cucurbita moschata (duch.)Poiuet] 为
葫芦科南瓜属植物 , 又名番瓜 , 北瓜 , 金冬瓜等 ,
是一年生草本植物[ 1] 。由于它具有高产稳产 , 抗灾
能力强 、 适应性广 、 容易栽培等特点 , 因而在全国
各地广泛种植 , 它可用作粮食 、蔬菜 、 饲料 、药材
等[ 2] 。《本草纲目》 中记载 , 南瓜味甘 、 性温 , 具
有补中益气和润肺的功能 , 能防治多种疾病 。现代
科学研究表明从南瓜中提取黄酮类物质具有多种药
理作用:抗氧化作用 、消炎作用 、 抗癌和抗基因突
变作用[ 3-4] 。
国内外对南瓜果实的营养成分和保健作用有大
量研究报道 , 而对南瓜茎叶作用的研究报道很少 。
目前对南瓜功能成分提取的研究多以南瓜果实为材
料 , 而对南瓜茎叶的研究主要集中在其食用价值
上。我们研究了从南瓜叶片中提取黄酮类物质的工
艺 , 以期筛选出较好的提取方法 , 为南瓜叶的开发
  
利用以及寻找新的黄酮药源提供科学依据 。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验材料
南瓜叶片 (含叶柄)采自浙江省台州市黄岩区
的蔬菜基地 , 去除腐叶和黄叶后 , 用自来水洗净 ,
置于恒温干燥箱中 , 60 ℃烘干 , 粉碎后过 60 目
(孔径 0.25 mm)筛 , 装袋备用 。
1.1.2 实验试剂
芦丁标准品 , 购自上海化学试剂一厂;无水乙
醇 , 分析纯 , 购自杭州萧山化学试剂厂;NaNO2 ,
Al (NO3)3 , NaOH , 均为分析纯 。
1.1.3 实验仪器
723N可见分光光度计 , 上海精密科学仪器有
限公司生产;sc-30 电热恒温水浴槽 , 宁波东胜仪
  
收稿日期:2009-03-08
作者简介:徐海菊 (1974-), 女 , 浙江台州人 , 讲师 , 硕士 , 从事食品营养检测与食品资源开发工作。
626    2009年第 3期
DOI :10.16178/j.issn.0528-9017.2009.03.005
器科技有限公司生产;分析天平 , 上海精密仪器仪
表有限公司生产;电热恒温鼓风干燥箱 , 杭州蓝天
化验仪器厂生产 。
1.2 实验方法
1.2.1 测定原理
以芦丁为对照测定南瓜叶总黄酮含量 , 加入铝
离子试剂 , 同时控制适宜的 pH值 , 使黄酮化合物
与铝盐形成络合物 , 在可见光波长段内获得稳定吸
收[ 5] 。
1.2.2 提取方法
准确称取 10.0 g 南瓜叶粉末置于磨口三颈烧
瓶中 , 按要求加入一定量的提取剂 , 在一定温度下
回流提取一定时间 , 趁热减速压抽滤 , 滤渣加适量
水洗涤 , 过滤 , 合并清液后减速压蒸馏 , 回收溶剂
至近干 , 加水约 150 mL 溶解 , 加入 50 mL 石油醚
脱色 2次 , 弃去醚层 。加水定容至 250 mL 容量瓶
中 , 作为待测液[ 6] 。
1.2.3 标准曲线
将经 120 ℃干燥至恒重 、精确称取的芦丁标准
品10 mg , 置于小烧杯中 , 以乙醇溶液微热溶解 ,
将溶液移至 100 mL 容量瓶中 , 用 30%的乙醇溶液
定容[ 7] 。此溶液为 0.1 mg·mL-1芦丁标准液。分别
吸取芦丁标准液 0 , 1 , 2 , 4 , 6 , 8 mL , 置于 25
mL 容量瓶中 , 分别加入 30%的乙醇溶液补足至
12.50 mL , 加 5 %的 NaNO2 溶液 0.75 mL , 摇匀 ,
放置 6 min , 加 10%的 Al (NO3)3 0.75 mL , 摇匀 ,
放置 6 min , 加入 4%的 NaOH 溶液 5 mL , 再用
30%的乙醇溶液稀释至刻度 , 摇匀 。在 510 nm 处
测定其吸光度 A , 绘制标准曲线得芦丁质量浓度与
吸光度间的回归方程为:Y =9.892 1A -0.004 7 ,
相关系数为 R2=0.998 9 。
1.2.4 测定方法
取1.2.2中待测液 10.0 mL 置于 100 mL 容量瓶
中 , 用 30%的乙醇溶液定容 , 取 5.0 mL 置于 25
mL 容量瓶中 , 以下操作同 1.2.3 标准曲线项 , 测
定其 510 nm 处的吸光度 A[ 6] 。从南瓜叶片中提取
的总黄酮含量可按下列公式计算:
总黄酮含量(mg ·g-1)=Y ×
250
10
×100
5
×25
W

  式中:Y 为提取液的总黄酮浓度 (mg·mL-1),
W 为南瓜叶干重 (g)。
2 结果与分析
2.1 单因素的影响
2.1.1 乙醇溶液浓度
乙醇溶液浓度分别 30%、 45%、 60%、 75%、
90%;料液比 1∶40;浸提时间 1.5 h;温度:
50 ℃。按照1.2.2的方法进行黄酮化合物的提取 ,
按照 1.2.4方法进行其含量的测定 , 分别计算总黄
酮的含量。结果见图 1。
图1 乙醇浓度对黄酮类物质提取的影响
从图1可知 , 随着乙醇浓度的提高 , 黄酮类物
质提取量随之增加 , 当乙醇浓度高于 75%时 , 黄
酮得率增加不明显。由此确定乙醇浓度以 75%以
下为好 。
2.1.2 浸提温度
浸提温度分别为40 ℃、 50 ℃、 60 ℃、 70 ℃、
80 ℃;乙醇溶液浓度 60%;料液比1∶40;浸提时
间 1.5 h。按照 1.2.2 的方法进行黄酮化合物的提
取 , 按照1.2.4方法进行其含量的测定 , 分别计算
总黄酮的含量。结果见图 2。
图2 浸提温度对黄酮类物质提取的影响
从图2可知 , 在一定范围内 , 温度越高 , 浸提效
果越好。但温度过高 , 一方面其中的活性物质易被破
坏 , 杂质的溶出量增加 , 另一方面造成溶剂损失 , 成
本增加。由此确定浸提温度以70 ℃以下为好。
2.1.3 浸提时间
料液比 1∶40;浸提温度50 ℃;乙醇溶液浓度
60%;浸提时间分别为 1 h 、 1.5 h 、 2 h 、 2.5 h 、 3
h。按照 1.2.2 的方法进行黄酮化合物的提取 , 按
徐海菊:南瓜叶中总黄酮的提取工艺优化研究 627 
照1.2.4方法进行含量测定 , 分别计算总黄酮的含
量。结果见图 3。
图 3 浸提时间对黄酮类物质提取的影响
从图3可知 , 浸提时间在 1 ~ 1.5 h之间得率变
化不大 , 浸提时间 2 h 效果最好 , 浸提在 2.5 h 已
基本达到平衡。
2.1.4 料液比
设置料液比分别为 1∶10 、 1∶20 、 1∶30 、 1∶40 、
1∶50;浸提温度 50 ℃;乙醇溶液浓度 60%;浸提
时间 1.5 h。按照 1.2.2的方法进行黄酮化合物的
提取 , 按照1.2.4方法进行其含量的测定 , 分别计
算总黄酮的含量 。结果见图 4。
图 4 料液比对黄酮类物质提取的影响
从图 4可知 , 随着在料液比的下降 , 总黄酮的
提取效果提高 。料液比为 1∶30时 , 浸提达到较好
效果 。
2.2 各因素组合的影响
在单因素试验的基础上 , 考虑到各因素间的相
互交叉影响 , 选择乙醇溶液浓度 、 浸提温度 、浸提
时间与料液比 , 设计 L9 (34)正交试验 (表 1)。
表 1 各处理组合对总黄酮含量提取效果的影响
组合号
因 素
A
乙醇
浓度 %
B
浸提
温度 ℃
C
浸提
时间 h
D
料液比
(mg·mL-1)
总黄酮
含量
(mg·g-1)
1 45 40 1.5 1∶20 4.137
2 45 50 2.0 1∶30 5.289
3 45 60 2.5 1∶40 5.912
4 60 40 2.0 1∶40 5.551
5 60 50 2.5 1∶20 6.056
6 60 60 1.5 1∶30 6.693
7 75 40 2.5 1∶30 6.185
8 75 50 1.5 1∶40 6.613
9 75 60 2.0 1∶20 7.081
  从表1中的分析得到 , 各因素对黄酮提取率影
响的主次顺序为乙醇浓度 (A) >浸提温度 (B)
>浸提时间 (C)>料液比 (D), 最佳的提取工艺
条件为乙醇浓度 75%, 浸提温度60 ℃, 浸提时间
2 h , 料液比 1∶20 , 在最佳工艺条件下通过测定得
南瓜叶中总黄酮含量为 7.081 mg·g-1 。
3 小结和讨论
通过单因素试验与正交试验 , 确定南瓜叶片中
黄酮类化合物的最佳提取条件为:乙醇浓度 75%,
浸提温度60 ℃, 浸提时间 2 h , 料液比 1∶20 。
采用分光光度法测定提取物中总黄酮含量 , 操
作方法简便 , 结果可靠 。
南瓜叶片含有丰富的黄酮类物质 , 因此具有广
泛的开发应用前景 。
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(责任编辑:王家玉)
628    2009年第 3期