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研
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茶树根抗痛风活性部位的筛选研究
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★ 余雄英1 周军1＊＊ 曹树稳2 左爱仁1 (1． 江西中医药大学 南昌 330004 ;2，南昌大学食品科学与
技术国家重点实验室 南昌 330047)
摘要:目的:比较茶树根总黄酮和总皂苷对高尿酸血症小鼠尿尿酸、血尿酸、血黄嘌呤氧化酶活性的影响和对抗急性痛风性关
节炎作用以及体外对黄嘌呤氧化酶活性抑制作用，探讨茶树根防治痛风的活性部位。方法:用尿酸和氧嗪酸钾 ip小鼠造成小
鼠高尿酸血症模型，分光光度法检测尿酸水平和黄嘌呤氧化酶活力;以尿酸钠结晶植入法观察茶树根总黄酮和总皂苷抗急性
痛风性关节作用;以含酶动力学分析软件的分光光度计在波长 290nm 处测定茶树根总黄酮和总皂苷对黄嘌呤氧化酶活性的
抑制作用。结果:茶树根总黄酮在降血尿酸和促尿酸排泄以及抑制黄嘌呤氧化酶活性上起主要作用，茶树根总皂苷则对急性
痛风性关节炎起主要抑制作用。结论:茶树根总黄酮和总皂苷均为茶树根抗痛风的药效部位。
关键词:茶树根;总黄酮;总皂苷;抗痛风;活性部位
中图分类号:Ｒ284． 0 文献标识码:A
Study on the Active Fractions about Anti － gout of Tee Ｒoot
YU Xiong － ying1，ZHOU Jun1，CAO Shu － wen2，ZUO Ai － ren1
1． Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanchang 330004 ，China;
2． Nanchang University，Food Science and Tenology State Key Laboury，Nanchang 330047，China．
Abstract:Objective:To study the active fractions of tee root about anti － gout by comparative study the effects of total flavonoids and to-
tal saponins of tee root on urine uric acid and blood uric acid and serum xanthine oxidase activity in hyperuricemia mice and the effects
on acute gouty arthritic mice and the effects on the inhibition on Xanthine oxidase activity of them in vitro． Methods:We injected oxonic
acid potassium and uric acid into the abdominal of mice to made the hyperuricemia in mice，and determined serum uric acid and urine
uric acid and serum xanthine oxidase activity by spectrometric method． In addition，Monosodium urate crystals were used to establish
gouty arthritis model rats，We detected the inhibition of Swelling degree on the right foot pad part of mice． At last ，We determined the
Inhibition of the total flavonoids and the total saponin of tee root on xanthine oxidase in vitro by spectrophotometer with enzyme kinetics
software in the wavelength of 290nm． Ｒesults:The results showed that total flavonoids of tee root could not only reduce the serum uric
acid and serum xanthine oxidase activity and increase urine uric acid in hyperuricemia mice，but also inhibit xanthine oxidase in vitro．
But total saponin of tea root has few effection on the above bioactivity． On the contrary，total saponin of tea root had much stronger anti
acute gout arthritis effect than total flavonoids of tee root． Conclusion:Total flavonoids of tee root and total saponins of tee root are the
active fractions about anti － gout of tee root．
Key words:Tee Ｒoot;Total Flavonoids;Total Saponins;Anti － gout;Active Fraction
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江 西中医药大学学报2015年12月第27卷第6期
JOUＲNAL OF JIANGXI UNIVEＲSITY OF TCM 2015 Vol. 27 No. 6
＊
＊＊
基金项目:江西省卫生计生委中医药科研计划项目(2015B017) ;江西中医药大学重点学科教师培养计划资助项目(2012jzzdxk018)。
通信作者:周军 ，讲师。Tel:(0791)87118921，E － mail:jessechoujun@ sina． com。
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痛风是一种慢性代谢紊乱性疾病，它的主要特
点是高尿酸血症［1］。随着人们生活水平的提高和
饮食结构的改变，全球痛风发病率与日俱增，并呈年
轻化趋势，成为第二大威胁人类生命和健康的代谢
性疾病，因此研发防治痛风、高尿酸血症的药物成为
目前医药界研究的一个热点。现代医学理论证实痛
风病的致病因素之一是黄嘌呤氧化酶，黄嘌呤氧化
酶简称 XOD。XOD是体内尿酸生成的关键酶，它能
催化次黄嘌呤和黄嘌呤转化为尿酸。可知 XOD 抑
制剂可减少体内尿酸生成，防治痛风发生。此外，促
进尿酸排泄也可治疗痛风，另外，抗炎镇痛药物可减
轻痛风症状，减少病人痛苦。因此寻求安全有效，具
有综合防治痛风作用的药物对高尿酸血症、痛风患
者来说是一种福音。
茶树根是山茶科山茶属植物茶的根，味苦，性
平，具有强心利尿、抗菌消炎等功效［2］。在江西民
间茶树根还常被用来治疗痛风。在我们的前期实验
中发现茶树根水煎剂抗痛风作用是较全面的。但茶
树根抗痛风作用的物质基础和作用机制尚不明确，
因此本实验通过观察茶树根各药效部位对高尿酸血
症模型小鼠的尿酸、XOD 水平的影响，对急性痛风
性关节炎模型小鼠的作用，以及它们体外对 XOD活
性的抑制作用，探讨茶树根抗痛风的药效物质和作
用机制。
1 材料
1． 1 实验药材 药材茶树根采挖于江西井冈山，经
鉴定为山茶科山茶属植物茶(原变种)Camellia
sinensis (L．)O． Ktze． var． sinensis 的根。
1． 2 试剂 AB － 8 型大孔树脂(南开大学化工
厂) ;芦丁(中国药品生物制品检定所，批号 100080
－ 200707) ;熊果酸(中国药品生物制品检定所，批
号 100080 － 2010 07) ;氧嗪酸钾盐，尿酸，黄嘌呤氧
化酶，黄嘌呤，别嘌呤醇均购自美国 Sigma 公司;吲
哚美辛片(江苏亚邦药业集团股份有限公司制造分
公司) ;尿酸测定试剂盒(南京建成生物工程研究
所，批号 20110527) ;XOD 测定试剂盒(南京建成生
物工程研究所，批号 20110628) ;其余试剂为分析
纯。
1． 3 仪器 药物粉碎机、恒温水浴锅(江苏省金坛
市顺华仪器有限公司) ;药物天平(上海医用激光仪
器厂) ;电子天平(江苏常熟长青仪器仪表厂) ;游
标卡尺(东莞宇诚精密仪器有限公司) ;紫外分光光
度计(日本岛津)。
1． 4 动物 雄性昆明种小鼠，体重(22 ± 2)g，由江
西中医药大学实验动物科技中心提供，使用许可证
号:SCXK(赣)2011 － 0001。实验小鼠于实验前在实
验室喂养 1 周。
2 方法
2． 1 茶树根总黄酮和总皂苷的提取与含量测定
茶树根粗粉用 10 倍量 70%乙醇回流 2 次(1． 5h，
1h) ，减压回收乙醇至无醇味，得茶树根浓缩液。茶
树根浓缩液进行 AB －8 大孔吸附树脂柱层析，依次
用水，30%乙醇，70%乙醇，95%乙醇洗脱，去除水洗
脱部分和 95%乙醇洗脱部分，将 30%乙醇洗脱部
分和 70%乙醇洗脱部分分别浓缩至无醇味，冻干分
别作为茶树根总黄酮和总皂苷样品。参照文献［3］，
以熊果酸为标样，采用香草醛 －冰醋酸显色法测定
茶树根 30%乙醇洗脱部分与 70%乙醇洗脱部分的
总皂苷含量，以芦丁为标样，采用亚硝酸钠，硝酸铝
显色法测定茶树根 30%乙醇洗脱部分与 70%乙醇
洗脱部分的总黄酮含量。
2． 2 高尿酸模型小鼠体内抗痛风药效实验进行药
效部位群的筛选
2． 2． 1 动物造模 参照文献方法［4 － 6］用氧嗪酸钾
和尿酸 ip 小鼠，增加血清尿酸水平，造成小鼠高尿
酸血症模型。雄性昆明种小鼠适应性饲养一周后随
机分成生理盐水组、高尿酸模型组、茶树根总黄酮
组、茶树根总皂苷组、别嘌呤醇组共 5 组，每组 10
只。除生理盐水组外，其他各组均以氧嗪酸钾和尿
酸 ip小鼠，连续 2 d进行造模以增加血清尿酸水平，
造成小鼠高尿酸血症模型。
2． 2． 2 实验操作 生理盐水组和高尿酸模型组每
天均按 20 mL /kg剂量 ig生理盐水，连续 6d，别嘌呤
醇组(10 mg /kg)每天 ig给药 1 次，持续 6 d，茶树根
总黄酮组、茶树根总皂苷组小鼠以 0． 548g /kg 剂量
灌喂 6d，从给药第 5 天开始，除生理盐水组外，其他
各组每天 ig 给药前 1h 均要 ip 氧嗪酸钾和尿酸，氧
嗪酸钾和尿酸的剂量分别为 0． 3g /kg 和 0． 25g /kg，
每天 1 次，连续 2 d 进行造模。在第 5 天 ig 给药后
将小鼠放置代谢笼内，每 5 只一笼，只给自由饮水，
不给饲料，收集尿液 5h，新鲜尿样以 3000r /min 离
心 15min，取上清液进行尿液尿酸测定。收集尿液
后小鼠继续喂养，在第 6 天 ig 给药 1h 后从小鼠股
动脉进行采血，血样分别置于 1． 5mL 离心管中，在
4℃冰箱中凝固 2h，在 3000r /min 低温离心 5min。
每份血样血清进行血清尿酸水平和血清 XOD 活力
测定。
2． 2． 3 生化指标检测 分别测定小鼠尿尿酸、血尿
酸水平和血 XOD 活性。采用磷钨酸法检测各组小
鼠尿尿酸和血尿酸，酶比色法检测 XOD活性。具体
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余雄英等:茶树根抗痛风活性部位的筛选研究
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操作按试剂盒说明书进行。
2． 3 茶树根药效部位对急性痛风性关节炎模型小
鼠的影响
2． 3． 1 尿酸钠溶液的制备 参照文献［7］略作改
进，取 l g 尿酸加氢氧化钠(1mM)200mL，煮沸，用
1N盐酸调 pH 至 7． 2 ，搅拌冷却后于 4℃冰箱中过
夜析晶，抽滤干燥得尿酸钠结晶。取尿酸钠结晶，以
生理盐水作溶剂，以总体积的 10%的量加入吐温
80，调配成 25mg /mL尿酸钠混悬液备用。
2． 3． 2 急性痛风性关节炎小鼠模型建立 在文
献［8］方法上略改进，用 6 号注射针在实验小鼠右足
垫部注射尿酸钠混悬液 0． 05mL，建立小鼠急性痛风
性关节炎模型。
2． 3． 3 实验操作 50 只雄性小鼠随机分为 5 组，
每组 10 只。造模前 6 天开始灌胃给药(茶树根总黄
酮组、茶树根总皂苷组小鼠以 0． 548 g /kg 剂量，吲
哚美辛组以 0． 05mg /kg 剂量) ，每日 1 次 。生理盐
水组以同体积生理盐水灌胃。于末次给药 30min
后，除生理盐水组小鼠在右足垫部注射生理盐水
0. 05mL外，其余各组在小鼠右足垫部注射尿酸钠混
悬液 0． 05mL，诱导急性痛风性关节炎发生。分别用
游标卡尺测量各组小鼠在致炎前后 1，3，5h 后测定
小鼠右足垫部的厚度，以致炎前后的差值作为痛风
性关节炎的肿胀度。通过造模小鼠在治疗前后各组
关节肿胀的变化，进行组间差异性比较。
2． 4 体外 XOD活性抑制实验筛选药效部位群
2． 4． 1 酶活性测定 参照 Cos 等［9］描述方法略作
修改，用分光光度法在 290 nm 处测定尿酸光密度
值以确定 XOD 活力。反应温度 25℃，总反应体系
3mL(包括含 1 mM /L EDTA 的 0． 05 mol /L pH
7. 5PBS缓冲溶液、0． 15mM 黄嘌呤底物溶液、0． 02
U XOD) ，以缓冲液调零，磷酸盐缓冲液 1 mL 和 2
mL黄嘌呤溶液作为空白对照组;以 pH7． 5 的磷酸
盐缓冲液 0． 9ml和 2ml黄嘌呤溶液，加入 0． 2 U /mL
XOD 0． 1 mL，混匀，作为正常组。测定前先在恒温
水浴锅中 25℃孵育 10min，加酶开始启动反应，立即
计时，测定 290nm处吸光度增加值 ，每隔 30s 记录
一次，共测 1． 8min，得到一条关于吸光度与时间的
直线，计算直线斜率 Ｒate(dmA /min)。
2． 4． 2 样品抑制 XOD 测定 各药效部位冻干粉，
分别用 DMSO 溶解成 50ug /uL 作为样品液，用于
XOD活性测定。参照步骤 2． 4． 1 方法，在酶反应体
系中加入 0． 05mL 200ug /mL的样品，测定 290nm处
吸光度增加值 ，计算直线斜率 Ｒate(dmA /min)。
每个样品平行操作 3 次，取斜率平均值计算样品的
抑制率。在酶反应体系中加入 0． 05mL 不同浓度的
样品，测定不同浓度样品对 XOD 抑制率，以计算样
品的 IC50。
2． 4． 3 茶树根总黄酮和总皂苷对 XOD抑制作用类
型的初步判断 分别配制不同样品浓度的茶树根总
黄酮和总皂苷溶液(100，400μg /mL，) ，和不同浓度
的底物黄嘌呤(浓度分别为 0． 01，0． 02，0． 03，0． 05，
0． 1mmol /L) ，参照 2． 4． 1 方法，将测定样液在恒温
水浴锅中孵育 10min 后，加酶启动反应，计时
1. 8min，测定在 290nm 处的吸光度变化的直线斜
率，以直线斜率的倒数对底物浓度的倒数作图，即双
倒数作图法判断茶树根总黄酮和总皂苷的抑制类
型。
2． 5 统计与处理 采用 SPSS 19． 0 进行统计学处
理，对所有计量资料数据，小鼠体内试验进行单因素
方差分析及显著性、相关性检验。结果以 珋x ± s 表
示，组间比较，P ＜ 0． 05 为有统计学意义。
3 结果
3． 1 茶树根药效部分总黄酮和总皂苷含量 采用
标准曲线对照法，以芦丁为标样，用亚硝酸钠硝酸铝
显色法测定茶树根 30%和 70%乙醇洗脱部分的总
黄酮含量，以熊果酸为标样，采用香草醛 －冰醋酸显
色法测定茶树根 30%和 70%乙醇洗脱部分的总皂
苷含量。结果表明茶树根 30%洗脱部分为茶树根
总黄酮部分，茶树根 70%洗脱部分为茶树根总皂苷
部分。结果见表 1。
表 1 茶树根 30%和 70%乙醇洗脱部分总黄酮和总皂苷含
量
样品 总黄酮含量 /% 总皂苷含量 /%
30%洗脱部分 79． 14 18． 3
70%洗脱部分 4． 38 62． 31
3． 2 对高尿酸血症模型小鼠血尿酸的影响 与生
理盐水组比较，模型组中血清尿酸显著升高(P ＜ 0．
01) ，与模型组比较，茶树根总黄酮显著降低血清尿
酸水平(P ＜ 0． 01)。茶树根总黄酮和总皂苷组之间
有显著差异(P ＜ 0． 05) ，而别嘌呤醇组显著降低高
尿酸血症小鼠血清尿酸水平(P ＜ 0． 001) ，能降至正
常值以下，结果见表 2。
3． 3 对高尿酸血症模型小鼠尿尿酸的影响 与生
理盐水组比较，模型组中尿尿酸显著升高(P ＜ 0．
01)。与模型组比较，茶树根总黄酮显著增加尿尿
酸水平(P ＜ 0． 01)。茶树根总黄酮和总皂苷组之间
有显著差异(P ＜ 0． 01) ，茶树根总皂苷组和别嘌呤
醇组几乎不能增加高尿酸血症小鼠尿尿酸水平，结
果见表 2。
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江西中医药大学学报 2015 年 12 月第 27 卷第 6 期
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3． 4 对高尿酸血症模型小鼠血清 XOD活性的影响
与生理盐水组比较，模型组中血清 XOD活性显著
升高(P ＜ 0． 01)。与模型组比较，茶树根总黄酮显
著降低血清 XOD 活性(P ＜ 0． 05)。茶树根总黄酮
和总皂苷组之间有显著差异(P ＜ 0． 05) ，别嘌呤醇
组可极显著降低高尿酸血症小鼠血清 XOD 活性水
平，结果见表 3。
表 2 茶树根各药效部位对高尿酸血症小鼠尿酸水平的影
响 (珋x ± s，n = 10)
组别 剂量 / g·kg － 1 血清尿酸水平 / mg· L － 1 尿尿酸水平 / mg· L － 1
生理盐水组 － 56． 09 ± 6． 02＊＊ 103． 87 ± 13． 15＊＊
模型组 － 78． 69 ± 5． 63 118． 27 ± 25． 25
茶树根总黄酮
组
0． 548 68． 07 ± 8． 73＊＊△ 126． 06 ± 23． 14＊＊△△
茶树根总皂苷
组
0． 548 77． 93 ± 7． ． 18 103． 43 ± 31． 18
别嘌呤醇组 0． 01 41． 56 ± 3． 13＊＊＊ 116． 32 ± 26． 13
注:与模型组比较 * P ＜ 0． 05 ，＊＊P ＜ 0． 01 ，＊＊＊P ＜ 0． 001;
茶树根药效部位组间比较△P ＜ 0． 05，△△P ＜ 0． 01。
3 ． 5 茶树根对痛风性关节炎小鼠的影响 模型组
与生理盐水组比较有显著差异(P ＜ 0． 01) ，与模型
组相比，茶树根总皂苷在不同时间点(3、5 h)对尿酸
盐诱导的小鼠足肿胀有显著抑制作用(P ＜ 0． 01) ，
而茶树根总黄酮则抑制肿胀作用较弱(P ＜ 0． 05)。
说明茶树根总皂苷对小鼠痛风性关节炎有显著拮抗
作用，结果见表 4。
表 3 茶树根各药效部位对高尿酸血症小鼠 XOD 活性影响
(珋x ± s，n = 10)
组别 剂量 / g·kg －1 血清 XOD活力水平 /U· L －1
生理盐水组 － 30． 08 ± 3． 91＊＊
模型组 － 39． 46 ± 9． 46
茶树根总黄酮
组
0． 548 38． 52 ± 4． 26＊△
茶树根总皂苷
组
0． 548 40． 04 ± 4． 31
别嘌呤醇组 0． 01 26． 3 ± 3． 33＊＊
注:与模型组比较 * P ＜ 0． 05 ，＊＊P ＜ 0． 01;茶树根药效部位
组间比较△P ＜ 0． 05。
表 4 茶树根各药效部位对痛风性关节炎小鼠模型的影响(珋x ± s，n = 10)
组别 剂量 / g·kg －1 致炎前足垫宽度 /mm
致炎后不同时间足肿胀度 /mm
1h 3h 5h
生理盐水 － 4． 35 ± 0． 13 0． 01 ± 0． 10 0． 03 ± 0． 15 0． 02 ± 0． 17
模型组 － 4． 68 ± 0． 15 1． 02 ± 0． 07△△ 1． 85 ± 0． 12△△ 2． 21 ± 0． 22△△
吲哚美辛组 0． 00005 4． 34 ± 0． 11 0． 67 ± 0． 19＊＊ 0． 98 ± 0． 16＊＊＊ 0． 101 ± 0． 10＊＊＊
茶树根总皂苷组 0． 548 4． 58 ± 0． 15 0． 95 ± 0． 16 1． 13 ± 0． 18＊＊ 1． 14 ± 0． 22＊＊
茶树根总黄酮组 0． 548 4． 62 ± 0． 23 1． 03 ± 0． 14 1． 65 ± 0． 12* 1． 79 ± 0． 19*
注:与生理盐水组比较:△△P ＜ 0． 01;与模型组比较* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01，＊＊＊P ＜ 0． 001。
3． 6 茶树根各药效部位对 XOD的抑制率和 IC50
根据公式:抑制率 =［(Ｒp 一 Ｒs)/Ｒp］× 100% 计
算样品对 XOD 的抑制率。式中 Ｒs、Ｒp 分别代表样
品、对照 (无样品)的直线斜率。按照抑制率的计
算，底物浓度为 0． 15mmol /L，样品浓度均为 200μg /
mL，别嘌呤醇浓度为 5μg /mL，得到抑制 XOD 能力
较强的药效部位为茶树根总黄酮。以样品浓度为自
变量，抑制率为因变量，采用 SPSS 19． 0 统计软件包
计算回归方程，根据回归方程计算 XOD 抑制率为
5O%的样品浓度即 IC50，抑制率和 IC50实验结果如
表 5 所示。
表 5 茶树根各药效部位对 XOD的抑制效果(n = 3)
样品 抑制率 / % IC50 /μg·mL －1
茶树根总黄酮 35． 35 ± 0． 24 354． 72 ± 0． 72
茶树根总皂苷 6． 98 ± 0． 17 －
别嘌呤醇组 91． 24 ± 0． 31 1． 17 ± 0． 05
3． 7 茶树根总黄酮对 XOD抑制作用机制的判断
由图 1 可知，以直线斜率的倒数对底物浓度的倒数
作图，即双倒数作图，不同浓度的茶树根总黄酮进行
双倒数作图所得到的双倒数直线，各直线有交点，但
各直线的交点均未在坐标轴上，最大反应速度 Vmax
和 Km值均随茶树根总黄酮浓度的变化而改变，说
图 1 茶树根总黄酮对 XOD抑制机制
明茶树根总黄酮对 XOD 的抑制作用既不是竞争性
也不是非竞争性，由此初步判断茶树根总黄酮对黄
嘌呤氧化酶的抑制作用可能是混合性的。
4 讨论
茶树根中主要含总黄酮和总皂苷类成分，制备
茶树根总黄酮和总皂苷进行体内外抗痛风作用实验
筛选，实验结果表明茶树根总黄酮在降尿酸和抑制
黄嘌呤氧化酶活性上均起主要作用，茶树根总黄酮
能显著降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平(P ＜
0. 01)和显著增加尿尿酸水平(P ＜ 0． 01)以及显著
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余雄英等:茶树根抗痛风活性部位的筛选研究
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降低血清 XOD 活性(P ＜ 0． 05)。在体外抑制 XOD
作用中，茶树根总黄酮呈现一定的抑制 XOD 作用，
这与黄酮类具有黄嘌呤氧化酶抑制作用［9］相符。
茶树根总黄酮 IC50为 354． 72 ± 0． 72μg /mL，抑制
XOD类型初步判断为混合型抑制剂。茶树根总皂
苷对尿酸盐诱导的小鼠足肿胀有显著抑制作用(P
＜ 0. 01)。因此茶树根总黄酮有促进尿酸排泄和抑
制黄嘌呤氧化酶活性作用，茶树根总皂苷对急性痛
风性关节炎起主要抑制作用;茶树根总黄酮和总皂
苷均为茶树根抗痛风的药效部位群。
本实验中，虽然茶树根总黄酮抑制 XOD 的作用
弱于别嘌呤醇，别嘌呤醇可极显著降低高尿酸血症
小鼠血清 XOD 水平(P ＜ 0． 001)。体外抑制 XOD
IC50为 1． 17 ± 0． 05μg /mL。但茶树根总黄酮除了直
接抑制 XOD 活性外，还可以促进尿酸排泄，别嘌呤
醇则不能增加尿酸排出。同时总黄酮具有抗氧化作
用，可以清除超氧离子等自由基作用［10］。因此茶树
根总黄酮抗痛风作用是较全面的和综合的。可见茶
树根抗痛风作用是全面而综合的，茶树根总黄酮和
总皂苷均为茶树根抗痛风的药效部位，不同药效部
位抗痛风机制有所不同，本实验为茶树根抗痛风临
床研究奠定了基础。
参考文献
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(收稿日期:2015 － 03 － 12)编辑:
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曾文雪
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江西中医药大学学报编辑部
2015 年 7 月 17 日
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江西中医药大学学报 2015 年 12 月第 27 卷第 6 期