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第 1 1 卷 第 9 期
2009 年 9 月
辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 11 No. 9
Sep .，2009
洗脱液体积（V/mL）
图 2 洗脱曲线
从图 2 中可知，第 12 份洗脱液开始总黄酮的
含量已趋近洗脱平衡，可认为树脂柱上样吸附的总
黄酮已完全达到洗脱平衡， 故确定洗脱剂用量为
14BV( 该树脂床体积为 30mL)。
2.4.6 验证实验 取荔枝核样品液按上述方法选择
的工艺条件进行吸附和洗脱，测定洗脱液中总黄酮
的浓度，计算总黄酮得率为 87.97%。
3 讨 论
实验结果表明，D4006 型树脂适合荔枝核黄
酮的分离和纯化。由实验可知 : 当上样浓度为 5.45
mg/mL，控制上样流速为 0. 5mL/min，上样体积为 4
BV 时吸附效果较好，用 14BV80% 乙醇洗脱后，总黄
酮得率近 90%。本方法可以用来分离纯化荔枝核中
黄酮类成分。
在大孔树脂分离成分中，除了选用性能优良的
大孔树脂外，还应配合最佳工艺条件，如最佳吸附流
速、样品液的上样浓度等，这些都直接影响到富集黄
酮类成分的效果。目前大孔树脂分离纯化中药中的
化学成分还有很多问题未解决，工艺条件研究的规
范性方法和技术要求还未一致，在实际应用中，必须
综合考虑各种因素，才能确定树脂的型号及最佳吸
附条件。◆
参考文献
[ 1 ] 梁荣感，刘卫兵，唐祖年，等 . 荔枝核黄酮类化合物体外抗呼
吸道合胞病毒的作用 [ J ] . 第四军医大学学报，2006，27 ( 20 ) ：
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[ 2 ] 罗伟生，龚受基，梁荣感，等 . 荔枝核黄酮类化合物体外抗
流 感 病 毒 作 用 的 研 究 [ J ] . 中 国 中 药 杂 志，2006，31 ( 16 ) ：
1379-1380.
[ 3 ] 徐庆，宋芸娟，陈全斌，等 . 荔枝核黄酮类化合物对 HepG2.2.15
细胞系 HBsAg 与 HBeAg 表达及 HBV-DNA 含量的影响 [ J ]. 第
四军医大学学报，2004，25 ( 20 ) ：1862-1866.
收稿日期：2009-05-24
作者简介：徐天生（1982-），广东深圳人，中药师，学士，研究方向 ：中药新剂型与新技术。
通讯作者：陈兴兴（1972-），男，广东罗定人，讲师，学士，研究方向 ：天然产物开发。
丁香为桃金娘科植物丁香 Syzygium aromaticum
Merr.Perry(Eugeia caryophllata Thumb.) 的花蕾。味辛、
苦。性温。具有温中降逆，温肾助阳之功效，临床主
要用于胃寒呕吐、腹泻以及肾阳虚衰等。丁香中抗
β- 环糊精包合丁香油的工艺研究
徐天生1，刘 莉2，梁 燕2，刘 强2，陈兴兴2
（1.广州美晨药业有限公司，广东 广州 510130 ；2.南方医科大学中医药学院，广东 广州 510515）
摘 要：目的 ：研究 β- 环糊精（β-CD）包合丁香油的最佳工艺。方法 ：采用高效液相色谱法、正交试验法、
饱和水溶液法对 β-CD 包合丁香油的工艺进行研究，以包合物收得率，包合率作为指标，确定最佳包合工艺。结果 ：
β-CD 包合丁香油的最佳工艺为丁香油 ：β-CD（mL:g）为 1:8，包合温度为 60℃，包合时间为 2h。结论 ：采用高
效液相色谱法、正交试验法能准确确立 β-CD 包合丁香油的最佳工艺。
关键词：丁香油 ；β- 环糊精 ；高效液相色谱法 ；正交试验法 ；最佳工艺
中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1673-842X (2009) 09- 0162- 03
A Study on the Technology of Lathration for the Volatile Oil of
Flos caryophylli with β-cyclodextrin(β-CD)
XU Tian-sheng1，LIU Li2，LIANG Yan2,LIU Qiang2，CHEN Xing-xing2
（1.Guangzhou Meichen Pharmaceutical Product Limited Company,Guangzhou 510130,Guangdong,China ；
2.School of TCM,Southern Medical University, Guangzhou 510515,Guangdong,China）
Abstract ：Objective: To study the optimized technology of clathration for the volatile oil of Flos
caryophylli with β-cyclodextrin(β-CD).Methods ：HPLC .Orthogonal experiment. saturated water-solution
were used for studying on the best clathration technology of clove oil with β-CD; the yield of clathrate,the
module of clathration were used as index to definite the optimized technology of clathration.Result ：The best
condition of the optimized technology of clathration for the volatile oil of Flos caryophylli withβ-CD were as
follow: the volatile oil of Flos caryophylli:β-CD（mL:g）=1:8; clathration temperature: 60℃ ; clathration
time: 2h. Conclusions ：The optimized technology of clathration for the volatile oil of Flos caryophylli withβ-
CD is accurate established with HPLC and Orthogonal experiment used.
Key words ：The volatile oil of Flos caryophylli ；β-cyclodextrin(β-CD) ；Tigh performance liquid
chromatography(HPLC); Orthogonal experiment; the optimized technology
DOI：10.13194/j.jlunivtcm.2009.09.164.xutsh.003
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1 1 卷 辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
菌物质主要是挥发油，含丁香酚、乙酰丁香酚、丁香
烯、水杨酸甲酯、甲基正成基酮、苯甲醛、乙酸苄酯
等。而丁香酚是丁香油的主要成分，近年来的研究
表明其有抑菌、麻醉、解热、抗氧化、抗肿瘤、促进透
皮吸收等多种药理活性 [1]，其含量约为 75%~85%[2]。
但该挥发油易挥发，逸散，氧化。用 β-CD 包合，能
提高丁香油的稳定性，进而提高由其制成的制剂的
质量。本文采用正交试验设计法优选 β-CD 包合
丁香油的工艺，为涉及到丁香油 β-CD 包含物的制
剂产业化提供参考。
1 材料与仪器
丁香酚对照品（批号 ：111702-200607）由中国
药品生物制品检定所提供，β-CD（广州郁南环糊
精厂）；试剂甲醇为色谱纯，其余均为分析纯。
Agilent 1100 高效液相色谱仪（安捷伦科技有限
公司，美国惠普 HEWLETT PACKARO 8453 紫外检
测器）；JB-3 型定时恒温磁力搅拌器（上海雷磁新经
仪器有限公司）；BP110S 电子天平 ( 德国 )，上海科导
SK1200H 超声波提取器（工作频率 ：59kHz，功率 45
W）。
2 方法和结果
2.1 标准曲线的建立与方法学考察
2.1.1 色 谱 条 件 固 定 相 [3] ：反 相 C18 硅 胶 柱，流
动 相 ：甲 醇 - 水（13∶8），柱 温 ：35 ℃，检 测 波 长 ：
280nm，流速 ：1.0mL/min。
2.1.2 对照品溶液的制备 精密吸取丁香酚标准品
0.1mL，置 10mL 容量瓶中，加无水乙醇定容至刻度，
再精密吸取 2mL，置 100mL 容量瓶中，加无水乙醇置
刻度，即得。
2.1.3 标准曲线的制备 精密吸取对照品 2、4、6、
8、10μL, 按照上述色谱条件进样，测定，进样体积
与峰面积如表 4。以进样体积对峰面积的直线回
归方程为 A=260.64V-4.57，R2=1。表明峰面积在
511.3~2599.8 范围内，丁香酚进样体积与峰面积成
良好线性关系。
2.1.4 精密度测定 精密吸取对照品溶液 10μL，
连续进样 5 次，其结果 RSD 为 1.23%。
2.1.5 稳定性测定 精密吸取对照品溶液，分别在
1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0h 进样 10μL，其结果 RSD 为
1.56%。
2.1.6 加样回收率测定 精密吸取 6 份已知丁香酚
含量的供试液（正交 9 号）2mL，精密加入丁香酚对
照品 0.10、0.10、0.12、0.12、0.15、0.15mL，加无水乙醇
定容至 5mL，按上述色谱条件各进样 10μL，结果见
表 1, 平均回收率为 100.28%,RSD 为 1.71%。
表 1 加样回收率结果
丁香酚含
量（mL）
丁香酚加
入量（mL）
丁香酚测
得量（mL）
回收率
（%）
平均回收
率（%）
RSD
（%）
0.12 0.10 0.2214 101.40
100.28 1.71
0.12 0.10 0.2189 98.90
0.12 0.12 0.2369 97.42
0.12 0.12 0.2416 101.33
0.12 0.15 0.2712 100.80
0.12 0.15 0.2725 100.25
2.2 正交方案设计与结果
2.2.1 包合方法 采用饱和水溶液法 [4] 将丁香挥发
油用 β-CD 包合，称取一定量 β-CD 加入水中，制
成饱和溶液，保持一定温度，搅拌 ( 固定转速 ) 加入
1mL 丁香油，包合适当时间，冰箱放置 24h(5℃ ) 滤
过，40℃干燥，得白色粉末状包合物。
2.2.2 考察因素及水平值的选择 为得到最佳包
合工艺，采用正交设计试验，对影响包含工艺的因
素挥发油与 β-CD 比例、包合温度、包合时间选择
3 个水平进行考察，以丁香酚包合率、包合物收得
率为考察指标，用 L9（34）正交表进行实验，因素水
平见表 2。
表 2 因素水平表
水
平
因素
A 油∶β-CD（mL:g） B 包合温度（℃） C 包合时间（h）
1 1∶4 20 1
2 1∶6 40 2
3 1∶8 60 3
2.2.3 包合物收得率的测定方法与结果 精密称定
按 2.2.1 包合方法制备的包合物，并按以下公式计算
收得率，其结果见表 3。
包合物收得率 = 包合物重（g）/（β-CD+ 丁香
油）重（g）×100%
表 3 收得率结果
试验号 包合物总重（g） 收得率（%）
1 2.84 56.5
2 3.34 66.4
3 3.88 77.1
4 4.00 56.9
5 4.94 70.27
6 5.23 74.4
7 5.00 55.4
8 6.13 67.9
9 7.16 79.3
2.2.4 包合物中丁香酚含量测定方法与结果 取包
合物约 0.4g，精密称定，加水 4mL，加乙醚 10mL，超
声处理 1h，取乙醚层，置 10mL 量瓶中，用乙醚定容
至刻度，摇匀，再精密吸取 1mL，置 50mL 量瓶中，加
无水乙醇至刻度，采用上述高效色谱条件测定丁香
酚含量，进样 10μL，并按以下公式计算包合率，其
结果见表 4。
丁香酚包合率 = 包合物中丁香酚量（mL）/ 所投
丁香油中丁香酚量 (mL) ×100%
表 4 包合率结果
试验号 进样体积（µL） 峰面积
丁香酚含
量（mL）
包合率
（%）
1 10 616.5 0.169 20.9
2 10 646.8 0.209 25.8
3 10 606 0.227 28.0
4 10 593.7 0.230 28.3
5 10 618.5 0.295 36.4
6 10 727.5 0.367 45.3
7 10 658.2 0.318 39.2
8 10 795.8 0.471 58.1
9 10 868 0.600 74.0
2.2.5 正交试验总结果 包合率为衡量包含效果的
重要指标，包合率越高，包合效果越好，可作为包合
工艺筛选的主要指标，权重系数定为 0.7，但收得率
在大生产中也很有意义，在加水量一定的条件下，收
得率越高，包合效果越好，因此，收得率可以作为次
要筛选指标，权重系数定为 0.3。按照综合评分 =0.7
× 丁包合物包合率 +0.3× 包合物收得率计算，以综
合评分作为筛选指标，结果见表 9，方差分析见表 5~
表 7。
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辽 宁 中 医 药 大 学 学 报 1 1 卷
表 5 包合率方差分析
因素 偏差平方和 自由度 F 比 F 临界值 显著性
A 1592.816 2 19.283 19.000 *
B 579.536 2 7.016 19.000
C 115.909 2 1.403 19.000
误差 82.60 2
表 6 收得率方差分析
因素 偏差平方和 自由度 F 比 F 临界值 显著性
A 1.143 2 0.070 19.000
B 645.723 2 39.455 19.000 *
C 3.359 2 0.205 19.000
误差 16.37 2
表 7 综合得分方差分析
因素 偏差平方和
虽然在实际生产中丁香油中有效成分的包合
率对产品质量影响较大，但收得率也能从根本上影
响包合率，所以本实验从综合得分研究最佳包合工
艺条件。从表 9 中极差 R 值大小可知 ：影响包合工
艺因素大小依次为 A >B >C ；包合率方差分析结果
表明 ：A 因素对本实验的影响有显著性意义，从结果
还可以看出 A、B 是实验结果的主要影响因素，C 对
实验影响不大。综合以上数据得出最佳包合工艺为
A3B3C2，即包合时丁香油 ：β-CD（mL:g）为 1:8、包
合温度为 60℃，包合时间为 2h。
2.2.6 验证性实验 取丁香油按以上最佳工艺制备
3 批包合物，丁香酚平均包合率为 72.34%，包合物平
均收得率为 78.22%，相当于实验最佳水平，结果见
表 8。
表 8 验证性试验结果
批次 包合物收得率（%） 丁香酚包合率（%）
1 76.03 74.11
2 80.15 70.56
3 78.48 72.35
平均值 78.22 72.34
RSD(%) 2.65 2.45
3 讨 论
本实验确定最佳工艺为丁香油 ：β-CD（mL:g）
为 1:8，包合温度为 60℃，包合时间为 2h。
表 9 正交实验总结果
试验号 A B C D 丁香酚包合率（%） 包合物收得率（%） 综合评分
1 1 1 1 1 20.9 56.5 31.58
2 1 2 2 2 25.8 66.4 37.98
3 1 3 3 3 28.0 77.1 42.73
4 2 1 2 3 28.3 56.9 36.88
5 2 2 3 1 36.4 70.3 46.57
6 2 3 1 2 45.3 74.4 54.03
7 3 1 3 2 39.2 55.4 44.06
8 3 2 1 3 58.1 67.9 61.04
9 3 3 2 1 74.0 79.3 75.59
24.900 29.467 41.433 43.767
K2 36.667 40.100 42.700 36.767
K3 57.100 49.100 34.533 38.133
R 32.200 19.633 8.167 7.000
66.667 56.267 66.267 68.690
K2 67.190 68.190 67.533 65.400
K3 67.533 76.933 67.590 67.300
R 0.866 20.666 1.323 3.290
37.430 37.507 48.883 51.247
K2 45.827 48.530 50.150 45.357
K3 60.230 57.450 44.453 46.883
R 22.800 19.943 5.697 5.890
ÕOmG.Ù Ü)[
Ù Ü(= k)[
4Ð ÜA˜Ú
由于丁香油与水的分离较为复杂，尤其少量时
更易出现误差，本实验直接以丁香油的有效成分丁香
酚作为考察指标来确定丁香油的最佳包合工艺，此方
法比读取油的体积来确定包合工艺更为科学，准确。
收得率虽然只作为次要筛选指标，但它也能从
根本上影响包合率的高低，故以综合得分作为筛选
工艺的指标。
采用高效液相色谱法测定丁香酚具有快
速、准确、重复性好的特点，含量测定结果比较
可靠。◆
参考文献
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化学工业出版社，2005 ：3.
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自由度 F 比 F 临界值 显著性
A 797.800 2 14.231 19.000
B 598.817 2 10.682 19.000
C 53.681 2 0.958 19.000
误差 56.06 2