全 文 ：第 25卷 ,第 2期 光　谱　实　验　室 Vo l . 2 5 , No . 2
2 0 0 8年 3月 Chinese Journal of Spectroscopy Laboratory March , 2 0 0 8
毛泡桐花中总黄酮的含量测定及提取工艺研究①
① 河南科技学院青年骨干教师资助计划
② 联系人 ,电话: ( 0373) 3040565;手机: ( 0) 13837392476; E-mail: mzf@ his t. edu. cn
作者简介:孟志芬 ( 1970— ) ,女 ,河南省内黄县人 ,副教授 ,主要从事天然产物化学方面的研究工作。
收稿日期: 2007-11-09;接受日期: 2007-12-04
孟志芬②　董彩霞　吕丹丹
(河南科技学院化学化工学院　河南省新乡市华兰大道　 453003)
摘　要　用硝酸铝作显色剂 ,在 490nm波长处 ,采用分光光度法测定了毛泡桐花总黄酮的含量。 确定
了乙醇为毛泡桐花总黄酮的最佳提取剂 ,重点探讨了乙醇浓度、料液比、提取温度、提取时间等因素对毛泡
桐花中黄酮类化合物提取率的影响。 结果表明 ,在最佳条件下 ,毛泡桐花总黄酮得率为 5. 295%。
关键词　毛泡桐花 ,总黄酮 ,提取工艺。
中图分类号: O657. 32　　　文献标识码: B　　　文章编号: 1004-8138( 2008) 02-0273-04
1　前言
毛泡桐 ( Paulownia tomentosa ( Thunb ) steud )又名紫花桐、冈桐、日本泡桐 ,系玄参科
( Scrophulariaceae)泡桐属 (Paulownia )植物 ,落叶乔木 [1 ]。毛泡桐的药用价值早在我国古代就有记
载 ,毛泡桐花具有良好的药理作用 ,临床上可用毛泡桐花治疗感染 ,民间用其治疗脚气 ,均有一定疗
效 [2 ]。毛泡桐在我国广泛种植 ,毛泡桐花资源相当丰富 ,年产量数万吨 ,但 90%以上被浪费。目前 ,
学术界对毛泡桐花的研究报道不多 ,主要是分析其化学成分和研究药理性能 [3— 6 ] ,而对毛泡桐花中
黄酮类化合物的含量测定及提取工艺研究尚未见报道。 本文主要对毛泡桐花中黄酮类化合物的测
定方法及提取工艺进行了研究 ,为毛泡桐花的深加工及资源的合理利用提供了一定的科学理论依
据。
2　材料与方法
2. 1　主要仪器、试剂
HH. SYZL-Ni恒温水浴锅 (北京市医疗设备厂生产 ) ; 722型分光光度计 (山东高密分析仪器厂
生产 ) ; S HB-Ⅲ循环水式多用真空泵 (郑州长城科工贸有限公司生产 ) ; L-160DTP分析天平 (日本
岛津公司 )。
芦丁 ,生化试剂 (国药集团化学试剂有限公司 ) ;浓度为 99. 7%乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化
钠、石油醚均为分析纯。所用毛泡桐花采自河南省豫北地区 ,经干燥粉碎后备用。 实验用水为去离
子水。
2. 2　实验方法
图 1　最大吸收峰波长的测定
2. 2. 1　最大吸收峰波长的测定
准确称取经干燥粉碎后的毛泡桐花 1g
于锥形瓶中 ,按 1∶ 12的料液比加入浓度为
70%的乙醇溶液 ,在温度为 70℃的恒温水浴
条件下浸提 1h,冷却 ,抽滤 ,用少量 70%的
乙醇溶液洗涤滤渣数次 ,合并滤液 ,用 20mL
石油醚萃取 ,除去对黄酮含量测定有影响的
杂质 ,弃去醚层后作为待测液。 将上述待测
液用浓度为 70%的乙醇溶液稀释至 50mL,
用移液管精确吸取 2mL于 10mL比色管中 ,用浓度为 70%的乙醇溶液定容至 10mL,再用移液管精
确吸取 2m L于 10mL比色管中 ,用浓度为 30%的乙醇溶液补至 5m L,加入 5%的亚硝酸钠溶液 0.
3mL,摇匀 ,放置 6min,再加入 10%硝酸铝溶液 0. 3m L,摇匀 ,放置 6min,加入 1moL /L氢氧化钠溶液
4mL,用蒸馏水定容至 10mL,放置 15min,以空白试剂作参比 ,于不同波长处测定吸光度 A ,其结果
见图 1,由图 1可以看出最大吸收峰波长为 490nm。
2. 2. 2　校准曲线的制作
按文献 [7]的方法制作校准曲线。准确称取芦丁标准试剂 10mg,用浓度为 70%的乙醇溶解 ,并
全部转入 100mL容量瓶中 ,用 70%乙醇定容 ,摇匀 ,得质量浓度为 0. 1mg /mL的标准溶液。分别取
上述芦丁标准溶液 0. 0, 1. 0, 2. 0, 3. 0, 4. 0, 5. 0mL于 6支 10mL比色管中 ,用浓度为 30%乙醇补至
5mL,分别加入 5%亚硝酸钠溶液 0. 3mL,摇匀 ,放置 6min,再加入 10%硝酸铝溶液 0. 3mL,摇匀 ,放
置 6min,加入 1mol /L氢氧化钠溶液 4mL,用蒸馏水定容至 10 mL,放置 15 min,在 490nm波长处测
定吸光度 ,参比为空白试剂。得校准曲线 (芦丁浓度 C和吸光度 A的关系 ) ,其回归方程为: A= 6.
024001C- 0. 0094(相关系数 r= 0. 99945)。
2. 2. 3　毛泡桐花中总黄酮的提取及其含量的测定
准确称取经干燥粉碎后的毛泡桐花 1g于锥形瓶中 ,按不同料液比 ,加入一定量提取剂 ,在一定
浸提温度下浸提一定时间 ,冷却 ,抽滤 ,用少量相应浓度的提取剂洗涤滤渣数次 ,合并滤液 ,用 20m L
石油醚萃取 ,弃去醚层后作为待测液。将上述待测液用相应浓度的提取剂稀释至 50mL,用移液管精
确吸取 2mL于 10mL比色管中 ,用相应浓度的提取剂定容至 10mL,再用移液管精确吸取 2mL于
10mL 比色管中 ,用浓度为 30%的提取剂补至 5mL,按 2. 2. 2的方法显色 ,测定吸光度 A ,用下式计
算总黄酮得率。
总黄酮的得率= { [ (C× 10) /2× 10 ] /2× 50} /m× 100%
式中: C——芦丁浓度 ( mg /mL)由回归方程求得 ;m——毛泡桐花质量 ( mg )。
3　结果与分析
3. 1　提取剂的选择
准确称取 4份重量为 1g的经干燥粉碎后的毛泡桐花 ,分别置于 4个锥形瓶中 ,按 1∶ 12的料液
比分别加入浓度为 70%的乙醇、浓度为 70%的丙酮、热蒸馏水及 pH值为 8— 9的饱和氢氧化钙溶
液 ,在温度为 70℃的恒温水浴条件下浸提 1h,冷却 ,抽滤 ,用少量相应提取剂洗涤滤渣数次 ,合并滤
液 , 分别用 20mL石油醚萃取 ,弃去醚层后作为待测液。按 2. 2. 3的方法测定、计算 ,结果如表 1
274 光谱实验室 第 25卷
所示。 　　　
由表 1可知 ,用水或碱液作为毛泡桐花总黄酮的提取剂 ,总黄酮得率较低 ,提取效果不理想。用
丙酮或乙醇作为提取剂 ,提取效果较好 ,但考虑到丙酮有毒对环境污染严重 ,并且相对乙醇而言 ,经
济成本较高 ,所以采用乙醇作为毛泡桐花总黄酮的提取剂。
表 1　提取剂对毛泡桐花总黄酮得率的影响
溶剂 乙醇 丙酮 水 碱液
吸光度 A 0. 253 0. 231 0. 122 0. 067
总黄酮得率 (% ) 5. 445 4. 988 2. 727 1. 585
图 2　乙醇浓度对毛泡桐花
总黄酮得率的影响
3. 2　乙醇浓度对毛泡桐花总黄酮得率的影响
在料液比为 1∶ 12,浸提时间为 1h,浸提温度为 70℃的
条件下 ,不同乙醇浓度 ( 50% 、 60%、 70% 、 80%、 90% )对毛
泡桐花总黄酮得率的影响如图 2所示。由图 2可知 ,随着乙
醇浓度的增加总黄酮得率不断增加 ,当乙醇浓度达到 80%
时 ,总黄酮得率最大 ,继续增加乙醇浓度 ,总黄酮得率反而
下降。虽然在浓度为 80%时总黄酮得率最大 ,但浓度为
70%时的总黄酮得率与 80%时相比相差不大 ,考虑到经济
因素以及浓度过高会使其他脂溶性杂质溶出显著增加 ,影
响后续操作 ,因此 ,后续实验选择乙醇浓度为 70%作为最
佳浓度。
图 3　料液比对毛泡桐花总黄酮得率的影响
3. 3　料液比对毛泡桐花总黄酮得率的影响
在乙醇浓度为 70% ,浸提时间为 1h,浸提温度为
70℃的条件下 ,不同料液比 ( 1∶ 8、 1∶ 10、 1∶ 12、 1∶ 14、
1∶ 16、 1∶ 18)对毛泡桐花总黄酮得率的影响如图 3所
示。由图 3可知 ,随着料液比的增加总黄酮得率不断增
加 ,当料液比增加到 1∶ 14时总黄酮得率达到最大值 ,
料液比继续增大 ,总黄酮得率反而下降。
3. 4　浸提温度对毛泡桐花总黄酮得率的影响
在乙醇浓度为 70% ,料液比为 1∶ 14,浸提时间为 1h
图 4　浸提温度对毛泡桐花
总黄酮得率的影响
的条件下 ,不同浸提温度 ( 50℃、 60℃、 70℃、 80℃、 90℃ )
对毛泡桐花总黄酮得率的影响如图 4所示 ,由图 4可知 ,
当浸提温度较低时 ,随着温度的增加 ,总黄酮得率不断增
大 ,当温度超过 70℃以后变化趋缓 ,并在温度为 80℃时达
到最大值 ,继续提高温度 ,总黄酮得率反而下降。
3. 5　浸提时间对毛泡桐花总黄酮得率的影响
在乙醇浓度为 70% ,料液比为 1∶ 14,浸提温度为
80℃的条件下 ,不同浸提时间 ( 0. 5、 1、 1. 5、 2、 2. 5h )对毛
泡桐花总黄酮得率的影响如图 5所示。由图 5可知 ,随着
浸提时间的增加总黄酮得率先增加后减小 ,当浸提时间
为 1h时 ,总黄酮得率最大。
275第 2期 孟志芬等:毛泡桐花中总黄酮的含量测定及提取工艺研究
图 5　浸提时间对毛泡桐花
总黄酮得率的影响
3. 6　最佳条件下毛泡桐花总黄酮得率验证
在各单因素实验确定的最佳条件下 (乙醇浓度 70% ,料
液比 1∶ 14,浸提温度 80℃ ,浸提时间 1h) ,按 2. 2. 3的方法提
取、测定、计算 ,毛泡桐花总黄酮得率为 5. 295%。由单因素实
验得出的各条件下的总黄酮得率最大值与最佳条件下毛泡
桐花总黄酮得率基本吻合 ,因此本研究确定的最佳条件符合
客观实际。
4　结论
( 1)用硝酸铝作为显色剂 ,毛泡桐花黄酮的最大吸收峰
波长为 490nm。
( 2)乙醇为毛泡桐花总黄酮的最佳提取剂。
( 3)毛泡桐花总黄酮的最佳提取工艺条件为:乙醇浓度 70% ,料液比 1∶ 14,浸提温度 80℃ ,浸
提时间 1h,总黄酮得率为 5. 295%。
参考文献
[1 ]火树华 .树木学 [M ] .第 2版 ,北京:中国林业出版社 , 1990, 375— 377.
[2 ]王新生 .几种常见野菜药用与食疗 [ J] .中国野生植物资源 , 1995, ( 3): 57— 59.
[3 ] Wang X, Cheng C G, Liu J Het al . Ch emical Composi ti on of th e Es sential oi l f rom Paulow nia Tom entosa Flow ers [ J] .林产化学
与工业 , 2005, 25( 2): 99— 102.
[4 ]杜欣 ,师彦平 ,李志刚等 .毛泡桐花中黄酮类成分的分离与结构确定 [ J] .中草药 , 2004, 35( 3): 245— 247.
[5 ]王宝华 ,高增平 ,江佩芬等 .鲜泡桐花与阴干泡桐花化学成分的对比研究 [ J] .北京中医药大学学报 , 2003, 26( 3): 56— 57.
[6 ]付明哲 ,袁福汉等 .泡桐花黄酮抗菌作用及对免疫机能的影响 [ J ].中国兽药杂志 , 1999, 25( 5): 46— 47.
[7 ]黄泽元 ,王海滨 ,刘志伟 .芝麻叶中总黄酮的最佳提取工艺研究 [ J ].农业工程学报 , 2004, 20( 6): 201— 203.
Study on the Content Determination and Extraction Technique
Nology of Total Flavonoids from Flowers of Paulownia
Tomentosa ( Thunb) Steud
M EN G Zhi-Fen　 DONG Cai-Xia　 LV Dan-Dan
( Department of Chemist ry an d Chemical Eng ineering , Henan Inst itute of S cience and Technology,
X inx ing , Henan 453003, P. R .Ch ina )
Abstract　 The total f lav onoids in the flow ers of Paulownia to mentosa ( Thunb) steud was
determined by spect rophotometry based on the co lo r reaction o f f lavonoids and Al( NO3 ) 3 solution
w ith an absorption peak at 490nm. The total f lavonoids ex traction technolog y w as also studied.
The ethanol w as selected as ex t raction solv ent. The ef fects o f ethano l concentration, rate of
ma terial to solvent, ex t raction temperature and ex t raction time on the ex traction of f lav onoids w ere
studied. The to tal flavonoids content o f Paulownia tomentosa ( Thunb) steud i s 5. 295% at the
optimum ex traction condi tion.
Key words　 Flowers of Paulownia Tomentosa ( Thunb ) Steud , Total Flavonoids, Ex traction
Technology.
276 光谱实验室 第 25卷