全 文 :20 世纪 50 年代开始,大量使用有机合成杀虫剂,对害
虫防治起重大作用,但也产生了严重的“3R”问题 [1]。随着经
济的快速发展,人们对环境问题和食品安全问题更加关注,
找到一种无毒、无残留、高效、安全的农药来替代化学农药
具有十分重要的意义。在不断的探索和研究中,人们把目光
投向了植物产生的次生物质。现已认识到,植物含有大量无
明显功能的次生性代谢物,这些次生性代谢物在调节植物
本身适应其生命环境方面具有重要作用,昆虫也是植物生
命环境的一部分,显然它们对植物中这些次生性化学物质
的演化有直接影响,反过来昆虫也应受到植物中所含的这些
化学物质的影响,这一点已经得到证实。例如烟碱、苦参碱、
印楝素、鱼藤酮、茴蒿素、藜芦碱、苦皮藤素、川楝素、毒藜
碱、茶皂素等都是源于植物的杀虫剂 [2-3]。
苦瓜(Momordica charantia)别名凉瓜、锦荔枝、赖葡萄,
为葫芦科苦瓜属一年生草本植物,原产于亚洲南部热带地
区,南宋时传入我国,我国南北各地均有栽培,尤以华南及
长江流域栽培较多。苦瓜的营养价值很高,其嫩果中含有丰
富的矿物质氨基酸和多种维生素,其中 VC的含量在瓜类蔬
菜中最高 [4-6]。作为药食同源的植物,苦瓜的根、茎、叶、花、果
实、种子皆可入药 [7],近些年人们从苦瓜的花、茎叶、果实中
提取了大量的活性物质 [8-10]。国内外大量研究证实,苦瓜不仅
具有很高的营养价值,而且具有治疗动脉硬化症、糖尿病、
抗病毒、抗肿瘤等功效 [11-13]。陈 宏等对苦瓜叶片抗虫特性进
行系统调查研究后发现,一些害虫如瓜蚜、朱砂叶螨、黄守
瓜和黄足黑守瓜等害虫不能在苦瓜上建立种群或不取食苦
瓜叶片,生长发育和繁殖也受到不同程度的影响 [14-15],与其
他葫芦科作物相比,苦瓜在其生长发育过程中很少受到植
食性昆虫危害,表现出较强的抗虫性 [16-18]。在此基础上,该文
对于苦瓜叶片的化学成分及其对一些农业害虫的抗虫作用
研究进行综述,旨在为进一步研究苦瓜叶片的抗虫机理提
供参考。
1 苦瓜叶提取物中的化学物质
Yasuda 和 Okabe et al 采用甲醇对干燥后的苦瓜茎叶进
行渗滤提取,其提取液浓缩、干燥后用氯仿、正丁醇萃取,经
硅胶柱层析,分离出化合物 MomordicinⅢ。而后又从干燥后
的苦瓜茎叶甲醇提取液的氯仿萃取层和正丁醇萃取层中首
次分离出 MomordicinⅠ和 MomordicinⅡ[19]。
Mekuria et al 从新鲜苦瓜叶片的甲醇提取物中分离出
化合物 momordicinⅣ:7-O-beta-D-glucopyran osyl-3,23-
dihydroxycucurbitane glucoside和 7,23-dihydroxy-3-0-malon-
ylcurtita-5,24-dien-19-al[20]。
Yasui et al 采用高效液相色谱技术从新鲜苦瓜叶片的
甲醇提取物中分离出化合物 :7,23-diglucopyranosyl -3-
hydroxy-cucurbita-5,24-diene-19-al 和 3,7,23-trihydroxy-
cucurbita-5,24-diene-19-al[16]。
Kashiwagi et al 从新鲜的苦瓜叶片的甲醇提取物中分离
出新的化合物 MomordicinⅤ:23-O-beta-D-glucopyranosyl-
7-hydroxy-3-O-malonylcucurbita-5,24-dien-19-al[21]。
成兰英等将干燥的苦瓜茎叶粉末经石油醚脱脂后分离
得到 6 个化合物:26,272 二羟基羊毛甾 27,9(11),242 三烯
23,162 二酮(Ⅰ),Momordol(Ⅱ),苦瓜皂苷Ⅰ(Ⅲ),β-谷甾
醇(Ⅳ),羊毛甾-9(11)-烯 3α,24R,25-三醇(Ⅴ)和(24R)2
环菠萝蜜烷甾 23α,24R,252 三醇(Ⅵ)。化合物Ⅰ、Ⅴ、Ⅵ系
首次从苦瓜中分离得到 [22]。
裴 炎等利用亲和层析和 sephadexG-200 柱层析纯化了
苦瓜的几丁酶[23]。
任立云等将苦瓜藤、叶剪碎,风干,经水蒸气蒸馏,乙醚
萃取,无水硫酸钠干燥,RE-52AA 型旋转蒸发仪减压浓缩,
除去溶剂,得到挥发油。经 GC/MS 分析,从苦瓜藤叶中检出
20 种化学成分:吡啶、醇酮类、酚类、简单有机酸类(乙酸、甲
酸、苯甲酸)[24]。
苦瓜叶提取物及其活性物质防治农业害虫研究进展
骆 颖 1 杨可航 2
(1贵州省正安县农牧局植保站,贵州正安 563400; 2华南农业大学昆虫生态研究室)
摘要 对近几年国内外学者对苦瓜叶片提取物及其活性物质的研究进展进行了综述,介绍了苦瓜叶提取物中分离得到的化学物质,
重点介绍了苦瓜叶提取物及活性物质对斑潜蝇和菜青虫的防治研究进展,以为运用苦瓜叶片提取物及活性物质来防治农业害虫提供参考,
为进一步研究抗虫机理奠定基础。
关键词 苦瓜叶片提取物;活性物质;斑潜蝇;菜青虫
中图分类号 S482.1 文献标识码 A 文章编号 1007-5739(2012)22-0107-03
Research Progress on Extracts of Momordica charantia Leaves and Active Compounds Against Agricultural Pests
LUO Ying 1 YANG Ke-hang 2
(1 Plant Protection Station,Agriculture and Animal Husbandry of Zheng′an County in Guizhou Province,Zheng′an Guizhou 563400; 2 Laboratory of
Insect Ecology,South China Agricultural University)
Abstract This paper summarized the research progress on extracts of M.charantia leaves and active compounds.Active compounds which were
extracted from M. charantia were introduced,especially the research progress on extracts of M. charantia leaves and active compounds against leaf miner
and Artogela(pieris)rapae were reviewed,in order to provide a reference for the use of extracts of M.charantia leaves and active compounds to control
agriculture pests and lay the foundation for further study of insect resistant mechanism.
Key words extracts of Momordica charantia leaves;active compounds;leaf miner;Artogela(pieris)rapae
收稿日期 2012-09-26
植物保护学现代农业科技 2012年第 22期
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植物保护学 现代农业科技 2012年第 22期
凌 冰等从苦瓜叶片的乙醇提取物中分离出 3 种化合
物:(19S,23E)-5β,19-环氧-19-甲氧葫芦素-6,23-二烯-
3β,25-二醇(化合物 1)、(19R,23E)-5β,19-环氧-19-甲氧
葫芦素-6,23-二烯-3β,25-二醇(化合物 2)和 3β,7β,25-
三羟基葫芦素-5,23-二烯-19-醛缩-3-O-β-D-吡喃葡糖苷
(化合物 3)[25]。
2 苦瓜叶提取物防治农业害虫的研究
2.1 斑潜蝇
2001 年,李绍勤等将 7 种不同品种的新鲜苦瓜叶片研
磨碎后 ,采用浸提液和热提液 ,用乙醚 (≥99% )、乙醇
(95%)、丙酮(≥99%)3 种有机溶剂(均为化学纯)提取有效
成分,提取液作用于美洲斑潜蝇(Liriomyza sativae)成虫,观
察提取液对成虫触杀、取食、产卵及生长发育的影响。触杀
作用显示:7 个品种的苦瓜叶片提取液对美洲斑潜蝇成虫均
有一定的触杀作用。对 2 种提取法进行比较发现 ,浸提液
比热提液的效果好;品种间差异显著,其中以大麻子苦瓜叶
片提取液效果最好;3 种溶剂效果强弱依次为:丙酮>乙醚>
乙醇。提取液对美洲斑潜蝇取食、产卵及生长发育作用显
示:提取液对美洲斑潜蝇取食、产卵无明显影响,但是对卵
的孵化及幼虫的生长发育有抑制和毒杀作用,使孵化率、化
蛹率和羽化率降低,与相应溶剂对照及清水对照的差异均
显著,且溶剂效果强弱依次为:丙酮>乙醚>乙醇。浸提液比
热提液对该虫的生长发育影响大,7 个苦瓜品种以大麻子苦
瓜提取液的作用效果最好 [26]。
2004 年,张茂新等测定了美洲斑潜蝇对豇豆、苦瓜、黄
瓜、白瓜、节瓜和丝瓜的寄主选择性时发现,随着苦瓜叶片
的葫芦素含量的增加,美洲斑潜蝇的幼虫数及危害程度明
显减少。由此说明,寄主植物叶片中葫芦素 B 的含量是影
响美洲斑潜蝇成虫寄主选择性的重要原因之一 [27]。
2005 年,Mekuria et al 用甲醇从苦瓜叶片中提取出了
Momordicin I 和一种新的化合物:7,23-dihydroxy-3-O-mal-
onylcucurtita-5,24-dien-19-al,研究发现这 2 种化合物都
对三叶草斑潜蝇(Liriomyza trifolii)的产卵有明显的抑制作
用[20]。
2006 年,Mekuria et al 从苦瓜叶片中提取出 Momordicin
Ⅱ和 MomordicinⅣ。研究发现,这 2 种化合物对三叶草斑潜
蝇的产卵有抑制作用 [28]。
2007 年,Kashiwagi et al 从苦瓜叶片中提取出新的化合
物 MomordicinⅤ,发现此种化合物对三叶草斑潜蝇的产卵
也有抑制作用[21]。
2008 年,任立云等对苦瓜藤叶提取物进行了萃取分离,
并对所得 5 种萃取物和氯仿分离组分进行了选择性生物测
定。结果表明,苦瓜的氯仿萃取物对美洲斑潜蝇的产卵驱避
作用和拒食作用强。进一步对氯仿萃取物进行组分分离,并
进行生物测定,发现萃取物各组分对美洲斑潜蝇的产卵驱
避作用和拒食作用差别很大,2 组分、3 组分显示出较好的
产卵驱避作用,70%乙醇冲洗液表现出强烈的拒食作用。随
后,经气相色谱—质谱联用仪(GC/MS)分析,从苦瓜挥发油
中检测出 20 种化学成分。在已检出的成分中,乙酸的含量
最高,占挥发油总量的 21.579%,其次是甲酸和苯甲酸,分别
占 7.855%和 7.494%,5-乙基-2-呋喃酮、3-羟基-2-丁酮、l-
羟基-2-丙酮等也占有很高的比例。苦瓜挥发油对美洲斑潜
蝇的产卵、取食具有忌避作用,采用四臂嗅觉仪对美洲斑潜
蝇成虫的行为反应进行测定,结果表明美洲斑潜蝇成虫对
这种挥发油具有相同的行为趋向 [29-30]。
2009 年,凌 冰等用乙醇提取苦瓜叶的活性物质,用环
己烷、乙酸乙酯、正丁醇和水依次对乙醇提取物进行萃取,
并测试了 4 种萃取物对美洲斑潜蝇成虫取食和产卵的抑制
作用,发现提取物对美洲斑潜蝇成虫的取食和产卵都具有
较强的抑制作用,其中乙酸乙酯萃取物的活性最强 ,乙酸
乙酯萃取物经硅胶柱层析分离得到(19S,23E)-5β,19-环氧-
19-甲氧葫芦素-6,23-二烯-3β,25-二醇(化合物 1)、(19R,
23E)-5β,19-环氧-19-甲氧葫芦素-6,23-二烯-3β,25-二
醇(化合物 2)和 3β,7β,25-三羟基葫芦素-5,23-二烯-19-
醛缩-3-O-β-D-吡喃葡糖苷(化合物 3),3 种化合物在供试
浓度(100~400 μg/mL)条件下对美洲斑潜蝇的取食和产卵
行为都有明显的抑制作用 [25]。
2.2 菜青虫
1996 年,陈 宏等将新鲜的苦瓜叶片磨碎后 ,采用乙
醚、丙酮、乙醇、石油醚 4 种有机溶 剂浸提和热提苦瓜叶
片,以提取液涂抹甘蓝叶后喂菜青虫 [Artogela(pieris)rapae
Linnaeus]。试验结果表明,4 种有机溶剂提取液处理试虫其
取食量降低,生长速率缓慢,存活率下降,其中乙醚提取液
的作用最强[31]。
2.3 小菜蛾
1999 年,陈 宏等将新鲜的苦瓜叶片磨碎后,利用己醚、
丙酮、乙醇 3 种有机溶剂浸提和热提苦瓜叶片,以提取液涂
抹白菜叶后饲喂小菜蛾幼虫。结果表明,3 种有机溶剂提取
液按照不同浓度饲喂试虫,随浓度增高,其取食量逐渐减
少,生长速率逐渐减慢,存活率显著下降。其中,50%乙醚提
取液作用最强[32]。
2008 年,凌 冰等将晾干的苦瓜叶片用植物粉碎机粉碎
后,用 90%乙醇作为溶剂提取,得乙醇浸提物,从苦瓜叶乙
醇提取物中分离鉴定活性成分苦瓜素 I(Momordicin I)和苦
瓜素 II(MomordicinⅡ),苦瓜素 II 和苦瓜素 I 对小菜蛾幼虫
均有很强的拒食作用和抑制生长发育的作用。乙醇浸提物
用蒸馏水热溶后 ,采用常规“液—液萃取法”,依次用石油
醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取,旋转蒸发仪减压浓缩,获得石
油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水萃取物。结果发现,乙酸乙酯萃
取物的拒食活性最强 [33]。
2009 年,向亚林等将苦瓜茎叶采集后洗净、切碎,晾干,
用 95%工业乙醇连续浸取 3 次,每次 24 h,合并提取液并减
压抽滤。先用多功能提取器进行初步浓缩,再经过旋转蒸发
仪减压浓缩得苦瓜乙醇提取膏状物。苦瓜乙醇提取膏状物
用水溶解后依次用环己烷、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,将
不同溶剂萃取液和剩余的水溶液分别用旋转蒸发仪减压浓
缩成膏状物,得环己烷萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃
取物和水萃取物。并进一步对乙酸乙酯萃取物中的活性成
分进行了分离、纯化和活性测定,最后确定 3 种化合物与以
前提取的化合物一样。测定它们对小菜蛾幼虫的拒食率,发
108
现均对小菜蛾幼虫有拒食作用,其中乙酸乙酯萃取物的抑
制作用最强[34]。
2.4 其他农业害虫
1998 年和 2002 年,Yasui 和 Hiroe et al 相继从苦瓜鲜
叶中提取出化合物 MomordicinⅡ ,并证实其对斜纹夜蛾
(Spodoptera litura)和粘虫(Pseudaletia separate)有强烈的拒
食作用[16,35]。
2000年,Abe和 Matauda用甲醇从苦瓜叶片中提取了化
合物,并用氯仿萃取得到化合物 MomordicinⅠ和 Momordicin
Ⅱ。研究发现 MomordicinⅠ和 MormordicinⅡ在低浓度时对
黑足黑守瓜(Aulacophora nigripennis)有强烈的拒食作用,在
高浓度时对黄守瓜(Aulacophora femoralis)有拒食作用。化合
物 MomordicinⅠ和 MomordicinⅡ或 MomordicinⅡ和其他化
合物混合使用时则对瓜茄瓢虫(Epilachna admirabilis)和瓜
食植瓢虫(Epilachna boisduvali)有强烈的拒食作用 [36]。
2005 年,董易之等测定了苦瓜叶片中含有的葫芦素 B
对甜菜夜蛾 1~3 龄幼虫取食和成虫产卵的影响。结果表明,
当质量浓度达到 1 600 μg/mL 时,葫芦素 B 对 1 龄幼虫有拒
食作用,并降低其存活率,在相同质量浓度下,葫芦素 B 能
抑制成虫产卵,产卵抑制率达 55.5%[37]。
2008 年,张 跃等采用有机溶剂浸提法,从苦瓜叶中获
得各种粗提物,然后作用于黄足黑守瓜成虫,表现出的拒食
活性各异,而以苦瓜叶氯仿粗提物对黄足黑守瓜成虫取食
拒食活性最高,其拒食活性随着浓度的升高而增强。
2012 年,骆 颖等将田间采集的苦瓜鲜叶晾干、粉碎,采
用有机溶剂浸提法获得苦瓜叶乙酸乙酯提取物(膏状物),
测定了苦瓜叶乙酸乙酯提取物对斜纹夜蛾供试种群增长的
影响。结果表明,苦瓜叶乙酸乙酯提取物不仅对斜纹夜蛾
的生长发育有明显的抑制作用,而且对斜纹夜蛾的繁殖及
其种群增长也有明显的控制作用 [38-39]。
3 展望
苦瓜叶片抗虫性的研究具有重要的理论和应用意义。
近年来,国内外学者在苦瓜叶片粗提物的抗虫作用方面进行
了研究,苦瓜叶片提取物对一些农业害虫的抗虫性已经得
到证实。对于苦瓜叶片抗虫物质类群、各种抗虫成分的协同
作用机制、抗虫活性成分的开发等还有很大的研究空间。因
此,对苦瓜叶片抗虫作用的研究会是一个热点,其研究前景
十分广阔。在今后的研究中,应当运用现代化学分离与结
构鉴定技术和生物检测技术对苦瓜 叶片的化学成分和生物
活性物质进行全面而系统的分析,建立高效筛选模式,确定
苦瓜叶片抗虫物质类群。研究各种抗虫成分的协同作用机
制,尝试从多角度去理解苦瓜叶片抗虫作用 ,并结合昆虫
毒理学的研究阐明苦瓜叶片抗虫机理,以为研制新的植物
源及无污染的农药奠定基础,也为进一步丰富植物抗虫性
理论和实际应用研究提供依据。
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调查结果,宜章县南部烟区的白沙圩、笆篱、天塘、一六、岩
泉、栗源等乡镇,农民种植晚稻时,普遍施用二氯喹啉酸防
除稗草,该习惯对烤烟生产构成重大威胁。喷施以 998 植物
生长调节剂、忠诚锌、乌金、菌毒克为主的药剂组合,在发病
初期适时喷施药剂,对防治烤烟除草剂残留药害具有一定
的效果,可以有效控制药害的进一步扩展,对烟株生长活力
有一定的恢复和促进作用,施药 2~3 次后防效可达到 50%
左右,但尚不能根治该药害,相关高效药剂尚需进一步研究
筛选。目前,解决这一问题的关键措施是:在政府统一领导
下,农业、烟草、工商等部门协调配合,加强宣传引导,科学
使用除草剂,在主产烟区强制推广使用烟—稻连作田专用
除草剂[6]。
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为70.36%、66.55%和 69.37%。而大蒜素和叶青双对柑橘溃疡
病防效较差,显著低于对照含铜药剂 20%噻菌铜的处理。李
克才等 [11]研究表明,龙克菌乳油用于脐橙溃疡病防治时与
1 000 万 IU 农用硫酸链霉素 300 g/hm2 具有相当的防治效
果。傅志华等 [12]研究表明,77%可杀得可湿性粉剂 500 倍液、
60%百菌清可湿性粉剂 400 倍液和 400 mg/kg 新植霉素对
柑橘溃疡病的防治效果较好,防效分别为 94.00%、86.90%和
80.43%;而 14%胶氨铜水剂 200 倍液和 20%叶青双可湿性
粉剂 500 倍液的防治效果分别为 63.39%和 30.03%,均明显
低于前 3种药剂。
对柑橘溃疡病的药剂防治要注意施药时间。一般来说,
在夏梢和秋梢新芽萌动,芽长大 2 cm 左右,以及花谢后 10、
30 d 喷药的防治效果较好。同时,应掌握喷药的最佳时期
是在溃疡病害快要发生的前夕开始喷药效果最好。防治柑
橘溃疡病的化学药剂较多,不少新药剂也显示出较好的防
效,各地可按其成本与效果灵活选择。同时,还要注意农药
的轮换使用,以防产生抗药性。
3 问题与展望
综上所述,作为一种检疫性病害,柑橘溃疡病的检测及
防治技术还比较薄弱,进展比较缓慢。截至目前,仍无法找
到一种较好的办法根治柑橘溃疡病,对溃疡病的大面积防
控主要还是采取植物检疫措施,控制溃疡病不断蔓延的趋
势。现代分子技术的应用,为溃疡病菌的早期诊断,尤其是
无症带菌苗木的快速检测开辟了新的途径。PCR 检测以其
快速、准确、灵敏成为重要的一项检测技术,值得推广应用。
但值得注意的是,对柑桔溃疡病菌的最终鉴定,必须以其在
人工接种的感病寄主上产生典型症状的致病性试验结果为
依据。自从中国加入 WTO 组织后,随着柑橘国际贸易的频
繁发生,柑橘溃疡病严重制约了我国柑橘种苗 、果品的出
口,国际贸易对柑橘溃疡病的快速检测提出了更高的要求,
我国需尽快开发溃疡病检测的新型试剂盒,以满足进出口
岸的检疫要求。
现代化学药剂不仅具有杀菌或抑菌的活性,而且可以
调节植物病原菌的生理机能。由于植物病原菌极其容易对
化学药剂产生一定的抗药性,特别如 2-氨基一嘧啶类、苯
酰胺类这些具有单个作用位点的杀菌药剂,一般在使用 2
年后即可产生抗药性。因此,在溃疡病防治过程中需加强
药剂选择,尽量避免长期使用同一种农药。同时,对柑橘溃
疡病不能过分地依赖于化学药剂防治,也需从其他途径加
深对溃疡病的防控技术研究,如生物防治及抗溃疡病育种
技术。
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