全 文 ：荔枝壳总黄酮大孔树脂纯化工艺研究
涂 华，陈碧琼，周锡兰 (泸州医学院化学教研室，四川泸州 646000)
摘要 ［目的］优化大孔吸附树脂法纯化荔枝壳总黄酮的工艺。［方法］比较 AB-8、HPD-600和 D101 3种大孔吸附树脂对荔枝壳总黄酮
的吸附和解吸效果，并对上柱液的 pH、黄酮浓度、上柱液体积和洗脱液乙醇体积分数等条件进行优化。［结果］D101大孔吸附树脂适宜
荔枝壳总黄酮的提纯，其最佳工艺条件为上柱液 pH 5． 0，上柱液浓度 4 mg /ml，上柱液体积 2． 5 BV，洗脱液乙醇体积分数 80%，洗脱体积
2． 0 BV。［结论］经 D101大孔吸附树脂分离后，荔枝壳总黄酮含量在 83%以上 。
关键词 荔枝壳;总黄酮;大孔吸附树脂;纯化工艺
中图分类号 S667． 1 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2012)15 －08738 －02
Separation and Purification Process of Total Flavones from Litchi Pericarp by Macroporous Absorption Resin
TU Hua et al (Chemistry Staff Room，Luzhou Medical College，Luzhou，Sichuan 646000)
Abstract ［Objective］This study aimed to optimize the conditions for purification of total flavones from litchi pericarp by macroporous ab-
sorption resin．［Method］The flavones adsorption rate and desorption rate of macroporous absorption resins (AB-8，HPD-600，D101)were
compared，and the technological parameters of D101 during the purification process were investigated，including on-column liquid pH，flavone-
concentration，on-column liquid volume and volume fraction of elution solution．［Result］D101 macroporous absorption resin is appropriate for
the purification of total flavonoids from litchi pericarp． The optimal technological conditions were:on-column liquid pH = 5． 0;on-column liquid
concentration was 4 mg /ml，with a volume of 2． 5 BV;elution solution was 80% ethanol，with a volume of 2． 0 BV．［Conclusion］The content
of total flavones achieve 83% by using the method．
Key words Litchi pericarp;Total flavones;Macroporous absorption resin;Purification process
基金项目 泸州市重点科技项目(651)。
作者简介 涂华(1976 － ) ，女，四川泸州人，讲师，硕士，从事精细化工
工艺研究，E-mail:cyt_525@ 163． com。
收稿日期 2012-01-31
泸州荔枝果肉白嫩剔透，厚而多汁，入口蜜甜，果皮鲜
红，薄而韧，产量居全国第 5。荔枝壳富含黄酮类等生理活性
物质，具有很高的药用价值［1 －2］。与其他分离技术相比，大
孔吸附树脂分离技术具有可提高有效成分相对含量、产品不
吸潮、生产周期短、树脂再生方便、可重复使用等优点，因而
近年来被广泛应用于天然产物的分离纯化［3 －5］。为此，笔者
应用大孔吸附树脂对荔枝壳总黄酮进行分离纯化，旨在探索
一种工艺简单可行、适用于大规模生产的分离纯化工艺。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 供试原料。新鲜荔枝，购自泸州合江。
1． 1． 2 主要试剂。芦丁对照品(北京维欣仪奥科技发展有
限公司) ;AB-8、HPD-600、D101型大孔吸附树脂(沧州宝恩吸
附材料科技有限公司)。
1． 1． 3 主要仪器。RE52CS-1旋转蒸发器(上海亚荣生化仪
器厂) ;调速振荡器 HY-4(金坛市荣华仪器制造有限公司) ;
SP-1901双光束紫外可见分光光度计(上海光谱仪器有限
公司)。
1． 2 方法
1． 2． 1 总黄酮的提取。将新鲜荔枝壳置于阳光下暴晒 18 h，
粉碎后过60目筛。准确称取200 g荔枝壳粉末于圆底烧瓶中，
并加入80%乙醇，于65 ℃下水浴加热回流提取2 h，重复提取2
次，合并提取液，减压过滤并浓缩后，用 30%乙醇溶液定容于
500 ml容量瓶中。然后根据试验所需，稀释至相应浓度。
1． 2． 2 标准曲线的绘制。精确称取芦丁标准品0． 013 0 g溶
于 30%乙醇，定容至 100 ml，制成 0． 13 mg /ml 芦丁标准溶
液。分别取该芦丁标液 0、2． 0、4． 0、6． 0、8． 0、10． 0 ml 置于 6
个 50 ml的容量瓶中，依次编号 0 ～ 6，再用 30%乙醇补至 10
ml后，加入 1． 5 ml 5%NaNO2 摇匀，静置 6 min再加入 1． 5 ml
10%硝酸铝摇匀，静置 6 min 后，加入 10 ml 1 mol /L氢氧化
钠，摇匀，用 30%乙醇稀释至刻度线，再次静置 15 min，然后
置于波长 510 nm 处测吸光度，并绘制出芦丁标准曲线(图
1) ，求得其回归方程［6］为 y =2． 586 4x －0． 001，相关系数 R =
0． 997。
图 1 芦丁标准曲线
1． 2． 3 总黄酮含量的测定。取待测液 2 ml于 25 ml容量瓶
中，按“1． 2． 2”方法测定吸光度，再根据标准曲线所得的回归
方程，计算出待测溶液中黄酮的含量。
1． 2． 4 大孔吸附树脂的预处理［7］。用蒸馏水洗去细小树脂
及破碎树脂，用无水乙醇浸泡 24 h，上柱，继续以 95%乙醇冲
洗至洗出液加水(1∶5)不出现浑浊，再用蒸馏水洗至无醇味，
取出树脂，备用。
1． 2． 5 静态吸附与解吸试验。
1． 2． 5． 1 大孔树脂的筛选［8］。称取经预处理的 3 种大孔吸
附树脂各500 mg，置于50 ml具塞的磨口锥形瓶中，并加入总
黄酮浓度约为 1 mg /ml 的荔枝壳粗提液 20 ml，室温下振荡
责任编辑 金苹 责任校对 卢瑶安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2012，40(15):8738 － 8739，8781
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2012.15.022
(180 r /min)24 h后过滤，测定滤液中剩余的黄酮浓度，并计
算 3种吸附树脂的吸附率:
A =(C0 － C1 /C0)×100%
=(A0 － A1 /A0)×100% (1)
式中，A为吸附率;C0 和 C1 分别为吸附前后黄酮水溶液的浓
度(mg /ml) ;A0 和 A1 分别为吸附前后溶液的吸光度。
将以上静态吸附的树脂过滤抽干，加 20 ml 70%乙醇，将
锥形瓶置于旋转摇床上振荡(180 r /min)24 h，解吸后过滤，
然后测定滤液中的黄酮浓度，并计算出 3种树脂的解吸率:
D =［C2V1 /(C0 － C1)V0］×100% (2)
式中，D为解吸率;C0、C1、C2 分别为吸附前后黄酮水溶液浓
度及洗脱液的黄酮浓度(mg /ml) ;V0、V1 分别为上柱黄酮水
溶液与洗脱液的体积(ml)。
1． 2． 5． 2 pH对大孔树脂吸附的影响。往 5个 50 ml具塞的
磨口锥形瓶中各加入 500 mg已预处理的 D101 湿树脂及 20
ml浓度为 1 mg /ml 的黄酮水溶液，调节 pH，测定在不同 pH
下大孔树脂对黄酮的吸附率，确定最佳 pH。
1． 2． 6 动态吸附与解吸试验。
1． 2． 6． 1 上柱液浓度的确定。将静态吸附优选处理好的大
孔树脂 D101 湿法装柱。配制总黄酮浓度为 2． 0、3． 0、4． 0、
5． 0、6． 0、7． 0 mg /ml 的溶液，并调其 pH 为 5，以相同速度上
样，收集流出液，测定黄酮吸附率。
1． 2． 6． 2 最大上样量的确定。将静态吸附优选处理好的大
孔树脂 D101湿法装柱。取总黄酮浓度为 4 mg /ml的样品液
(pH为 5)150 ml加入树脂柱中，分段收集流出液，每 0． 5 BV
(10 ml)收集 1份，测定黄酮含量，绘制泄漏曲线。
1． 2． 6． 3 洗脱液体积分数的确定。将静态吸附优选处理好
的大孔树脂 D101湿法装柱。配制总黄酮浓度为 4 mg /L的
样品液(pH为5) ，取2． 5 BV通过树脂柱，分别用体积分数为
30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%的乙醇溶液洗脱，分
段收集洗脱液，测定总黄酮含量，并计算解吸率。
2 结果与分析
2． 1 3种树脂的吸附率与解吸率 由表 1 可知，3 种树脂中
D101的吸附率及解吸率均为最高，因此选择 D101 树脂来做
动态吸附及解吸试验，以筛选最佳工艺条件。
表 1 3种树脂的吸附率与解吸率 %
树脂型号 吸附率 解吸率
AB-8 81． 72 79． 12
D101 89． 30 80． 03
HPD-600 76． 32 70． 79
2． 2 上样液 pH 由图 2可知，当 pH为 5． 0时，树脂吸附效
果最好。荔枝壳总黄酮具有酚羟基结构，呈弱酸性，在酸性
条件下一般以分子的状态存在，可凭借范德华力与树脂发生
作用，因此吸附效果好;但若酸性过大，黄酮类物质又会生成
佯盐，导致吸附效果变差。
2． 3 D101树脂分离荔枝壳总黄酮的最佳工艺条件
2． 3． 1 上样液黄酮浓度。由图 3 可知，上样液浓度低不利
于总黄酮的吸附，当上样液质量浓度为 4 mg /ml 时，总黄酮
图 2 上样液 pH对 D101树脂吸附效果的影响
吸附率达到最大;浓度继续增大时，吸附率下降，因为上样液
浓度太高，会提前泄漏。因此，在后续试验中，上样液的黄酮
浓度选择 4 mg /ml为宜。
图 3 上样液浓度对 D101树脂吸附效果的影响
2． 3． 2 最大上样量。由泄漏曲线(图4)可知，上样液体积不
超过 2． 5 BV时，黄酮仅有少量泄露;当上样液体积达到 6． 0
BV时，达到吸附平衡。因此，当上样液浓度为 4 mg /ml 时，
上样液体积以 2． 5 BV为佳。
图 4 黄酮泄露曲线
2． 3． 3 洗脱液乙醇体积分数。由图 5 可知，体积分数为
30%和 50%的乙醇溶液对荔枝壳总黄酮的洗脱能力较弱，当
洗脱液体积达 2． 5 BV时，洗脱率也仅约为 60%;而体积分数
为 80%和 90%的乙醇溶液洗脱能力较强，洗脱液体积达 2． 0
BV时，洗脱率为 85%左右，达 2． 5 BV 时，洗脱率接近 90%。
综合成本因素，选择体积分数为 80%的乙醇溶液作为洗脱液。
3 结论
该研究首先通过静态吸附试验，确定吸附率和解吸率都
为最高的 D101大孔吸附树脂来分离纯化荔枝壳总黄酮;并
(下转第 8781页)
937840 卷 15 期 涂 华等 荔枝壳总黄酮大孔树脂纯化工艺研究
(2)构建具有实效性的大学生生态伦理教育体系。生态
伦理教育是植根于生态伦理学的一种全新的教育理念，其核
心价值体现在以下几方面:①以一种可持续发展的伦理观念
重新审视人与自然的基本关系;②以一种全新的生态视角重
新思考人类发展过程中人际之间、代际之间和各物种之间应
有的平等关系;③以一种全新的理性方式重新塑造生态与发
展共存、简约与丰富同辉的生活方式［3］。
构建具有实效性的大学生生态伦理教育体系在教学模
式上，采用渗透模式和单一学科模式相结合，既将生态伦理
作为德育的重要组成部分，以保证教学的系统性，又将生态
环境理念渗透到已有的各学科教学中，以免学生孤立地看待
生态环境问题。在进行学科渗透教育时，各学科之间应根据
生态环境教育的大纲要求，既合理分工又密切合作，注意学
科之间生态教育的差异性与共同性，培养学生探讨环境、保
护环境的意识，最终形成科学、系统的生态伦理观。
(3)建立良好的校园生态伦理氛围。首先，学校领导和
教师应当以身作则、率先垂范，以自身的环境保护行为鼓励
和强化学生生态道德的养成;其次，创建生态伦理氛围，引导
学生尊重自然，唾弃破坏生态环境的不道德行为，宣讲生态
保护方面的责任，让学生充分认识到遵守生态法规、坚持生
态伦理标准是每一个人应尽的道德义务;再次，学校应加大
环保教育资金的投入，为学生提供更多的环境保护实践机
会，吸引绝大多数学生参与活动，通过讨论反思环保收获，并
进一步与生态伦理课程内容结合互动，深化学生对理论的认
知和把握。
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84 －85．
(上接第 8739页)
图 5 乙醇溶液体积分数对 D101树脂解吸效果的影响
通过静态试验和动态试验，筛选出其最优工艺条件为上样液
浓度 4 mg /ml，上样液 pH =5，上样液体积 2． 5 BV，洗脱液乙
醇体积分数 80%，洗脱体积 2． 0 BV;在该工艺条件下，总黄
酮的含量在 83%以上。
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