全 文 ：一份按本文工艺进行实验 , 得 0.56 g固形物 。
HPLC法测定固形物中龙胆苦苷的含量 ,结果由提
取液直接浓缩干燥的固形物中龙胆苦苷含量为
5.92%;按本文工艺进行实验所得固形物中龙胆苦
苷含量为 29.12%,龙胆苦苷洗脱率为 90.61%,精
制程度为 491.89%。
4 　讨论
中药中有效成分的传统精制方法多为水醇法 ,
但有效成分损失多 ,乙醇消耗量大 ,周期长 。而大孔
吸附树脂具有吸附容量大 ,选择性好 ,易解吸 ,易再
生 ,成本低 ,效率高等优点 ,国内外研究者已广泛将
其用于生物碱 、皂苷 、黄酮 、多糖的提取 ,取得了显著
的效果 〔4〕。
本实验研究了利用大孔吸附树脂富集龙胆苦苷
的工艺 ,结果表明 D-101大孔吸附树脂对秦艽叶中
龙胆苦苷具有很好的吸附能力 ,且解吸附快 、洗脱率
大 ,经过 D-101大孔吸附树脂处理后的药液固形物
比上柱前原药液固形物显著降低 ,有效成分含量明
显提高。验证实验表明 ,用 D-101大孔吸附树脂富
集秦艽叶中龙胆苦苷 ,以蒸馏水和 25%乙醇依次洗
脱的工艺稳定可行 。
参 考 文 献
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(2007-04-02收稿)
响应面分析法优化白苏中总黄酮的超声提取工艺
王　薇 ,余陈欢 ,沈　洁 ,吴巧凤＊
(浙江中医药大学药学院 ,浙江杭州 310053)
　　摘要　目的:确定白苏总黄酮的最佳提取工艺条件。方法:以白苏总黄酮提取率为指标 , 采用响应面分析法优
化超声提取工艺条件 , 考察乙醇浓度 、固液比 、提取次数等三因素对白苏总黄酮提取率的影响。结果:白苏总黄酮
最佳提取工艺条件为 ,加 60%乙醇超声提取 4次 ,每次 18min,固液比为 1∶15,总黄酮提取率为 24.65mg/g。结论:
超声法对白苏总黄酮有较好的提取作用 ,工艺简单 , 易于工业化大生产。
关键词　白苏;总黄酮;响应面分析法
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2007)12-1586-04
UltrasonicExtractionforFlavonoidsfromPerilafrutescens
byResponseSurfaceMethod
WANGWei, YUChen-huan, SHENJie, WUQiao-feng
(DepartmentofPharmacy, ZhejiangUniversityofTraditionalChineseMedicine, Hangzhou310053, China)
Abstract　Objective:ToinvestigatetheextractionprocessofPerilafrutescensflavonoids.Methods:Responsesurfacemethod
(RSM)wasappliedtoafractionaldesign.ThePerillafrutescensflavonoidswereextractedbyultrasonicmethod.Theinfluencefactors
ofconcentrationofalcohol, ratioofliquidtosolid, extractiontimeswereevaluated.Results:Theoptimumextractionconditionswere
confirmedasfolows:60% alcoholextracted4 times, 18 minuteseverytimeandratioofliquidtosolidwas15∶1.Theextractionrate
offlavonoidsunderthisconditionwas24.65 mg/g.Conclusion:ApplyingultrasonicmethodtoextractPerilafrutescensflavonoidsis
feasible.
Keywords　Perilafrutescens;Favonoid;RSM
＊通讯作者:吴巧凤 ,女 ,教授 ,硕士生导师 ,主要从事中药有效成分和质量标准研究;Tel:0571-86613605, E-mail:wqfyjm@sina.com。
　　白苏 Perilafrutescens(L.)Brit,别名荏 、南苏 ,
为唇形科一年生草本植物 ,在我国分布广泛 、资源丰
富。其主要含有挥发性成分紫苏醛 、紫苏醇 、柠檬烯
以及紫苏苷 、木犀草素 、芹菜苷 、芹黄素等多种黄酮
·1586· 中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 30卷第 12期 2007年 12月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2007.12.038
类化合物 〔1〕。据报道 ,白苏总黄酮具有抗氧化 、抗
衰老 、清除和抑制自由基等作用 ,在美白和护肤方
面 ,几乎可与人工合成抗氧化剂 BHA媲美 ,且安全 、
无毒副作用 〔2、3〕。但至今白苏尚未被中国药典收
载 。目前国内研究主要集中在紫苏上 ,对白苏尤其
是白苏总黄酮的研究甚少。近年来 ,超声技术应用
于提取植物中生物活性物质的研究已有报道 〔4、5〕 ,
其具有能耗低 、效率高 、不破坏有效成分等特点 。但
超声技术应用于提取白苏中黄酮类物质的研究尚未
见报道 。本文研究了影响白苏总黄酮超声提取效果
的各个因素 ,并通过响应面分析法 〔6 ～ 8〕确定了最佳
提取工艺条件。
1 　仪器与试药
1.1 　仪器　WND-200A型高速中药粉碎机(上海
微型电机厂), SHZ-D循环水式真空泵(巩义市英峪
于华仪器厂), HH-S型水浴锅(巩义市英峪于华仪
器厂), KQ5200型超声波清洗器(昆山市超声仪器
有限公司), S22PC可见分光光度计(上海棱光技术
有限公司)。
1.2 　试药　白苏药材于 2006年 10月采自杭州九
溪 ,经姚振生教授鉴定为白苏 Perilafrutescens(L.)
Brit的地上部分 ,阴干 ,粉碎 ,备用 。芦丁标准品购
自中国药品生物制品检定所(批号:100080-20030);
所用试剂均为分析纯 。
2 　方法与结果
2.1 　总黄酮的含量测定
2.1.1　对照品溶液的制备:精密称取 105℃干燥
恒重的芦丁对照品 6.50 mg,加 50%乙醇溶解定容
于 50ml容量瓶 ,得浓度为 0.13 mg/ml对照品溶
液 ,备用。
2.1.2　标准曲线的制作 〔9〕:精密吸取标准品溶液
0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml,分别置 25ml容量
瓶中 ,加入 5%NaNO2 1.0 ml,摇匀 ,放置 6 min后加
入 10%Al(NO3)3 1.0 ml,摇匀 ,放置 6 min后加入
10%NaOH10 ml,再加 50%乙醇稀释至 25 ml,混
匀 ,静置 15min,于 150 nm处测定吸光度 。以吸光
度值(A)为纵坐标 ,以芦丁浓度(C)为横坐标 ,绘制
标准曲线 ,得回归方程:A=0.3262C+0.003(r=
0.9996),结果表明芦丁在 0.013 ～ 0.13 mg范围内
呈良好的线性关系。
2.1.3　精密度实验:取芦丁对照品浓度 0.6ml,置
25 ml容量瓶中 ,按 2.1.2项方法操作 ,平行测定 5
次 ,结果 RSD为 0.47%,表明精密度良好。
2.1.4　加样回收率实验:取已知总黄酮含量的白
苏样品 6份 ,分别精密添加已知浓度的芦丁对照品
适量 。按 2.1.2项方法操作 ,测定总黄酮含量 ,计算
回收率 , 结果平均回收率为 99.35%, RSD为
3.02%。
2.2　超声提取工艺研究　分别称取干燥至恒重的
白苏药材粉末 5.0g,根据 Box2 Benhnken的中心组
合实验设计原理 ,综合单因素实验结果 ,选取固定料
液比 、乙醇体积分数与提取时间三个因素 , 分别以
X1 、X2 、X3表示 ,每个自变量的低 、中 、高水平分别以
-1、0、1进行编码 ,采用 SAS9.1.3对实验数据进
行回归分析 。以白苏中总黄酮提取率作为响应值
(Y)。方案见表 1。按其选择的因素和水平进行超
声提取 ,合并提取液 ,过滤 ,定容于 100 ml容量瓶 ,
作为供试品溶液。取供试品溶液适量 ,其余操作同
2.1.2项 ,测定总黄酮含量。结果见表 2。
　表 1 　实验因素及水平安排
因素 /水平 -1 0 1
X1(乙醇浓度 /%) 60 70 80
X2(固液比) 15 20 25
X3(提取次数) 2 3 4
　表 2 　响应面实验安排及结果
实验编号 X1 X2 X3 Y(mg/g)
1 -1 -1 0 22.45
2 -1 1 0 23.37
3 1 -1 0 23.45
4 1 1 0 24.14
5 0 -1 -1 19.70
6 0 -1 1 23.68
7 0 1 -1 19.85
8 0 1 1 25.76
9 -1 0 -1 21.99
10 1 0 -1 20.46
11 -1 0 1 25.12
12 1 0 1 23.91
13 0 0 0 25.82
14 0 0 0 25.90
15 0 0 0 25.75
　　注:共有 15个实验 ,其中 12个为析因实验 , 3个为中心实验 ,以
估计误差。
　　采用 SAS9.1.3软件对表 2结果进行响应面回
归分析 ,得拟合方程:
Y = 25.8233 - 0.1213X1 + 0.4800X2 +
2.0588X3 -0.9242X21 -0.0575X1X2 +0.0800X1X3
-1.5467X22 +0.4825X2X3 -2.0292X23。
在置信区间 95%时 ,线性相关系数 R=0.9689。
由表 3可知 ,回归方程具有显著性 ,可用于替代
实验点对实验结果进行分析 ,并进一步对回归方程
·1587·中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 30卷第 12期 2007年 12月
各项作显著性检验。
　表 3 　　回归方程的显著性检验及方差分析结果
方差来源 自由度 偏差平方和 均方和 F值 显著性
X1 1 0.1176 0.1176 0.1481 -
X2 1 1.8432 1.8432 2.3206 -
X3 1 33.9076 33.9076 42.6900 P<0.01
回归 9 60.8936 6.7656 8.5185 P<0.05
剩余 5 3.9713 0.7943 - -
总体 14 64.8649 - - -
　表 4 　回归方程各项的显著性检验结果
方差来源 自由度 均方和 F值 显著性
一次项 3 11.9561 15.0530 P>0.05
二次项 3 8.0184 10.0953 P>0.05
交互项 3 0.3234 0.4071 P>0.05
误差 5 0.7943 - -
总和 14 21.0922 - -
　　由表 3、4可知 ,方程一次项 、二次项 、交互项对
提取得率影响无显著差异 ,因此各因素与指标之间
的关系是简单的线性关系 ,而不是二次关系 。其中
提取次数对总黄酮提取率影响显著 ,而乙醇浓度 、固
液比则影响不显著。同时作出等值线图和响向面图
(见图 1 ～ 6),进行分析计算后可知 ,理论最佳超声
提取条件为:21.23倍量 69.48%乙醇超声提取
3.54次(20 min/次)。在此条件下 ,白苏总黄酮超
声提取得率理论值为 26.43 mg/g。结合考虑实际
操作的方便性及方差分析结果 ,确定最佳提取条件
为 15倍量 60%乙醇超声提取 4次(18 min/次),并
进行验证性实验 ,进一步测定白苏总黄酮含量 ,结果
测得提取值 24.65 mg/g, RSD=2.12%。证明该工
艺稳定 ,重现性好 。
图 1　y=f1(x1 , x2)的等值线图(x3 =0)
图 2　y=f1(x1 , x2)响应面图(x3 =0)
图 3　y=f
2
(x
2
, x
3
)的等值线图(x
1
=0)
图 4　y=f2(x2 , x3)响应面图(x1=0)
图 5　y=f3(x1 , x3)的等值线图(x2 =0)
图 6　y=f3(x1 , x3)响应面图(x2=0)
3　讨论
本文通过响应面分析法对白苏总黄酮超声提取
工艺进行了优化 ,并得到回归方程 。结果表明 ,各因
素与指标之间的关系是简单的线性关系 ,而不是二
次关系 ,其中提取次数对总黄酮提取率影响显著 ,而
乙醇浓度 、固液比则影响不显著 。结合考虑实际操
作的方便性及实验方差结果 ,确定白苏总黄酮最佳
提取工艺条件为:药材 15倍量 60%乙醇超声提取 4
次 ,每次 18 min,白苏总黄酮提取率为 24.65 mg/g。
本实验方法工艺简单 ,提取率较高。超声可以
强化乙醇浸提法 ,达到省时 、节能的目的 ,此方法采
用全物理过程 ,无污染 ,提取时间短 ,又避免浸出更
多无效或者是有毒副作用的组分 ,有利于药品的进
·1588· 中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 30卷第 12期 2007年 12月
一步分离和纯化 ,克服了药材容易凝聚 、焦化等弊
病 。作为中药提取的新工艺 ,具有良好的应用前
景 〔9、 10〕。但超声过程中会产生热量 ,故应注意超声
器内水溶液的温度 ,以免影响得率。
传统的数理统计方法往往采用正交设计或均匀
设计 ,可同时考虑几种因素 ,寻求最佳因素水平组
合 ,但它不能在给出的整个区域上找到因素和响应
值之间的一个明确的函数表达式 ,即回归方程 〔11〕 ,
从而无法找到整个区域上因素的最佳组合和响应值
的最优值。响应面分析方法是通过中心组合实验研
究几种实验因素间交互作用的一种回归分析方法 ,
具有实验次数少 、周期短 ,求得的回归方程精度高等
优点 ,并从图形方面分析寻求最优实验考察因素值 。
目前 ,国内对紫苏属植物的开发主要集中在药
典记载品紫苏上 ,且资料背景相对齐全。而白苏作
为民间常用药材 ,至今未被药典收载 ,其主要有效成
分黄酮类化合物具有较强的抗氧化 、抗衰老 、清除和
抑制自由基等作用〔3〕 ,日本等东南亚国家已着手作
为天然化妆品原料大力开发。而浙江省白苏分布广
泛 、资源丰富 ,具有极大的市场开发和应用前景 。本
实验研究通过响应面分析 ,确定了白苏的超声提取
最佳工艺 ,可为工业化大生产提供科学的依据 。
参 考 文 献
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(2007-06-05收稿)
利用活性部位指纹图谱筛选驱虫斑鸠菊提取工艺
于鲁海 ,李燕菊 ,孙　力 ,尚　靖 ,徐建国
(新疆维吾尔自治区人民医院临床药学研究所 ,新疆乌鲁木齐 830001)
　　摘要　目的:以活性部位指纹图谱为模板 , 探讨建立驱虫斑鸠菊提取工艺的可行性。 方法:采用正交实验设
计 , 以活性部位的 HPLC指纹图谱色谱峰的变化为指标 , 应用多指标实验公式评分法考察提取工艺条件。结果:驱
虫斑鸠菊的最佳提取工艺为 ,加入 10倍量水 ,浸泡 1h,煎煮 1h,共 3次。结论:所选工艺条件具有科学 、简单 、实用
的特点。
关键词　驱虫斑鸠菊;正交实验;HPLC指纹图谱;多指标实验;公式评分法;提取工艺
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2007)12-1589-03
ApplicationofFingerprintofActivePartonExtractionTechniques
forVernoniaanthelmintica
YULu-hai, LIYan-ju, SUNLi, SHANGJing, XUJian-guo
(TheClinicalMedicalInstituteofXinjiang, Urumqi830001, China)
Abstract　Objective:ToprobeintofeasibilityofextractiontechniquesforVernoniaanthelminticausingHPLCfingerprintofactive
partasmodel.Methods:Theextractiontechniqueswerestudiedbymulti-indextestexperimentformulaevaluationandorthogonalde-
·1589·中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 30卷第 12期 2007年 12月