全 文 ：收稿日期:2013-05-07
基金项目:国家教育部博士点基金项目(20112133110001);沈阳市科委计划项目(F12-277-1-13)
作者简介:张宇瑶(1989-)，女，在读硕士研究生，专业方向:中药品质评价研究;E-mail:zyuyao00@ 126. com。
* 通讯作者:翟延君，Tel:0411-87586003，E-mail:lnzyzyj@ sohu. com。
荭草花 HPLC特征指纹图谱研究
张宇瑶，佟苗苗，初正云，康晓燕，翟延君*
(辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600)
摘要 目的:建立荭草花 HPLC 特征指纹图谱，为该药材的品质评价提供参考。方法:以花旗松素为参照物，
采用 HPLC法，Diamonsil C18(200 mm ×4. 6 mm，5 μm)色谱柱;流动相为乙腈-0. 1%磷酸(梯度洗脱);检测波长为
280 nm;流速为 1. 0 mL /min;柱温为 30 ℃。结果:12 个不同产地的荭草花药材指纹图谱标定出 18 个共有峰，其中
指认出 4 个共有峰，分别为花旗松素、儿茶素、没食子酸、3，3-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-葡萄糖苷。通过“中药色谱
指纹图谱相似度评价系统”软件计算，12 个不同产地荭草花指纹图谱相似度均大于 0. 9。结论:本实验方法重现性
好，指纹图谱专属性强，可为荭草花药材的鉴别及质量控制提供科学依据。
关键词 荭草花;HPLC指纹图谱;花旗松素
中图分类号:Ｒ282. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2013)12-1937-03
Study on Characteristic HPLC Fingerprint of Polygonum orientale Inflorescence
ZHANG Yu-yao，TONG Miao-miao，CHU Zheng-yun，KANG Xiao-yan，ZHAI Yan-jun
(College of Pharmacy，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600，China)
Abstract Objective:To establish a characteristic HPLC fingerprint of Polygonum orientale inflorescence，and to provide reference
for its quality evaluation. Methods:Taxifolin was used as reference. HPLC analysis was carried out with Diamonsil C18 column(200 mm
×4. 6 mm，5μm)using acetonitrile -0. 1% phosphoric acid(gradient elution)as mobile phase at flow rate of 1. 0 mL /min. The detec-
tion wavelength was set at 280 nm and the column temperature was 30 ℃. Ｒesults:Eighteen common peaks were pointed out from the
HPLC fingerprint of Polygonum orientale inflorescence from 12 different habitats. Among of them，four common peaks were identified as
taxifolin，catechin，gallic acid and 3，3-dimethyl ellagic acid-4-O-β-D-glucoside. Analyzed by“Similarity Evaluation for Chromato-
graphic Fingerprint of Traditional Chinese Medicine”software，the HPLC fingerprint similarities of 12 samples were more than 0. 9. Con-
clusion:This method is repeatable and exclusive. It can be used for identification and quality control of Polygonum orientale inflorescence.
Key words Polygonum orientale L.;HPLC Fingerprint;Taxifolin
荭草花为蓼科植物红蓼 Polygonum orientale L.
的干燥花序，又名水荭花、何草花，始载于《本草纲
目》，《中华本草》和《中药大辞典》均有记载。荭草
花性温，味辛，具有行气活血、消积、止痛的功效。用
于治疗头痛、心胃气痛、腹中痞积、风湿性关节炎等
症〔1，2〕。现代研究表明，荭草花在心血管方面具有
较好的药理活性，能够增加离体心脏的冠脉流量，具
有较强的抗心肌缺血和减少心肌梗死面积的作
用〔3〕。有关荭草花生药学及化学成分研究资料很
少，药材质量控制及指纹图谱研究笔者尚未见报道。
本实验采用 HPLC 法对 12 个不同产地自采荭草花
进行了指纹图谱研究，旨在为荭草花药材的品种鉴
定与质量评价提供科学参考。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 Agilent 1260 型高效液相色谱仪(美国
安捷伦公司);国产 AＲ 级 2140 型电子天平，MET-
TLEＲ AB135-S 十万分之一电子天平(瑞士梅特勒
公司)。
1. 2 试剂 花旗松素、儿茶素、没食子酸、3，3-二
甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-葡萄糖苷对照品均为本实验
室自制，经 HPLC 法面积归一化法计算质量分数均
大于 98%。乙腈为色谱纯(Grade 公司)，水为娃哈
哈纯净水;其他试剂均为分析纯。
1. 3 材料 12 个不同产地荭草花药材采自辽宁省
不同地区(见表 1)，均为自采，由笔者翟延君教授鉴
定为蓼科植物红蓼 Polygonum orientale L. 的花序。
表 1 荭草花样品采集地
样品编号 采集地 样品编号 采集地
S1 沈阳东陵 S7 大连瓦房店
S2 大连南关岭 S8 丹东
S3 沈阳于洪 S9 沈阳四台子
S4 本溪小市 S10 抚顺
S5 锦州 S11 铁岭开原
S6 鞍山千山 S12 本溪桓仁
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DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2013.12.021
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 采用 Diamonsil C18(200 mm × 4. 6
mm，5 μm)色谱柱;流动相 A 相为乙腈，B 相为
0. 1%磷酸，进行梯度洗脱;0 ～ 32 min，5% ～ 16% A;
32 ～ 55 min，16%A;55 ～ 110 min，16% ～ 30% A。柱
温:30 ℃，检测波长:280 nm，流速:1. 0 mL /min，进
样体积:10 μL。
2. 2 对照品溶液的制备 分别取花旗松素、儿茶
素、没食子酸、3，3-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-葡萄
糖苷对照品适量，精密称定，加甲醇制得每 1 mL 分
别含花旗松素、儿茶素、没食子酸、3，3-二甲氧基鞣
花酸-4-O-β-D-葡萄糖苷 0. 875 mg、0. 130 mg、0. 116
mg、0. 656 mg的溶液，用 0. 45 μm微孔滤膜滤过，即
得。
2. 3 供试品溶液的制备 取荭草花药材样品粉末
(过 60 目筛)约 1. 0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，
精密加入 80%甲醇 50 mL，密塞，称重，水浴回流 2
h，放冷，再称重，用 80%甲醇补足失重，摇匀，滤过，
精密吸取续滤液 25 mL，回收溶剂至 2 ～ 3 mL，用
50%甲醇溶解并定容至 10 mL，经 0. 45 μm 微孔滤
膜滤过，取续滤液，即得。
2. 4 方法学考察
2. 4. 1 精密度试验:取同一供试品溶液，按“2. 1”
项下色谱条件连续进样 6 次，测得各共有峰的相
对保留时间 ＲSD 为 0. 14% ～ 1. 60%，相对峰面积
ＲSD为 0. 40% ～2. 30%。表明仪器精密度良好。
2. 4. 2 稳定性试验:取同一供试品溶液，分别在制
备后 0、4、8、12、18、24、48 h 进行测定，测得各共有
峰的相对保留时间 ＲSD为 0. 22% ～1. 90%，相对峰
面积 ＲSD为 1. 70% ～ 2. 80%。表明供试品溶液在
48 h内稳定。
2. 4. 3 重复性试验:取同一样品 6 份，精密称定，
按“2. 3”项下方法制备供试品溶液，进行测定，测得
各共有峰的相对保留时间 ＲSD为 0. 23% ～ 1. 50%，
相对峰面积 ＲSD 为 1. 50% ～ 3. 20%。表明方法重
复性良好。
2. 5 样品分析 将 12 批样品按“2. 3”项下方法制
备供试品溶液，照“2. 1”项下色谱条件下进行测定，
得到 12 个不同产地荭草花 HPLC特征指纹图谱，确
定了 18 个共有峰，并指认了其中 4 个共有峰，分别
为没食子酸(2 号峰)，儿茶素(5 号峰)，花旗松素
(13 号峰)，3，3-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-葡萄糖
苷(14 号峰)。荭草花药材样品共有模式及对照品
HPLC图谱见图 1。
图 1 荭草花药材样品共有模式及对照品 HPLC图
A. 对照品 B. 样品共有模式
2. 没食子酸 5. 儿茶素 13. 花旗松素 14. 3，3-二甲氧
基鞣花酸-4-O-β-D-葡萄糖苷
2. 6 HPLC指纹图谱的建立
2. 6. 1 共有峰的标定:荭草花 HPLC 指纹图谱共
有峰 18 个，以 13 号峰(花旗松素)为参照峰(S)，计
算各色谱峰保留时间和峰面积与同一图谱中 S峰的
保留时间和峰面积比值，得到的相对保留时间和相
对峰面积，其ＲSD分别为0. 11% ～ 0. 95%和11. 75%
～73. 34%。结果见表 2。
表 2 12 个不同产地荭草花药材样品共有峰的
相对保留时间及相对峰面积
共有峰
峰号
相对保留时间 相对峰面积
平均值 ＲSD /% 平均值 ＲSD /%
1 0. 108 0. 36 0. 062 48. 32
2 0. 156 0. 51 0. 206 51. 70
3 0. 310 0. 42 0. 109 72. 09
4 0. 439 0. 29 0. 253 53. 31
5 0. 489 0. 15 0. 088 20. 93
6 0. 556 0. 19 0. 519 32. 73
7 0. 619 0. 26 0. 124 27. 90
8 0. 668 0. 26 0. 030 48. 14
9 0. 684 0. 29 0. 028 30. 27
10 0. 705 0. 75 0. 080 15. 94
11 0. 771 0. 39 0. 047 22. 76
12 0. 881 0. 25 0. 081 70. 99
13(S) 1 0 1 0
14 1. 065 0. 11 0. 116 11. 75
15 1. 103 0. 18 0. 189 49. 61
16 1. 691 0. 79 1. 146 54. 02
17 1. 770 0. 95 0. 325 26. 30
18 2. 041 0. 93 0. 281 73. 34
2. 6. 2 系统聚类分析:将 12 个不同产地荭草花药
材各共有峰的峰面积与参照峰的峰面积相比，即相
对峰面积，得到 12 × 18 阶原始数据矩阵，运用
“SPSS统计分析软件”对其进行系统聚类分析，采用
组间连接法，利用欧氏距离(Euclidean)作为样品的
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测度，聚类分析将 12 个样品之间相关系数按由大到
小的顺序合并，12 个样品被分为 3 类。结果见图 2。
图 2 荭草花药材样品指纹图谱聚类分析图
2. 6. 3 荭草花指纹图谱相似度评价:将所得的 12
个不同产地荭草花药材的 HPLC 图依次导入“中药
色谱指纹图谱相似度评价系统”软件(2004 A版)，
以 S1 批药材图谱作为参照图谱，多点校正后自动匹
配，生成对照指纹图谱(Ｒ)，见图 3。指纹匹配结果
表明，12 批荭草花药材 HPLC 指纹图谱相似度均大
于 0. 9，见表 3。说明所建立的荭草花药材指纹图谱
技术指标稳定，可反映其指纹特征。
图 3 12 个不同产地荭草花药材样品 HPLC图
3 结论与讨论
花旗松素是荭草花中的有效成分之一，有较强
抗氧化和体外抗肿瘤活性;荭草花药材HPLC特征
表 3 12 个不同产地荭草花药材样品相似度
样品编号 相似度 样品编号 相似度
S1 0. 985 S7 0. 921
S2 0. 932 S8 0. 980
S3 0. 988 S9 0. 990
S4 0. 943 S10 0. 981
S5 0. 976 S11 0. 982
S6 0. 983 S12 0. 959
指纹图谱中花旗松素的含量相对稳定，保留时间适
中，且与相邻峰分离度较好，因此本实验选择花旗松
素为该药材参照峰。
荭草花为民间及民族常用药，具有较强的抗心
肌缺血和心肌梗死的作用。本文通过对 12 个不同
产地自采药材进行 HPLC 指纹图谱研究，建立了荭
草花特征指纹图谱，确定了 18 个共有峰，指认了 4
个特征峰，分别是没食子酸、儿茶素、花旗松素、3，
3-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D 葡萄糖苷。聚类分析
结果与荭草花药材的生长环境和地理位置具有一定
的相关性，在欧氏距离为 8 时，1、3 ～ 6、9 ～ 12 号样
品聚为一类;在欧氏距离为 3 时，2、7 号样品聚为一
类，分析原因可能是因为它们的生长环境和地理位
置比较接近。通过“中药色谱指纹图谱相似度评价
系统”软件(2004 A版)计算，指纹图谱与对照图谱
之间相似度均大于 0. 9。从分析结果可以看出，该
实验方法重现性好，指纹图谱专属性强，荭草花药材
的质量较稳定，均一性较好，本研究为荭草花的品质
评价提供了科学参考。
参 考 文 献
［1］国家中医药管理局《中华本草》编委会．中华本草［M］．
第二册．上海:上海科学技术出版社，1998:681-683.
［2］贵州省药品监督管理局． 贵州省中药民族药质量标准
［S］．贵阳:贵州科学技术出版社，2003:267.
［3］黄勇，郑林，王爱民，等．荭草不同药用部位抗心肌缺血
作用及化学成分比较研究［J］．时珍国医国药，2010，21
(10):
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2520-2522.
《中药材》杂志为中国中文核心期刊。
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