全 文 ：高效液相色谱法测定柚叶中柚皮苷的含量
蓝松　(宜春学院生物工程研究所 ,江西宜春 336000)
摘要　建立柚叶中柚皮苷含量的高效液相色谱分析方法。采用 Kromasil C18色谱柱 ,流动相为甲醇∶水∶醋酸(35∶61∶4), 流速为 1.0
ml/min ,检测波长为 283 nm。柚皮苷进样量在 0.101～ 2.202μg线性良好 ,平均回收率 101.27%, RSD为 1.41%, 所测样品的柚皮苷含量
0.84%～ 1.25%,且嫩叶柚皮苷含量稍高于老叶。该法简便 、快速、准确 ,可用于柚叶中柚皮苷的含量测定。
关键词　柚皮苷;柚叶;含量测定
中图分类号　S666.3　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2007)33-10581-01
Determination of Naringin in Leaves of Citrus grandis(L.)Osbeck by the Method of HPLC
LAN Song　(Yichun University , Institute of Bioengineering, Yichun , Jiangxi 336000)
Abstract　To establish a method for the determination of naringin in leaf of Citrus grandis(L.)Osbeck by HPLC , the chromatographic condions were as
follows:Kromasil C18 column with methel-water-acetic acid(35∶61∶4)as mobile phase , the detection wavelength at 283 nm and the flow rate being 1.0
ml/min.The results indicated a linearity of naringin in the range of the average recoverywas 101.27%(RSD=1.41).The conclusion was themethod was
rapid and precise, and could be used to determine naringin in leaves of Citrus grandis(L.)Osbeck.
Key words　Naringin;Citrus grandis(L.)Osbeck;Analysis
作者简介　蓝松(1977-),男 ,江西宜春人 ,讲师 ,从事中药学研究。
收稿日期　2007-06-21
　　芸香科植物柚[ Citrus grandis(L.)Osbeck]广泛分布于我
国华南 、华东等地区 。其外层果皮在药典中称为化橘红[ 1] ,
其主要有效成分之一为柚皮苷 ,具有抗炎 、抗菌 、抗病毒 、抗
变态反应 、抗氧化 、抗癌等多方面作用[ 2] 。据报道 ,柚皮苷在
碱性条件下 ,经氢化处理 ,可得二氢查尔酮甜味剂 ,其甜度为
蔗糖的 100倍。因此柚皮苷具有较好的应用前景 。
1　材料与方法
1.1　材料　①仪器 。Dionex P580A型高效液相色谱仪 ,分析
天平(Sartorius),索式提取器 ,水浴锅 、烘箱等。 ②试剂。柚
皮苷(中国药品生物制品检定所 , 0722-200708);甲醇(色谱
纯);石油醚(60 ～ 90 ℃),醋酸等试剂均为分析纯。 ③样品。
柚叶于 2007年 5月采自江西宜春市郊 2株柚树 ,采摘时分为
嫩叶和老叶。样品采集后 60 ℃干燥 48 h ,粉碎过 80目筛 ,干
燥器中保存 。
1.2　方法
1.2.1　色谱条件。流动相为甲醇∶水∶醋酸(35∶61∶4),流速
1.0ml/min;柱温 25 ℃;色谱柱为C18柱(Kromasil ,250mm×4.6
mm ,5 μm);检测波长 283 nm 。
1.2.2　对照品溶液的制备 。精密称取对照品 10.1 mg ,置 10
ml量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,精密量取 1 ml置 10 ml量瓶
中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 , 0.45 μm 微孔滤膜过滤 ,取续滤液
即得。
1.2.3　供试品溶液的制备 。取样品 1 g ,精密称取 ,置索氏提
取器中 ,加石油醚(60～ 90 ℃)100 ml ,水浴回流至提取液无色
后 ,挥尽样品中的石油醚 ,加甲醇 80ml再置水浴锅中回流至
提取液无色 ,放冷 ,过滤 ,滤液转移至 100 ml量瓶中 ,加甲醇
稀释至刻度 ,摇匀 ,0.45 μm微孔滤膜过滤 ,取续滤液 ,即得 。
1.2.4　标准曲线的制备。取柚皮苷对照品溶液 ,分别进样
1 、2、5 、10和 20μl ,按上述条件进行测定 ,以柚皮苷量为横坐
标 ,峰面积积分值为纵坐标 ,绘制标准曲线 。求得柚皮苷的
回归方程为 Y =27.204X +0.487(R =0.999 9),在 0.101 ～
2.202μg范围内 ,柚皮苷量与色谱峰面积呈良好的线性关系 。
2　结果与分析
2.1　精密度试验　取柚皮苷对照品溶液进样 10 μl ,按上述
条件进行测定 ,重复 5次 ,柚皮苷峰面积平均值为 28.83 ,RSD
=0.74%(n=5),表明仪器精密度良好。
2.2　重复性试验　按供试品溶液的制备方法 ,精密称取同
一批供试品 5份 ,分别制备后进样 10 μl ,结果含量平均值为
1.09%,RSD=2.03%。表明该法重复性良好 。
2.3　稳定性试验　按供试品溶液测定方法 ,对同一份供试
品溶液 ,分别于 0、2、4 、6和 8 h进样 10 μl ,柚皮苷峰面积积分
值平均 28.15 ,RSD =0.63%。表明样品溶液在 8 h内较稳定 。
2.4　加样回收率试验　精密量取已测定含量的供试品溶液
5 ml ,置 10 ml 量瓶中 ,共 9份 ,分别加入对照品溶液适量
(0.4、0.5、0.6 ml各 3份),加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,按上述
方法进行含量测定 ,结果柚皮苷的平均回收率为 101.27%,
RSD=1.41%。
2.5　样品的测定　按照上述方法 ,对 4批样品进行测定 ,结
果嫩叶柚皮苷含量为:1.02%,1.25%,老叶含量为:0.85%、
0.97%。样品与对照品色谱图见图 1、2 。
图1　对照品 HPLC
3　讨论
(1)柚叶中叶绿素含量很高 ,对柚皮苷含量测定影响较
大 ,故先用石油醚将叶绿素等脂溶性杂质除去。
(2)柚皮苷一般都从柚的果皮中提取得到 ,含量在 1.5%
(下转第 10584页)
安徽农业科学 , Journal of Anhui Agri.Sci.2007, 35(33):10581 ,10584　　　　　　　　　　　　　　　　　　　责任编辑　罗芸　责任校对　李洪
DOI :10.13989/j.cnki.0517-6611.2007.33.046
进菌体的生长 ,反之 ,则抑制其生长 。
图 5　外加碳氮源对多菌灵降解率的影响
图 6　多菌灵起始浓度对菌株 DJ-1生长的影响
3　结论
从长期被多菌灵污染的土壤中分离并经筛选得到的菌
株DJ-1 ,能够以多菌灵作为碳源进行生长 ,且在 5 d内对 100
mg/L的多菌灵降解率达 61%。试验发现 ,培养条件对 DJ-1
的生长及多菌灵的降解有较大影响 ,只有在适宜的环境条件
下 ,菌株才能充分发挥其降解能力 ,DJ-1对多菌灵降解的最
佳条件与其最适生长条件相一致 ,且外加碳氮源的加入能够
大大促进菌体的生长及其对多菌灵的降解 。pH 7.0 、培养温
度 30 ℃、接种量 10%、加入 0.5%蛋白胨时 ,为菌株降解多菌
灵的最佳条件 ,其对 100mg/L多菌灵的降解率可达 90%;而
菌体对多菌灵的生理耐受能力与其利用多菌灵的能力 ,即对
多菌灵的降解能力有一定的相关性 。
参考文献
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(上接第 10581页)
图 2　柚叶HPLC
以上 。测定结果表明 ,柚叶中的柚皮苷含量约 1.0%,且嫩叶
的含量稍高于老叶 ,故可以考虑从柚叶中提取柚皮苷 ,从而
达到充分利用植物资源的目的。
参考文献
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