全 文 ：• 2480 • 中华中医药杂志(原中国医药学报)2015年7月第30卷第7期 CJTCMP , July 2015, Vol . 30, No. 7
伤NF-κB、VCAM-1和血液流变性的影响.中国骨伤,2012,
25(12):1016-1020
[12] 陈向华,张俐,王和鸣,等.丹参酮及电针对脊髓缺血再灌注损
伤细胞因子IL-1β、IL-1Ra、IL-8的影响.中华中医药杂志,
2012,27(4):987-991
[13] 王涛,谢白发,李露斯.大鼠脊髓缺血再灌注损伤后炎性细胞
因子的变化及其意义.中国临床康复,2006,10(28):88-90
[14] 夏磊,殷铁林,杜琳,等.甲泼尼龙预干预脊髓缺血再灌注损伤
对热休克蛋白27和肿瘤坏死因子α表达的影响.中华创伤骨
科杂志,2009,11(6):555-558
[15] 王伟,温健,景桂霞,等.乌司他丁对兔心肌缺血再灌注损伤
pHi的影响.陕西医学杂志,2008,37(10):1293-1295
[16] 赵立君,李红群,孙庆,等.脊髓再灌注损伤后细胞间黏附分子
1及白细胞介素1β表达的变化.中国临床康复,2006,10(40):
168-171
[17] Mengozzi M,Cervellini I,Bigini P,et al.Endogenous erythropoietin
as part of the eytokine network in the pathogenesis of experimental
autoimmune encephalomyelitis.Mol Med,2008,14(11-12):
682-688
（收稿日期：2014年4月9日）
·研究报告·
果上叶总多酚体外抗氧化活性研究
苟体忠1,2，唐文华1,2，曹晖1,2，徐绍琴3，孙大方1
（1凯里学院化学与材料工程学院，贵州凯里 556011；2凯里学院应用化学研究所，贵州凯里 556011；
3凯里学院继续教育学院，贵州凯里 556011）
摘要：目的：研究果上叶总多酚的体外抗氧化活性。方法：采用总抗氧化能力、OH·清除率、DPPH·清除
率来考察果上叶总多酚的体外抗氧化活性。结果：果上叶总多酚总抗氧化能力高于VC，且果上叶总多酚的OH·
清除率远高于VC。此外，果上叶总多酚对DPPH·的IC50（22.1μg/mL）与VC（17.6μg/mL）相近。结论：果上叶
总多酚是天然的抗氧化活性剂。
关键词：果上叶；总多酚；抗氧化活性
基金资助：贵州省教育厅优秀人才项目（No.黔教合KY字[2012]099号），凯里学院重点学科“分析化学”
（No.院通字[2014]157号）
Study on antioxidant activity in vitro of total polyphenol from Bulbophyllum
odoratissimum (J.E. Smith) Lindl.
GOU Ti-zhong1,2, TANG Wen-hua1,2, CAO Hui1,2, XU Shao-qin3, SUN Da-fang1
( 1College of Chemistry & Materials Engineering, Kaili University, Kaili 556011, China; 2Institute of Applied Chemistry, Kaili
University, Kaili 556011, China; 3College of Continuing Education, Kaili University, Kaili 556011, China )
Abstract: Objective: To study the antioxidant activity in vitro of total polyphenol from Bulbophyllum odoratissimum (J.E.
Smith) Lindl. (BO). Methods: The antioxidant activity in vitro of total polyphenol from BO was evaluated by total antioxidant
activity, hydroxyl and DPPH free radical scavenging activity. Results: The results showed that the total antioxidant activity and
hydroxyl free radical scavenging activity of total polyphenol from BO were much higher than VC. In addition, the half-maximal
inhibitory concentration (IC50) for DPPH free radicals of total polyphenol from BO and VC was similar, which was 22.1 and
17.6μg/mL, respectively. Conclusion: The total polyphenol from BO is an effective and natural antioxidant.
Key words: Bulbophyllum odoratissimum (J.E. Smith) Lindl.; Total polyphenol; Antioxidant activity
Fund assistance: Talents Program of Guizhou Provincial Education Department (No.[2012]099), Analytical
Chemistry of Key Disciplines of Kaili University (No.[2014]157)
通讯作者：苟体忠，贵州省凯里市经济开发区开元大道3号凯里学院化学材料工程学院化学教研室，邮编：556011
电话：0855-8558093，E-mail：gtz810110@126.com
• 2481 •中华中医药杂志(原中国医药学报)2015年7月第30卷第7期 CJTCMP , July 2015, Vol . 30, No. 7
果上叶[Bulbophyllum odoratissimum（J.E. Smith）Lindl.]为
兰科石豆兰属植物极香石豆兰的全草，又名石串莲、羊奶果、子
上叶、石枣子等，主要分布于贵州、云南、四川、广西等地，具有
润肺止咳、续筋接骨、消炎止痛之功效，其乙酸乙酯和正丁醇提
取物具有一定的抑瘤作用[1]。有学者已研究了部分中药材中多
糖和多酚的抗氧化活性[2-4]，但果上叶总多酚抗氧化活性的研究
尚未见报道。因此，本文分析了果上叶总多酚的抗氧化活性，从
而为果上叶的综合利用提供理论依据。
材料
1. 药材与试剂 果上叶于2013年11月采自凯里市雷公山，
经凯里学院植物学博士鉴定为豆科石豆兰属植物极香石豆
兰的全草。三氯乙酸、没食子酸、1，1-二苯-2-苦基肼自由基
（DPPH自由基）、Folin﹠ciocalteu’s酚试剂为aladdin试剂。其它
试剂均为分析纯。
2. 仪器与设备 紫外分光光度计（UV-2550，岛津）；植物
粉碎机（北京科伟永兴仪器有限公司）；水浴振荡器（SHA-C
型，巩义予华仪器有限公司）；超声波（WH-300，济宁万和超声
电子设备有限公司）；低速离心机（TD5M，长沙湘智离心机仪
器有限公司）；电子天平（上海衡平仪器仪表厂）。
方法
1. 样品处理与总多酚的提取 果上叶样品于80℃烘箱中
干燥，再用植物粉碎机粉碎并过80目筛，待用。分别称取约2g
上述样品于6个50mL离心管中，分别用石油醚、正丁醇、乙醇、
乙酸乙酯、甲醇和水提取，其工艺条件经正交实验确定最佳萃
取条件为：料液比为1∶20，超声间歇提取2次，每次30min，功率
100%，离心，取上层清液合并，再置于50mL容量瓶中并用相应
试剂定容至刻度，摇匀，待测。
2. 总多酚测定 总多酚含量的测定参照文献[5]并稍作修
改。其简要流程为：准确称取0.125g没食子酸以超纯水定容至
1 000mL。分别吸取该标准溶液0、1、2、3、4、5mL于6个25mL
比色管中，先加超纯水至10mL，摇匀，再加入Folin﹠ciocalteu’s
（FC）酚试剂1mL，混匀，然后加入6mL 10％（m/v）Na2CO3溶
液，并用超纯水定容至刻度，摇匀。然后在暗室中放置2h，并
于760nm波长处测定其吸光度。以没食子酸浓度（C）为横坐
标，吸光度（A）为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：
A=0.0838C+0.0067（r=0.9999）。取果上叶提取液0.2mL于25mL
比色管中，按上述步骤测定其吸光度，再根据回归方程计算果
上叶提取液总多酚的浓度，并以此计算样品中多酚含量，以每
克样品中没食子酸当量（mg GAE/g）表示。
3. 醇提物总抗氧化能力测定 总抗氧化能力的测定采用
FRAP法[6]，其简要流程为：取1mL不同浓度提取液，并依次加入
2.5mL的pH值6.6的磷酸盐缓冲液和1%（m/v）铁氰化钾溶液，摇
匀并置于50℃水浴振荡器中20min。然后加入2.5mL 10%（m/v）
三氯乙酸溶液，摇匀并取混液2.5mL，再加入2.5mL超纯水以及
0.1%（m/v）氯化铁溶液，摇匀并静置10min，在700nm处测定吸
光度（As），以超纯水代替提取液作为空白并测定其吸光度Ac。
则总抗氧化能力可以用ΔA来表示（ΔA=As-Ac），其值越大，提
取液抗氧化能力越强。
4. OH·清除率测定 OH·清除率的测定方法参照文献
[6]，其简要流程为：在25mL比色管中依次加入4mL pH值7.4磷
酸钠缓冲液、1.5mL 5mmol/L邻二氮菲溶液、1mL 7.5mmol/L 硫
酸亚铁溶液、1.5mL超纯水，摇匀，再加入1mL不同浓度的提取
液，立即摇匀。最后加入1mL 1%（v/v）双氧水溶液，摇匀并置于
37℃恒温水浴中恒温60min，再于536nm处测定其吸光度。根
据下式计算样品对OH·清除率：OH·清除率=[（A1-A2）/（A0-
A2）]×100（%）。其中：A1为加入提取液及双氧水时测得的吸光
度；A2为加双氧水而不加提取液时测得的吸光度；A0为不加提
取液及双氧水时测得的吸光度。
5. DPPH·清除率测定 DPPH·清除率的测定方法参
照文献[7]，其简要流程为：在25mL比色管中依次加入2mL
2×10-4mol/L DPPH·溶液和2mL不同浓度的提取液，摇匀，并在
暗室中放置30min，以无水乙醇为参比液，在517nm下测定其吸
光值As，同时测定2mL 2×10
-4mol/L DPPH·溶液与2mL无水乙
醇混合液的吸光值Ac。根据下式计算样品溶液对DPPH·的清
除率：DPPH·的清除率=（1-As/Ac）×100%。
结果
1. 果上叶不同极性试剂提取液对DPPH·的清除能力 见
图1。果上叶不同极性试剂提取液对DPPH·的清除能力存在明
显差异，其大小顺序为：乙醇＞甲醇＞正丁醇＞乙酸乙酯＞水＞
石油醚。由此可知，乙醇提取液具有较高的清除DPPH·的能
力。因此，以下实验均以乙醇提取液为考察对象。
图1 不同提取液对DPPH·清除率的影响
D
P
P
H
·
清
除
率
（
%
）
石油醚 正丁醇 乙醇 甲醇 水乙酸乙酯
2 . 果上叶总多酚 含量 取 果上叶乙醇提取液，在波长
760nm处测定其吸光度，代入回归方程计算其多酚 含量为
5.6mg GAE/g。
3. 果上叶总多酚和VC的总抗氧化能力 以VC为对照样品，
分别测定果上叶总多酚和VC的总抗氧化能力。经相关分析表
明，果上叶总多酚对总抗氧化能力的相关系数为0.9992，VC对
总抗氧化能力的相关系数为0.9983，这表明果上叶总多酚和VC
含量与总抗氧化能力之间呈明显正相关关系。分析认为，果上
• 2482 • 中华中医药杂志(原中国医药学报)2015年7月第30卷第7期 CJTCMP , July 2015, Vol . 30, No. 7
叶醇提物的抗氧化能力主要是由多酚成分决定的。国外学者研
究也表明，含有高水平总多酚的植物表现出良好的体外抗氧化
活性[8]。随着浓度的的增加果上叶总多酚以及VC总抗氧化能力
增加，其果上叶总多酚总抗氧化能力稍高于VC。分析认为，果
上叶总多酚具有较强的抗氧化能力。见图2。
浓度（μg/mL）
△
A
图2 不同浓度果上叶总多酚对总抗氧能力的影响
4. 果上叶总多酚和VC对OH·的清除率 以VC为对照样
品，分别测定果上叶总多酚和VC清除·OH的能力。经相关分
析表明，果上叶总多酚与VC对OH·的清除率的相关系数分别
为0.9586和0.7475。结果表明，果上叶总多酚浓度与OH·的清
除率之间存在显著的正相关关系。分析认为，果上叶醇提物清
除OH·的活性主要是由多酚成分决定的。然而VC与OH·的清
除率之间不存在显著差异，表明OH·的清除率受VC浓度的影
响较小。随着浓度的增加，果上叶总多酚清除OH·效率明显增
加。然而，VC对OH·的清除效率影响较小，且明显低于果上叶
多酚对OH·的清除效率。分析认为，果上叶总多酚具有明显的
清除OH·活性。见图3。
浓度（μg/mL）
O
H
·
清
除
率
（
%
）
图3 不同浓度果上叶总多酚对OH·的清除率的影响
5. 果上叶总多酚和VC对DPPH·的清除率 以VC为对照
样品，分别测定果上叶总多酚和VC清除DPPH·的能力。经相
关分析表明，果上叶总多酚对DPPH·的清除率的相关系数为
0.9978，VC对DPPH·的清除率的相关系数为0.9996。结果表
明，果上叶总多酚浓度与DPPH·的清除率之间均存在显著的正
相关关系。分析认为，果上叶醇提物清除DPPH·的活性主要是
由多酚成分决定的。由图4可见，随着果上叶多酚和VC浓度的
增加，其清除DPPH·的活性增加，但是果上叶多酚对DPPH·的
清除率略低于VC。
图4 不同浓度果上叶总多酚对DPPH·的清除率的影响
D
P
P
H
·
清
除
率
（
%
）
浓度（μg/mL）
以 果 上叶 多 酚 和 VC 浓 度 对 D P P H·的 清 除 率 作回归
分析。果 上叶总 多酚对D P P H·的 清 除率 的回归方 程 为：
Y=2.3944X-2.9211（r=0.9976）。VC对DPPH·的清除率的回归
方程为Y=2.7698X+1.3694（r=0.9996）。当DPPH·的清除率为
50%时对应果上叶总多酚和VC的浓度即为IC50。经计算果上叶
多酚和VC的IC50分别为22.1μg/mL和17.6μg/mL，分析结果表
明，果上叶多酚具有较好的清除DPPH·的活性。
讨论
本实验以VC为对照品，并采用总抗氧化能力、DPPH·清
除率、OH·清除率来评价果上叶总多酚的体外抗氧化活性能
力。结果显示，果上叶总多酚具有较强的抗氧化能力，较高的
OH·清除能力，以及较好的DPPH·清除能力。上述结果均表
明，果上叶总多酚具有较好的体外抗氧化活性，是天然的抗氧
化活性剂。
参 考 文 献
[1] 吴斌,吴德康,陈坚波.广东石豆兰不同提取部位体处抗肿瘤
实验研究.南京中医药大学学报,2004,20(2):114-115
[2] 丛媛媛,帕丽达·阿不力孜,罗兰,等.新疆石榴皮多酚和多
糖的提取及抗氧化活性研究.中华中医药杂志,2012,27(3):
747-749
[3] 郑林龙,蒋剑平,许海顺,等.响应面法优化土茯苓多糖的
提取工艺及抗氧化活性研究.中华中医药杂志,2014,29(3):
918-922
[4] 曲珊珊,魏媛媛,邬利娅·伊明,等.维药石榴花多酚的抗氧化
活性.中华中医药杂志,2012,27(9):2402-2405
[5] 焦士蓉,马力,黄承钰,等.枳实提取物的体外抗氧化作用研
究.中药材,2008,31(1):113-116
[6] 赵艳红,李建科,赵维,等.常见药食植物提取物体外抗氧化活
性的评价.食品科学,2009,30(3):104-108
[7] Gülçin I,Elmastaş M,Aboul-Enein H Y.Antioxidant activity of clove
oil-a powerful antioxidant source.Arab J Chem,2012,5:489-499
[8] Shukla S,Mehta A,Metha P,et al.Antioxidant ability and total
phenolic content of aqueous leaf extract of Stevia rebaudiana Bert.
Exp Toxicol Pathol,2012,64(7-8):807-811
（收稿日期：2014年3月15日）