全 文 ：FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
食 品 科 技
2009年 第 34卷 第 4期
苎麻叶中总多酚的含量测定
Determination of the contents total polyphenol in Boehmeria Nivea
(Linn.) Gaudich
ZHOU Yuan, YU Ling-ling, LI Xin-lan , ZOU Kun*
(Hubei Key Laboratory of Natural Products Research andDevelopment, College of Chemistry and
Life Sciences, China ThreeGorges University, Yichang 443002)
Abstract: Objective: To set up an assay method for the determination of total polyphenol in Boehmeria nivea
(Linn.) Gaudich. Method: The sample was determined by spectrophotometer, the detection wavelength was 755
nm. Results: The calibration curve was linear in the range of 0.01 ~0.07 mg and the average recovery was
102.87%(RSD<3.60%). Conclusion: The method is reliable, accurate. It can be used for the quality control of the
total Polyphenol in Boehmeria nivea(Linn.) Gaudich.
Key words: Boehmeria nivea(Linn.) Gaudich; total polyphenol; determining content; Folin-Ciocalteu spectro-
photometer
周 媛， 喻玲玲， 李新兰， 邹 坤 *
(三峡大学化学与生命科学学院天然产物研究与利用湖北省重点实验室，
宜昌 443002)
摘要： 目的：建立苎麻叶中总多酚含量测定方法。方法：采用改进的 Folin-Ciocalteu比色法，检
测波长为 755 nm。结果：对照品标准曲线在 0.01~0.07 mg范围内(r=09999)，线性关系良好。平均
回收率 102.87%，方法的变异系数为小于 3.60%，测得苎麻叶 80%乙醇提取物中总多酚平均含量
为 0.144%。结论：方法简便，准确，重现性好，可用于苎麻叶中总多酚含量测定。
关键词： 苎麻；总多酚；含量测定；Folin-Ciocalteu比色法
中图分类号： S 563.1 文献标志码： A 文章编号： 1005-9989(2009)04-0193-05
收稿日期： 2008-09-02 *通讯作者
基金项目： 水利部水土保持植物开发研究中心科技专项(SDH20088080，SDH20088190)；湖北省自然科学基金创新群体计划(2007ABC008)。
作者简介： 周媛，女，教授，主要从事天然产物开发与利用研究。
苎麻(Boehmeria nivea (Linn.)Gaudich.)系荨麻科
(Urticaceae) 苎麻属多年生宿根性草本植物。又名
家苎麻、白麻、圆麻。苎麻叶甘寒, 无毒, 具凉血、
止血、散瘀功效，主治创伤出血、咯血、尿血、
肛门肿痛、乳痈、丹毒、脱肛不吸、赤白带下、
妇人子宫炎等症[1]。我国的苎麻产量约占全世界苎
麻产量的 90%以上，其茎皮主要作为优良的纺织
原料。苎麻特别是废弃的苎麻叶资源丰富，其中
含有琥珀酸、原儿茶酸及酚类等抗氧化活性物质，
具有较高的食品保健和药用开发价值。
本文以苎麻叶为原料，以没食子酸为对照品，
采用改进的 Folin-Ciocalteu 比色法测定苎麻叶中多
酚含量，优化了最适显色条件，进行了方法学研
究，建立了苎麻叶中总酚含量分析方法，为苎麻
提取物与应用
·193·
DOI:10.13684/j.cnki.spkj.2009.04.059
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
食 品 科 技
2009年 第 34卷 第 4期
叶的开发利用提供研究基础。
1 仪器、 材料与试剂
1.1 仪器
S3100 紫外分光光度计韩国：Scinco 公司；
BP211D型十万分之一电子天平：德国 Sartorius公
司；N1001 EYELA旋转蒸发仪：上海爱朗仪器有
限公司。
1.2 材料与试剂
苎麻叶：采自湖北省咸宁地区。
没食子酸对照品：基准纯，上海分析试剂厂。
其他试剂均为分析纯。
2 实验方法
2.1 对照品及供试品溶液的制备
2.1.1 对照品溶液的制备 准确称取 10.00 mg 干
燥的没食子酸，加蒸馏水适量，超声溶解，放冷，
以蒸馏水定容至 100 mL，制成每毫升含 0.1 mg没
食子酸的溶液，作为对照品溶液。
2.1.2 供试品溶液的制备 取自然晒干的苎麻叶，
剪成直径约 0.5 mm 的碎片，于 50 ℃减压干燥 4
h。精密称取上述干燥的苎麻叶碎片 2 g，分别依
次加入 40、20、20 mL 80%乙醇于 70 ℃回流提取
1、0.5、0.5 h，抽滤，合并 3次提取液，减压浓缩
至无醇味。所得浸膏以 50 mL pH10 的 Na2CO3溶
分次超声溶解、抽滤、洗涤，滤液和洗涤液合并，
以 1 ∶1 盐酸调节 pH 至中性，减压浓缩，浸膏以
70%乙醇溶解，转移至 100 mL容量瓶中，以 70%
乙醇定容至刻度，作为供试品溶液。
2.2 福林试剂的配制
称取 8 g钨酸钠和 2 g钼酸钠于圆底烧瓶中，
用 56 mL蒸馏水溶解，加入 4 mL 85%的磷酸溶液
和 8 mL浓盐酸，文火回流 10 h，然后加入 1.2 g
硫酸锂及 6 mL 双氧水，加热沸腾 15 min 至亮黄
色，不得带微蓝和绿色。冷却，移入 100 mL容量
瓶中，定容，贮于棕色瓶中，4 ℃冰箱保存。
2.3 标准曲线的绘制与线性关系
精密吸取对照品溶液 0、0.10、0.20、0.30、
0.40、0.50、0.60、0.70、0.80 mL于 10 mL干燥具
塞比色管中，各加 6 mL 水，摇匀，再加 0.5 mL
福林试剂，充分摇匀，加入 0.75 mL 20%碳酸钠溶
液，混匀，以蒸馏水稀释至刻度。分别在 40 ℃下
水浴 40 min，于 755 nm波长处测定各吸光度值。
以吸光度值 y对对照品质量 x 作图，绘制标准曲
线，并进行线性回归，得回归方程为 y=17.2068x+
0.0323，r = 0.9999。没食子酸质量在 0.01~0.07 mg
范围内与其吸光值呈现良好的线性关系，标准曲
线见图 1。
2.4 测定方法
准确量取 0.5 mL供试品溶液置 10 mL干燥具
塞比色管中，加 6 mL水，0.5 mL福林试剂，充分
摇匀，加入 0.75 mL 20%碳酸钠溶液，混匀，以蒸
馏水稀释至刻度。40 ℃水浴 40 min。同时制作空
白管。为消除供试品溶液本身颜色的干扰，同时
制作不加显色剂的对照管。于 755 nm波长处测定
吸光度值。
3 结果与分析
3.1 Folin-Ciocalteu 比色法条件研究
3.1.1 测定波长的选择 准确量取上述对照品溶
液 0.5 mL 和供试品溶液 0.5 mL 于 10 mL 容量瓶
中，各加 6 mL水，摇匀，再加 0.5 mL福林试剂，
充分摇匀。1 min 之后之后，加入 1.5 mL 20%碳
酸钠溶液，混匀定容。40 ℃下水浴反应 2 h，没食
子酸和苎麻提取液与 Folin-Ciocalteu 试剂反应后呈
蓝色，在 700~800 nm范围内有一明显吸收峰。在
750 nm处吸收最强。故选择测定波长为 755 nm。
对照品溶液和供试品溶液的吸收图谱见图 1。
注：1- 对照品溶液；2- 供试品溶液。
图 1 对照品溶液和供试品溶液的吸收图谱
波长/nm
吸
光
度
图 1 对照品溶液的标准曲线
吸
光
度
溶液浓度/mg
400 500 600 700 800 900
提取物与应用
·194·
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
食 品 科 技
2009年 第 34卷 第 4期
3.1.2 显色时间的确定 准确量取上述对照品溶
液 0、0.3 mL 于 10 mL容量瓶中，各加 6 mL 水，
摇匀，再加 0.5 mL 福林试剂，充分摇匀。1 min
之后，加入 1.5 mL 20%碳酸钠溶液 1.5 mL，混匀
定容。40 ℃下水浴反应 20、30、40、50、60、
90、120 min，于 755 nm波长处测定吸光度值，吸
光度值与显色反应的时间关系曲线见图 2。
由图 2可知，酚类化合物与显色剂反应需要
一个过程，40 min 内吸光值上升，反应液颜色变
蓝且蓝色逐渐加深。40 min后吸光值下降，适宜
的显色反应时间为 40 min。
3.1.3 显色温度的确定 准确量取上述对照品溶
液 0、0.3 mL于 10 mL容量瓶中，各加 6 mL 水，
摇匀，再加 0.5 mL 福林试剂，充分摇匀。1 min
之后，加入 20%碳酸钠溶液 1.5 mL，混匀定容。
分别在 30、40、50、60 ℃下水浴反应 40 min，于
755 nm波长处测定各吸光度值。吸光度值与显色
反应温度的关系曲线见图 3。
由图 4可知，显色反应温度对显色效果有一
定的影响，过低和过高均不利于多酚显色。在低
温条件下，显色反应缓慢，吸光值较小。随着温
度提高，反应速度加快，吸光值也逐渐增大，至
40 ℃时达到最大值。而在 50~60 ℃高温条件下，
反应颜色相对较浅，吸光值降低。这表明生成的
蓝色物质在高温下不稳定，容易褪色，所以本实
验确定显色反应温度为 40 ℃。
3.1.4 碳酸钠含量的确定 准确量取对照品溶液
0、0.30 mL于 10 mL容量瓶中，各加 6 mL水，摇
匀，再加 0.5 mL 福林试剂，充分摇匀。1 min 之
后，各加入 20%碳酸钠溶液 0、0.25、0.50、0.75、
1.00、1.25、1.50、1.75、2.00 mL，混匀定容。分
别在 40 ℃下水浴反应 40 min，于 755 nm 波长处
测定其吸光度值。结果见图 4。
比色体系中 Na2CO3 溶液是显色的支持介质，
显色反应对 Na2CO3溶液的用量具有相当的依赖性，
从图 4中可知，当 20%碳酸钠加入量达到 0.75 mL
以后体系显色反应较为完全，当 20%碳酸钠加入
量大于 0.75 mL 后，吸光度值下降，故显色剂与
20%碳酸钠溶液的体积比为 1∶1.5较为适宜。
3.1.5 显色剂含量的确定 准确量取对照品溶液
0.3 mL于 10 mL容量瓶中，各加 6 mL水，摇匀，
分别加 0、0.10、0.30、0.50、0.70、0.90、1.20、
1.50 mL福林试剂，充分摇匀。1 min之后，按福
林试剂：20%碳酸钠溶液为 1∶1.5比例加入 20%碳
酸钠溶液，混匀定容。分别在 40 ℃下水浴反应 40
min，于 755 nm 波长处测定其吸光度值。结果见
图 5。
由图 5可知，Folin-Ciocalteu试剂的用量会影
响体系的比色效果，当 Folin-Ciocalteu 试剂加入量
大于 0.50 mL后吸光度值达到最大且趋于稳定，故
确定显色剂 Folin-Ciocalteu 试剂用量为 0.50 mL，
相应 20% Na2CO3 溶液用量为 0.75 mL。
3.2 方法学验证
3.2.1 精密度及重现性实验 精密吸取对照品溶
液 0.50 mL，共 5份，按 2.4项方法测定，吸光度
值的 RSD为 0.14%，表明该方法具有很高精密度。
精密称取干燥苎麻叶碎片 2.0 g，共 5份，按
图 2 对照品溶液吸光度值与显色时间的关系曲线
图 3 吸光度值与显色反应温度的关系曲线
20%碳酸钠溶液与福林试剂的体积比
显色剂添加量/mL
反应温度/℃
图 4 吸光度值与碳酸钠含量的关系曲线
图 5 吸光度值与显色剂含量的关系曲线
显色时间/min
0.57
0.56
0.55
0.54
0.53
0.52
0.51
0.5
20 30 40 50 60 90 120 150
A
0.55
0.54
0.53
0.52
0.51
0.5
30 40 50 60 70
A
0.6
0.5
0.4
0.3
0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5
A
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.1 0.3 0.5 0.7 0.9 1.2 1.5 1.7
A
提取物与应用
·195·
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
食 品 科 技
2009年 第 34卷 第 4期
2.1.2 供试品溶液制备方法制备，精密吸取 0.50
mL，按 2.4 项下方法测定，吸光度值的 RSD 为
0.59%，表明该方法具有良好的重现性。
3.2.2 显色溶液稳定性实验 精密量取对照品溶
液和供试品溶液 0.50 mL，分别按 2.4项方法显色
后在室温下避光放置 , 于 0、30、60、90、120、
240、480 min 时测定吸收度值。结果表明对照品
和供试品溶液显色后在 480 min 内色泽稳定。吸
光值在 120 min 内无变化，随着时间的延长，吸
光度值略有下降，但幅度很小，480min 内 RSD
分别为 1.03%和 1.32%。表明显色后溶液稳定性
良好。
3.2.3 加标回收率实验 精密称取 4 g干苎麻叶 9
份，分成 3组，各组样分别加入 1.00、2.00、3.00
mL没食子酸标准溶液(1.0 mg /mL)，依次加入 80、
40、40 mL 80%乙醇于 70 ℃回流提取 1、0.5、0.5
h，抽滤，合并 3次提取液，减压浓缩至无醇味。
所得浸膏以 50 mL pH10 的 Na2CO3溶分次超声溶
解、抽滤、洗涤，滤液和洗涤液合并，以 1∶1盐酸
调节 pH 至中性，减压浓缩，浸膏以 70%乙醇溶
解，转移至 100 mL容量瓶中，以 70%乙醇定容至
刻度，作为待测溶液。精密吸取 0.50 mL，按 2.4.
项下方法测定，实验结果见表 1。
结果表明，平均加标回收率为 102.87%，RSD
表 1 加标回收率测定结果
编号 样品含量/(mg/g) 本底量/mg 加标量/mg 吸光值 测得总量/mg 回收率/% 平均值/% RSD/%
1
1.453
5.71
1.0
0.6060 6.67 95.58
102.87 3.60
2 5.73 0.6107 6.72 98.63
3 5.88 0.6268 6.91 103.21
4 5.62
2.0
0.3593 7.60 99.18
5 5.82 0.3715 7.89 103.66
6 5.81 0.3863 8.23 102.87
7 5.82
3.0
0.4111 8.81 99.79
8 5.82 0.3942 8.41 96.36
9 5.86 0.4264 9.02 105.23
注：1~3号供试品溶液不稀释，4~9号供试品溶液稀释一倍。
值为 3.60%，表明该方法具有高的准确度。
3.2.4 含量测定 精密称取 2 g干苎麻叶 6份，按
2.1.2 项下制备供试品溶液，精密吸取上述溶液
0.50mL，按 2.4项下方法操作，并制作空白管。为
消除供试品溶液本身颜色的干扰，同时制作不加
显色剂的对照管。于 755 nm波长处测定吸光度。
结果见表 2。
结果表明本方法测得苎麻叶中总酚酸含量为
0.144%。方法的 RSD为 1.65%。
4 讨论
4.1 比色方法及条件
目前植物多酚的测定方法有多种，如高锰酸
钾法、酒石酸亚铁、Folin-Ciocalteu比色法、原子
吸收法、紫外分光光度法等。其中酒石酸亚铁比
色法和 Folin-Ciocalteu 比色法使用较多。但酒石酸
亚铁比色法在实际应用中存在操作繁琐、重复性
差等缺点。有资料显示，Folin-Ciocalteu比色法在
测定多酚化合物时能在很大程度上克服以上缺点。
Folin-Ciocalteu 比色法的原理是基于 Folin-Ciocal－
teu 试剂中的钨钼酸可以将多酚化合物定量氧化，
自身被还原(W6+转变为W5+)生成蓝色的化合物，颜
色的深浅跟多酚含量呈正相关，因此可以通过该
比色方法来对多酚进行定量检测。但目前关于
Folin-Ciocalteu 比色法测定多酚，不同文献中比色
条件的选择差异较大，测定波长有 680、725、
750、760 nm和 780 nm不等，显色剂用量及与碱
液比例各不相同，有 1∶1、1∶2、1∶3及 1∶5等，显
色时间和温度也有很大差别，范围在 30~120 min
及 20~60 ℃不等[2-3]。本实验以苎麻叶为原料和没
食子酸为标准品，采用 Folin-Ciocalteu 比色法测定
表 2 样品总酚酸含量测定结果
编号 吸光值 测得量/mg
百分含量/
%
平均百分
含量/%
RSD/
%
1 0.26014 0.0132 0.1353
0.144 1.65
2 0.27051 0.0138 0.1380
3 0.30453 0.0158 0.1581
4 0.29473 0.0153 0.1523
5 0.27279 0.0140 0.1393
6 0.27635 0.0142 0.1416
注：对照管吸光值在 - 0.0212~- 0.0275 之间，说明供试品溶液颜色对
测定的干扰可忽略。
提取物与应用
·196·
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
食 品 科 技
2009年 第 34卷 第 4期
而关于其抗菌机理及其他的生物活性性质有待
于进一步的研究。
参考文献：
[1] 李胜华,伍贤进,刘惠君.超声波提取翻白草中总黄酮优
化工艺研究[J].食品科技,2008,(1):167-169,170
[2] 郭庆斌,刘邻渭,等.芦苇叶中黄酮类化合物提取工艺的
研究[J].食品研究与开发,2007,28(12):52-59
[3] 靳素荣,徐明,等.超声提取荷叶黄酮的工艺研究[J].食品
科技,2007,(10):97-99
[4] 蒋新龙,蒋益花.木槿花花叶总黄酮的提取工艺和含量测
定[J].食品科技,2007,(1):88-91
[5] 张赟彬,李彩侠,吴亚卿.黄酮类化合物的研究进展[J].食
品与机械,2005,21(5):70-73
[6] 段长征.话说睡莲[J].绿化与生活,2005,(4):27
[7] 陈维培,张四美.睡莲叶比较解剖[J].植物分类学报,1992,30
(5):415-422
[8] 盛萍,帕丽达·阿不力孜,张恒,等.维吾尔药睡莲花中烟花
苷的含量测定[J].中药材,2006,29(12):1313-1314
[9] 刘瑞凝,王伟,谢伟东,等.雪白睡莲花中黄酮类成分抗氧
化及拟缺血对神经细胞作用的研究[J].世界科学技术-
中医药现代化,2006,8(5):33-36
[10] 赵军,贺金华,闫明,等.维药睡莲花化学成分研究[J].中国
中药杂志,2007,32(12):1232-1234
[11] 贺金华,赵军, 闫明,等.睡莲花总酚酸超声提取工艺研
究[J].时珍国医国药,2007,18(10):2360
[12] 崔永明,余龙江,敖明章,等.甘草总黄酮的提取技术及其
抑菌活性研究[J].中药材,2006,29(8):838-841
[13] 张锡彬,张彧,高荫榆,等.红薯茎叶黄酮提取物抑菌活性
的研究[J].食品科技,2008,(1):156-159
[14] 曾玉珍,刘志祥,吴耀辉,等.超声波提取甘草黄酮及其抑
菌活性研究[J].时珍国医国药,2007,18(10):2402-2403
苎麻叶中多酚含量，得到了最适显色条件，既测
定波长 755 nm、显色时间 40 min、显色温度 40
℃、显色剂用量以及与碱量的比例为 1∶1.5。
4.2 多酚提取方法及条件
4.2.1 粉碎方法 干燥的苎麻叶如用机械粉碎，
则很容易形成绒毛状细粉，造成浸提液分离困难，
经实验剪切成直径约 0.5 mm 的碎片适宜浸提液
分离。
4.2.2 提取方法 对乙醇浓度、水碱化 pH、酸化
浓度、提取次数及提取时间和酸析的 pH等提取条
件进行了优化。采用总酚提取率高，提起率稳定
的方法制备供试品溶液，方法见 2.1.2。
5 小结
以苎麻叶为原料和没食子酸为标准品，建立
了 Folin-Ciocalteu 比色法测定苎麻叶中多酚含量的
方法。显色后溶液在 8 h内稳定，标准曲线在 0.1~
0.7 mg/mL 范围内线性关系良好，相关系数为
0.9999。方法的精密度高，RSD为 0.14%；重现性
好，RSD为 0.59%；加标平均回收率为 102.87 %，
RSD为 3.60。测得苎麻叶 80%乙醇提取物中多酚
平均含量为 0.144%，RSD为 1.65%。方法操作简
便，精密度及准确度高, 重现性及稳定性好, 可用
于苎麻叶中多酚含量的测定。
参考文献：
[1] 李文武,丁立生,李伯刚.苎麻根化学成分的初步研究[J].
中国中药杂志,1996,21(7):427-428
[2] 田文礼,孙丽萍,董捷,等.Folin-Ciocaileu比色法测定蜂花
粉中的总酚.食品科学,2007,28(2):258-260
[3] 刘顺航,孟宪军,牛涛,等.葡萄籽中总多酚成分的测定.中
华中医药杂志,2007,22(10):715-716
(上接第 192页)
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
PrediTM， 西得乐获得专利保护的瓶胚干式杀菌系统， 最初开发用于冷链销售的饮料， 现在也可以用于在常温下销售的
产品。 用于敏感性产品无菌灌装的干式杀菌技术是对过去的重大突破。
使用无菌包装用于延长室温销售敏感性饮料 (果汁 、 茶、 风味水以及能量饮料)的货架期。 为了响应消费者的偏好和
日益严格的食物安全法规， 无菌灌装为敏感性饮料提供了新的包装选择。
西得乐 Combi PredisTM Fma 是用于在无菌条件下吹瓶和灌装敏感性产品的系统， 它创新且简单。 这个系统区别于其他
同类设备的关键特征在于其 “瓶胚干式杀菌技术”： 用过氧化氢蒸汽 (H2O2)在加热炉入口处对瓶胚进行干式杀菌， 代替
了用水洗瓶。 Combi PredisTMFma 将 PredisTM解决方案和西得乐最新的 SensofillTM Fma 无菌灌装技术整合在一台集吹瓶、 灌装
和封盖为一体的设备内。
提取物与应用
PET 瓶装敏感性饮料的无菌灌装：PredisTM干式杀菌技术
·197·