全 文 ：摘 要：利用索氏提取法提取使君子叶和枝中的黄酮类化合物，正交法选择显色剂体系Na-
NO2-Al（NO3）3-NaOH的浓度，以芦丁为对照品，用分光光度法测定其中的总黄酮含量.回归方程
A=11.4486C-0.00543，相关系数 r=0.999 6，实验结果表明，本法操作简便，重现性好，结果可靠.
关键词：使君子；分光光度法；总黄酮；含量测定
中图分类号：R 284.1 文献标识码：A 文章编号：1674-4942（2012）02-0181-03
李改仙 1，王 芳 2
（1.晋中学院 化学化工学院，山西 晋中 030600；
2.海南师范大学 化学与化工学院，海南 海口 571158）
使君子叶和枝中总黄酮含量的测定
第25卷第2期 海南师范大学学报（自然科学版） Vol.25 No.2
2012年6月 Journal of Hainan Normal University（Natural Science） Jun.2012
Abstract：The total flavonoids in Quisgualis indica were determined by spectrophotometry at 500nm with rutin stan⁃
dard and NaNO2-Al（NO3）3-NaOH system. The regression equation was A=11.4486C-0.00543，r=0.9996. The method is
simple, reproducible and suitable for the determination of total flavones.
Key words:Quisgualis indica；Spectrophotometer；Flavonoids；Quantitative analysis
Determination of Total Flavonoids Content in Quisgualis Indica
LI Gaixian1，WANG Fang2
（1. College of Chemistry and Chemical Engineering，Jin Zhong University，Jingzhong 030600，China；
2. College of Chemistry and Chemical Engineering，Hainan Normal University，Haikou 571158，China）
黄酮类化合物是植物中非常重要的一类次生
代谢产物，具有多种生理活性[1-2].使君子（Quisgua⁃
lis indica）又称留求子、史君子、五棱子等，为使君
子科（Combretaceae）落叶藤本状灌木植物，通常药
用其带壳或不带壳的果实，是古今中药材中著名的
驱虫药[4-5]，最早记载其入药的是晋代的《南方草木
状》，其性温、味甘、消积杀虫，主治小儿疳积虫痛，
是著名的小儿良药 [3-6]. 为充分利用使君子药用资
源，扩展其药用部位，本文测定了其叶和枝中的总
黄酮含量.
1.1 仪器、试剂与材料
仪器：UV757CRT紫外可见-分光光度计（上海
精密仪器有限公司）；电子天平（上海精科天平厂）；
RE-52A型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；
BSR4S电子天平（北京赛多利斯仪器有限公司）；索
氏提取器.
试剂：芦丁对照品（质量分数99.2%，中国药品
生物制品检定所），石油醚（沸程 60~90 ℃）、甲醇、
氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝等试剂均为国产分析
纯.实验用水为二次蒸馏水.
材料：使君子叶和枝采集于海南省三亚市落笔
洞地区，经海南师范大学生命科学学院钟琼芯高级
实验师鉴定为Quisgualis indica的叶和枝.
1.2 标准曲线制备与回归方程
参照文献[7-9]的方法，以试剂空白作参比，于
500 nm波长处，分别测定芦丁标准品溶液的吸光
度.以吸光度A为纵坐标，芦丁浓度C（mg/mL）为横
坐标，绘制标准曲线，见图 1. 试验表明，浓度在
0.00~0.10mg/mL范围内线性关系良好. 得回归方
程：A=11.4486C-0.00543，相关系数 r=0.9996.
1.3 样品处理与测定
1）除脂溶性杂质：分别准确称取已粉碎的使君
子的叶和枝各 1份，每份 2.0~4.0 g，置索氏提取器
中，加入石油醚，加热回流至提取液无色，放冷，弃
去石油醚液.将药渣中石油醚挥干，继续用甲醇提
至无色，提取液移置100 mL容量瓶中，加甲醇至刻
收稿日期:2012-03-05
1 实验部分
度，备用.为使测定稳定，可根据吸光度的大小将其
适当浓缩或稀释.
2）不除脂溶性杂质：准确称取已粉碎的使君子
的叶和枝各1份，每份2.0~4.0 g，置索氏提取器中，
直接用甲醇提取至提取液无色. 提取液移置 100
mL容量瓶中，加甲醇至刻度，备用.
3）测定：精确吸取使君子各部位提取液 1.0
mL，分置于 10 mL比色管中，各加甲醇至 5 mL，余
下部分按上述1.2节方法操作，于500 nm波长测定
吸光度.根据标准曲线计算总黄酮含量.
2.1 测量波长的选择
配制三种不同浓度的芦丁标准溶液，精确吸取
2.0 mL，按1. 2节所述方法进行操作，以试剂空白作
参比，在450~600 nm范围进行波长扫描，得芦丁标
准溶液吸收扫描曲线（见图 2）.根据扫描结果，选
择最大吸收波长500 nm为测量波长.
2.2 显色剂浓度的选择
按1.2节下标准曲线制备所述方法，采用正交
法对显色剂NaNO2-Al（NO3）3-NaOH系统中的各物
质的浓度进行选择，试验结果表明，选择质量分数
为5%的亚硝酸钠、10%的硝酸铝和5%的氢氧化钠
为最佳显色系统中的浓度.
2.3 显色剂稳定性试验
精确吸取芦丁标准溶液、使君子叶或枝的提取
液各 1.0 mL，分别置于 10 mL比色管中，各加甲醇
至 5 mL，余下部分按 1.2节方法进行操作.试验表
明，在室温≤28 ℃的环境中，显色时间在 10~60
min范围内，吸光度基本没有变化.因此，在本试验
测定时间范围内，黄酮类化合物与显色剂生成的有
色络合物是稳定的.
2.4 加标回收率和精密度试验
向已知总黄酮含量的使君子叶或枝的提取液
中加入一定量的 0.2 mg/mL的芦丁标准溶液，按 1.
2节所述方法操作，测定总黄酮，平行测定 5次，计
算加标回收率，结果见表 1和表 2.根据表 1、表 2、
表3和表4，本文所选方法具有良好的精密度.
2.5 叶和枝中总黄酮含量的测定结果
使君子叶和枝的测定及计算结果见表 3和表
1.00
0.80
0.60
0.40
0.20
0.00 0.100.080.060.040.020.00 C（mg/mL）
A
图1 芦丁标准曲线
Fig.1 Standard curve of rutin
1.00
0.80
0.60
0.40
0.20
0.00
A
600580560540520500480460
图2 芦丁吸收光谱
Fig.2 The absorption spectra of rutin
λ/nm
0.08（mg/mL）
0.06（mg/mL）
0.04（mg/mL）
试样量（μg）
加标量（μg）
回收量（μg）
试样量（μg）
加标量（μg）
回收量（μg）
163
100
254
272
100
367
163
100
259
272
100
370
163
100
259
272
100
379
163
100
255
272
100
378
163
100
257
272
100
372
叶
枝
93.8 2.42
101.2 5.34
部 n（测量次数） 1 2 3 4 5 平均回 RSD/%
位 收率/%
表1 加标回收率试验（除脂后）
Tab.1 Recovery test ( after removing the fat )
试样量（μg）
加标量（μg）
回收量（μg）
试样量（μg）
加标量（μg）
回收量（μg）
129
100
249
158
100
258
129
100
250
158
100
259
129
100
251
158
100
259
129
100
244
158
100
261
129
100
243
158
100
263
叶
枝
118.4 3.08
102.0 1.96
部 n（测量次数） 1 2 3 4 5 平均回 RSD/%
位 收率/%
表2 加标回收率试验（不除脂）
Tab.2 Recoveries of determination
（not removing the fat）
182 海南师范大学学报（自然科学版） 2012年
2 结果与讨论
4.
1）从表 3和表 4可知，使君子叶的总黄酮含量
比枝的高得多.
2）采用甲醇（不除脂）提取使君子叶或枝中的
总黄酮时含量较低，其原因可能是提取液中的某些
脂溶性化学成分所引起的测量误差.
3）测定使君子叶和枝中总黄酮时，测试液浓度
不能太高，否则容易产生沉淀.因此，可以通过稀释
的方法，将吸光度控制在0.1-0.6之间为宜.
参考文献:
[1]
[2]
[3]
[4]
[5]
[6]
[7]
[8]
[9]
A（吸光度）
A（吸光度）
叶
枝
部位 n（测量次数） 1 2 3 4 5 6 %（平均质量分数） RSD
表3 使君子总黄酮含量测定结果（除脂后）
Tab.3 Results of determination of Quisgualis indica( after removing the fat )
0.183
0.311
4.08
0.085
0.183
0.305
0.183
0.307
0.183
0.304
0.183
0.304
2.11
0.88
0.183
0.305
A（吸光度）
A（吸光度）
叶
枝
部位 n（测量次数） 1 2 3 4 5 6 %（平均质量分数） RSD
表4 使君子总黄酮含量测定结果（不除脂）
Tab.4 Results of determination of Quisgualis indica（not removing the fat）
0.146
0.178
3.23
0.053
0.146
0.173
0.146
0.180
0.146
0.175
0.146
0.174
2.46
1.67
0.146
0.173
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第2期 李改仙等：使君子叶和枝中总黄酮含量的测定 183
3 结论