全 文 ：紫外分光光度法测定醉鱼草果实中总三萜含量
任亚硕１，２，吴德玲１，２，张　伟１，２，郑传柱１，金传山１，２，刘劲松１，２
（１．安徽中医学院药学院，安徽 合肥　２３００３１；２．安徽省现代中药重点实验室，安徽 合肥　２３００３１）
［摘要］目的　建立醉鱼草果实中总三萜的含量测定方法。方法　以齐墩果酸为对照品，用５％香草醛－冰醋
酸溶液，高氯酸系统显色，在５４０ｎｍ处测定样品吸光度。结果　齐墩果酸在２．４５～２４．５０μｇ／ｍｌ范围内吸
光度与浓度呈良好的线性关系（Ａ＝０．０５９　４　ｃ－０．０３７　９，ｒ＝０．９９９　８），平均回收率为９８．２８％，相对标准偏差
为１．５９％（ｎ＝６），所测得醉鱼草果实中总三萜含量为４．１３％。结论　该方法操作简便、快速，结果稳定，重
现性好，适用于醉鱼草果实中总三萜含量的测定。
［关键词］醉鱼草果实；总三萜；紫外分光光度法；含量测定
［中图分类号］Ｒ２８２．５　［文献标志码］Ａ　［ＤＯＩ］１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－２２１９．２０１２．０５．０２９
　　醉鱼草果实是马钱科植物醉鱼草Ｂｕｄｄｌｅｊａ
ｌｉｎｄｌｅｙａｎａ　Ｆｏｒｔ．的果实，具有祛风除湿、止咳化痰、
散瘀之功效［１］。通过前期研究发现，醉鱼草果实中
三萜类化合物种类较多［２－３］，并且具有神经细胞的保
护活性［４－５］。经查阅相关文献，尚未见对醉鱼草果实
中三萜类含量测定的报道，为了进一步研究醉鱼草
果实中三萜类成分，本研究利用三萜类化合物与香
草醛－高氯酸试剂反应生成有色化合物，并且在一定
波长下有吸收峰，从而可以进行比色法的测定，建立
醉鱼草果实中总三萜的含量测定方法。
１　仪器与试药
１．１　仪器　ＵＶ－７５７ＣＲＴ型紫外－可见分光光度
计：上海精科；ＡＢ１３５－Ｓ十万分之一分析天平：瑞士
ＭＥＴＴＬＥＲ　ＴＯＬＥＤＯ；ＨＨ－Ｓ恒温水浴锅：江苏金
坛市国胜实验仪器厂；ＦＺ－０２型高速中药粉碎机：浙
江省温岭市百乐粉碎设备厂。
１．２　 试药 　 齐墩果酸对照品 （批号 １１０７０９－
２００５０５）：中国药品生物制品检定所；醉鱼草果实采
自安徽舒城万佛山，经安徽中医学院药学院刘守金
教授鉴定为马钱科植物醉鱼草Ｂｕｄｄｌｅｊａ　ｌｉｎｄｌｅｙ－
ａｎａ　Ｆｏｒｔ．的果实；香草醛、冰醋酸、高氯酸、甲醇、无
水乙醇等均为分析纯；水为娃哈哈纯净水。
２　方法及结果
２．１　测定方法的优化
２．１．１　对照品溶液的制备：精密称取在五氧化二磷
减压干燥器中干燥３６ｈ的齐墩果酸对照品１．４７
基金项目：安徽省高校省级自然科学研究重点项目（ＫＪ２０１１Ａ１８５）；
安徽中医学院自然科学基金项目（２０１０ｚｒ００９Ｂ）
作者简介：任亚硕（１９８７－），男，硕士研究生
通信作者：吴德玲，０５５１－５１６９２２７，ｄｌｗｕ７３７５＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
ｍｇ，置１０ｍｌ量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即
得；对照品浓度为０．１４７ｍｇ／ｍｌ。
２．１．２　供试品溶液的配制：精密称取醉鱼草果实粗
粉２ｇ，置５０ｍｌ圆底烧瓶中，加９５％乙醇３０ｍｌ回
流提取３０ｍｉｎ，放冷，过滤，滤液转移至１００ｍｌ容量
瓶中，定容摇匀，即得。
２．１．３　显色方法及检测波长的确定：分别精密吸取
上述对照品溶液０．３ｍｌ、供试品溶液０．１ｍｌ，置１０
ｍｌ具塞试管中，６０℃水浴中挥干，依次加入新配制
的５％香草醛－冰醋酸溶液０．２ｍｌ，高氯酸０．８ｍｌ混
匀，密塞，于６０℃水浴中加热２０ｍｉｎ，取出，冷却至
室温后，加入冰醋酸５ｍｌ，混匀，用紫外－可见分光光
度仪进行全波长扫描。结果显示，对照品及供试品
溶液在５４０ｎｍ波长处有最大吸收峰（见图１），因此
选择５４０ｎｍ作为测定波长。
图１　齐墩果酸对照品溶液（Ａ）和供试品溶液（Ｂ）紫外扫描图
２．１．４　５％香草醛－冰醋酸溶液用量的选择：精密吸
取齐墩果酸对照品溶液０．３０ｍｌ　５份至具塞试管
中，水浴挥干，分别加入５％香草醛－冰醋酸溶液
０．１０、０．２０、０．３０、０．４０、０．５０ｍｌ，各加入高氯酸０．８０
ｍｌ，６０℃水浴加热２０ｍｉｎ，冰水浴冷却至室温后，加
入冰醋酸５．００ｍｌ混匀，在５４０ｎｍ波长处测得吸光
度分别为０．３７５、０．３９７、０．３９０、０．３８５、０．３６３。实验
结果显示，０．２０ｍｌ时其吸收值最高，因此５％香草
醛－冰醋酸用量为０．２０ｍｌ。
２．１．５　高氯酸用量的选择：精密吸取５份齐墩果
酸对照品溶液至具塞试管中，每份０．３０ｍｌ，水浴
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安徽中医学院学报 第３１卷 第５期２０１２年１０月ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＡＮＨＵＩ　ＴＣＭ　ＣＯＬＬＥＧＥ　Ｖｏｌ．３１ Ｎｏ．５ Ｏｃｔ．２０１２
挥干，分别加入５％香草醛－冰醋酸０．２０ｍｌ，高氯
酸０．６０、０．８０、１．００、１．２０、１．４０ｍｌ，６０℃水浴加
热２０ｍｉｎ，冰水浴冷却至室温后，加入冰醋酸
５．００ｍｌ，混匀，在５４０ｎｍ波长处测得吸光度分
别为０．３５６、０．３９９、０．３９０、０．３８１、０．３４２。实验
结果显示，０．８０ｍｌ时其吸收值最高，因此高氯酸
用量为０．８０ｍｌ。
２．１．６　反应温度及时间的选择：精密吸取５份齐墩
果酸对照品溶液，按上述方法分别在５０、５５、６０、６５、
７０℃测定其吸光度，结果发现，随温度升高，吸收值
增加，但水浴超过６０℃时，空白显色剂溶液开始变
色，故选择水浴温度为６０℃。
水浴温度确定后，选择水浴时间，分别选择１０、
１５、２０、２５、３０ｍｉｎ观察测定，结果发现，随着水浴时
间延长，吸光度值不断增加。２０ｍｉｎ时出现最大
值，之后吸光度逐渐下降，所以水浴时间２０ｍｉｎ为
最佳。
２．２　标准曲线的绘制　分别精密吸取对照品溶液
０．００、０．１０、０．３０、０．５０、０．７０、０．８０、１．００ｍｌ，至１０
ｍｌ具塞磨口试管中，按“２．１．３”项下方法在５４０ｎｍ
处，以０．００ｍｌ为空白对照测定其吸光度。以对照
品浓度（μｇ／ｍｌ）ｃ为横坐标、吸光度Ａ 为纵坐标绘
制标准曲线：Ａ＝０．０５９　４　ｃ－０．０３７　９，ｒ＝０．９９９　８。
在２．４５～２４．５０μｇ／ｍｌ的浓度范围内，样品的吸光
度与浓度呈良好的线性关系。
２．３　精密度试验　精密吸取同一供试品溶液，按
“２．１．３”项下步骤操作，重复测定６次，相对标准偏
差（ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｄｅｖｉａｔｉｏｎ，ＲＳＤ）＝０．２１％。结
果表明仪器精密度良好。
２．４　重复性试验　精密称取醉鱼草果实粗粉２ｇ，
共６份，按“２．１．２”项下步骤制备供试品溶液，按
“２．１．３”项下步骤测其吸光度，计算其总三萜含量平
均值为２．６７％，ＲＳＤ＝１．７３％。结果表明重复性
良好。
２．５　稳定性试验　精密称取醉鱼草果实粗粉２ｇ，
按“２．１．２”项下步骤制备供试品溶液，按“２．１．３”项
下步骤，分别在０、１０、２０、３０、４０、５０、６０ｍｉｎ测定吸
光度，ＲＳＤ＝０．８１％，表明显色后的样品溶液在６０
ｍｉｎ内稳定。
２．６　加样回收率试验　精密吸取已知含量的供
试品溶液０．１０ｍｌ，分别加入齐墩果酸对照品溶
液０．３０ｍｌ，按“２．１．３”项下步骤，测定吸光度，
计算加样回收率，测定结果见表１。样品平均加
样回收率为１．５９％，表明本法测定结果准确
可靠。
表１　加样回收率试验结果
原含量／
μｇ
加样量／
μｇ
测得量／
μｇ
回收率／
％
平均回收率／
％
ＲＳＤ／
％
５３．３７　 ４４．１０　 ９７．９７　 １０１．１３
５３．５０　 ４４．１０　 ９６．５６　 ９７．６４
５３．３０　 ４４．１０　 ９５．８５　 ９６．４９
５３．４５　 ４４．１０　 ９６．６６　 ９７．９８
５３．３６　 ４４．１０　 ９６．８６　 ９８．６４
５３．１３　 ４４．１０　 ９６．２５　 ９７．７８
９８．２８　 １．５９
２．７　醉鱼草果实总三萜的提取及含量测定　精密
称取醉鱼草果实粉末２ｇ，９５％乙醇回流提取２次，
每次１ｈ，合并滤液，甲醇定容至１００ｍｌ，平行３次，
按“２．１．３”项下步骤测定其吸光度，根据标准曲线计
算得其总三萜平均含量为４．１３％。见表２。
表２　醉鱼草果实总三萜含量测定
序号 总三萜含量／％ 平均含量／％ ＲＳＤ／％
１　 ４．１１
２　 ４．１９　 ４．１３　 １．３４
３　 ４．０９
３　讨论
香草醛－冰醋酸、高氯酸比色法是测定三萜类化
合物常用的方法。本实验组前期研究［２－３］表明，从醉
鱼草果实中得到的单体化合物大多为五环三萜，齐
墩果酸是存在于天然植物中常见的一种五环三萜，
因此本实验以齐墩果酸为对照品，建立紫外分光光
度法［６－８］对醉鱼草果实中总三萜进行含量测定的
方法。
醉鱼草果实总三萜的提取，曾选取不同浓度的
乙醇进行提取，结果发现９５％乙醇提取效果最好，
对比无水乙醇、甲醇与９５％乙醇作为提取溶剂时的
总三萜含量，效果相当，从安全、经济等方面综合考
虑，选用９５％乙醇作为提取溶剂。
对总三萜含量测定过程中显色试剂的加入量进
行筛选，确定最佳的加入量，５％香草醛－冰醋酸的用
量以０．２０ｍｌ为宜，高氯酸的用量以０．８０ｍｌ为宜，
且显色剂必须准确加入，否则将影响含量测定结果。
同时必须注意严格控制加热时间、水浴温度等条件，
尽量排除干扰，以保证测定结果的准确度，可采用多
次测量取平均值的方法避免偶然误差。
本研究测得醉鱼草果实中总三萜含量为
４．１３％，实验显示，回流提取的时间、次数等因素均
对醉鱼草果实总三萜的测定含量有一定影响，若增
加回流时间、次数，则测定结果可能高于此含量，因
此该提取方法仍有进一步优化的空间，具体工艺有
待进一步研究。
通过紫外分光光度法测定总三萜含量的方法操
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作简便、快速，结果可靠、稳定，重现性好，可用于醉
鱼草果实总三萜的含量测定。
参考文献：
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技术出版社，１９８６：１１２８－１１２９．
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究：Ⅰ［Ｊ］．安徽中医学院学报，２０１０，２９（６）：７１－７２．
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其活性研究［Ｊ］．中药材，２０１１，３４（１２）：１８８４－１８８７．
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ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔ［Ｊ］．Ｊ　Ａｓｉａｎ　Ｎａｔ　Ｐｒｏｄ　Ｒｅｓ，２０１２，
１４（４）：３４２－３４７．
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［Ｊ］．大理学院学报，２０１１，１０（１２）：２１－２３．
［７］林麒，吕华东．分光光度法测定灵芝孢子粉中总三萜含
量［Ｊ］．海峡预防医学杂志，２００９，１４（３）：４６－４７．
［８］弓晓峰，谢明勇，陈奕．黑灵芝中三萜及其皂苷类化合物
总量的光度测定［Ｊ］．天然产物研究与开发，２００６，１８：
８２５－８２９．
（收稿日期：２０１２－０６－０１）
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｏｔａｌ　Ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ　ｉｎ　Ｆｒｕｉｔ　ｏｆ　Ｂｕｄｄｌｅｊａ　ｌｉｎｄｌｅｙａｎａ　Ｆｏｒｔ．ｂｙ
Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ　Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ
ＲＥＮ　Ｙａ－ｓｈｕｏ１，２，ＷＵ　Ｄｅ－ｌｉｎｇ１，２，ＺＨＡＮＧ　Ｗｅｉ１，２，ＺＨＥＮＧ　Ｃｈｕａｎ－ｚｈｕ１，ＪＩＮ　Ｃｈｕａｎ－
ｓｈａｎ１，２，ＬＩＵ　Ｊｉｎ－ｓｏｎｇ１，２
（１．Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ａｎｈｕｉ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ａｎｈｕｉ　Ｈｅｆｅｉ　２３００３１，Ｃｈｉｎａ；
２．Ａｎｈｕｉ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｍｏｄｅｒｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ａｎｈｕｉ　Ｈｅｆｅｉ　２３００３１，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｆｒｕｉｔ
ｏｆ　Ｂｕｄｄｌｅｊａ　ｌｉｎｄｌｅｙａｎａ　Ｆｏｒｔ．ｂｙ　ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ（ＵＳ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＵＳ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｗａｓ
ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｏｎ　ｏｌｅａｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄ（ａｓ　ａ　ｃｏｎｔｒｏｌ）ａｎｄ　ａ　ｓａｍｐｌｅ　ｗｉｔｈ　５％ｖａｎｉｌｉｎ－ｇｌａｃｉａｌ　ａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ａｎｄ
ｐｅｒｃｈｌｏｒｉｃ　ａｃｉｄ　ａｓ　ｃｏｌｏｒ－ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ　ａｇｅｎｔ．Ｔｈｅ　ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ　ｏｆ　ｓａｍｐｌｅ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ａｔ　５４０ ｎｍ．
Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ａ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ　ｏｆ　ｏｌｅａｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄ
ｗｉｔｈｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　２．４５－２４．５μｇ／ｍｌ（Ａ＝０．０５９　４　Ｃ－０．０３７　９，ｒ＝０．９９９　８）．Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅ
ｗａｓ　９８．２８％，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｄｅｖｉａｔｉｏｎ　ｗａｓ　１．５９％ （ｎ＝６）．Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ　ｉｎ
ｔｈｅ　ｆｒｕｉｔ　ｏｆ　Ｂｕｄｄｌｅｊａ　ｌｉｎｄｌｅｙａｎａ　Ｆｏｒｔ．ｗａｓ　４．１３％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ＵＳ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｃａｎ　ｂｅ
ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｍｅａｓｕｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｆｒｕｉｔ　ｏｆ　Ｂｕｄｄｌｅｊａ　ｌｉｎｄｌｅｙａｎａ　Ｆｏｒｔ．ｂｅｃａｕｓｅ　ｏｆ
ｉｔｓ　ｓｉｍｐｌｉｃｉｔｙ，ｒａｐｉｄｎｅｓｓ，ａｎｄ　ｈｉｇｈ　ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｒｅｌｉａｂｉｌｉｔｙ．
［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］ｆｒｕｉｔ　ｏｆ　Ｂｕｄｄｌｅｊａ　ｌｉｎｄｌｅｙａｎａ　Ｆｏｒｔ．；ｔｏｔａｌ　ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ；ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ；ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
·征订启事·
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