全 文 ：致 ,有待进一步研究。
参 考 文 献
[ 1] 林秀香 .鸡蛋花及其栽培技术 [ J] .广西农业科学 ,
2006, 37(2):194-195.
[ 2] 高尚士 .南国奇葩鸡蛋花 [ J] .国土绿化 , 2004, (12):
35.
[ 3] 林敬明 , 许寅超 , 冯飞跃 , 等 .鸡蛋花超临界萃取物的
GC-MS分析 [ J] .中药材 , 2002, 24(4):276-277.
[ 4] 官波 , 郑文诚 .角鲨烯提取 、纯化及其应用 [ J] .粮食与
油脂 , 2010, (2):44-46.
收稿日期:2010-12-08作者简介:胡娟(1981-),女 ,硕士 ,助教 ,主要从事药物化学方向及药物分离纯化研究;Tel:13880598357, E-mail:sisly8@ 163.com。
枇杷花总三萜提取工艺研究
胡　娟 1, 2 ,黄　欢 2, 3 ,张　宏 2 ,杨必坤 2
(1.四川广播电视大学 ,四川 成都 610073;2.四川师范大学生命科学学院 ,四川 成都 610068;3.成都地
奥集团 ,四川 成都 610073)
　　摘要　目的:优化枇杷花总三萜提取工艺。方法:以总三萜为考察指标 ,通过单因素及 L9(34)正交试验优选枇
杷花总三萜的提取工艺。结果:确定在 40℃、超声功率 800 W、超声间歇时间为 10/3s条件下 , 以 1∶12的料液比提
取 2次 , 每次 15 min为最佳提取条件。结论:本实验采用的方法和指标适合于枇杷花总三萜的提取 , 为将其开发成
为现代中药成方制剂提供了科学依据。
关键词　枇杷花;总三萜;超声波提取
中图分类号:R944.2　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2011)05-0794-04
　　枇杷花为蔷薇科枇杷属植物枇杷 Eriobotryaja-
ponica(Thunb.)Lindl的干燥花蕾及花序 ,在我国浙
江 、江苏 、四川 、广西等地大规模种植 。枇杷花主要
含有黄酮类 〔1〕、三萜化合物类 、半萜类 、多酚类 、糖
苷类及挥发油。目前 ,枇杷花中含有的三萜酸类 〔2〕
物质因具有多种生物活性而成为研究热点 。本课题
组研究发现枇杷花中富含熊果酸 、齐墩果酸 〔3〕等三
萜类化合物 。本实验采用超声波提取法从枇杷花中
提取总三萜化合物 ,并确定了其最佳工艺条件 ,为枇
杷花三萜类化合物的应用奠定了理论基础 。
1　材料与仪器
1.1　材料　枇杷花采自四川浦江 ,由四川师范大
学生命科学学院植物教研室鉴定为啬薇科枇杷属植
物枇杷 Eriobotryajaponica(Thunb.)Lindl的花 。熊
果酸对照品(批号:10742-200516)由中国药品生物
制品检定所提供 。
1.2　仪器　紫外 -可见分光光度计(日本岛津 UV-
1700);高速中药粉碎机(山东青州市精诚机械有限
公司 , WK21000A型);双频多用途恒温超声提取机
(北京弘祥隆生物技术开发有限公司 , SYR-2000
型);数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公
司 , KQ5200DE型)。
2　方法
2.1　总三萜的测定方法
2.1.1　枇杷花总三萜的含量测定:枇杷花总三萜
含量测定的常规方法 〔4〕是以熊果酸等三萜化合物
为对照品 ,用冰醋酸-香草醛和高氯酸为显色剂 ,用
紫外 -可见分光光度计法测定总三萜的含量 。
2.1.2　枇杷花总三萜标准曲线的绘制:取熊果酸
对照品 2.635 mg,定容于 25 mL乙酸乙酯中 ,混合
均匀得标准溶液。分别吸取 0.00、 0.10、 0.20、
0.40、0.60、0.80、1.00和 1.20 mL标准溶液 ,水浴
蒸干后加入 0.40mL5%香草醛-冰乙酸溶液和 1.00
mL高氯酸 ,于 60℃水浴中加热 15 min后移入冰水
浴中 ,再加入 5.00 mL冰乙酸 ,摇匀后置于室温 。 15
min后用紫外 -可见分光光度计在 548 nm波长下测
定其吸光度 ,根据测定结果绘制标准曲线。熊果酸
在 0 ～ 2.6 mg范围内与吸光度值呈良好的线性关
系 ,其线性回归方程为 Y=0.0338X+2.4286,相关
系数 r=0.9996。
2.1.3　样品含量测定:精密量取供试液 1.0mL,按
“2.1.2”项方法测定 ,外标两点法计算总三萜含量。
2.2　总三萜的提取方法
2.2.1　单因素样品制备:精密称取枇杷花样品 5.0
·794· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 34卷第 5期 2011年 5月DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2011.05.041
g,在一定条件下提取后 ,抽滤 ,浓缩至一定量后定容
于 25mL量瓶中 ,加其提取溶剂至刻度 ,摇匀即得。
2.2.2　正交试验样品制备:根据单因素试验结果 ,
选取温度 、时间 、提取次数 、料液比 4个影响总三萜
含量的主要因素 ,每个因素试验 3个水平 ,进行 L9
(34)正交试验 ,滤液抽滤后浓缩至 25 mL容量瓶 ,
用 95%乙醇定容至刻度 ,即得样品溶液 。
2.3　最佳工艺条件的验证　利用正交试验设计所
优化的最佳工艺条件进行验证试验(n=3),测定最
佳工艺条件下的枇杷花总三萜含量。
3　结果
3.1　单因素试验
3.1.1　提取溶剂的选择:随乙醇浓度的增加 ,枇杷
花总三萜含量呈上升趋势 ,乙醇浓度在 95%时提取
率最高 。可能是因为三萜类是弱极性物质 ,与 95%
乙醇极性最接近 ,根据相似相溶原理 ,在此浓度条件
下 ,溶解三萜类物质的能力达到峰值。所以本实验
提取溶剂选择 95%乙醇 。结果见图 1。
图 1　提取溶剂对总三萜含量的影响
3.1.2　提取功率的选择:总三萜含量在超声提取
功率为 800W时达到最大 ,而提取功率继续增大后
含量反而下降 ,这可能是由于三萜化合物在 1 000
W功率下 ,其化学结构受到破坏 ,综合考虑产品的
收率和生产效益 ,选择超声提取时间为 800 W。结
果见图 2。
图 2　提取功率对总三萜含量的影响
3.1.3　提取间歇时间的选择:总三萜含量随超声
时间延长而缓慢增大 ,但是在超声时间相同条件下 ,
间歇时间长的提取含量较高 ,而且利于超声提取器
的使用和维护 ,故选取 10 /3 s为最佳间歇时间。结
果见图 3。
图 3　间竭时间对总三萜含量的影响
3.1.4　提取温度的选择:随着提取温度的升高 ,总
三萜的含量反而减小。从三萜化合物的性质考虑 ,
其对温度不稳定 ,可能在高温下结构受到破坏 ,不宜
选用较高的温度 ,所以提取温度定为 40℃。结果见
图 4。
图 4　提取温度对总三萜含量的影响
3.1.5　提取时间的选择:总三萜含量在 15 min时
有个峰值 ,而 15 min后含量缓慢下降 ,这可能是由
于三萜类化合物长时间受热而导致其结构发生了改
变。综合考虑产品的收率和生产效益 ,选择超声提
取时间为 15min。结果见图 5。
图 5　提取时间对总三萜含量的影响
·795·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 34卷第 5期 2011年 5月
3.1.6　提取次数的选择:提取次数对总三萜提取
影响很大 ,提取 2次已提出枇杷花中总三萜含量的
88%,从生产工艺的角度考虑 ,故选用 2次 。结果见
图 6。
图 6　提取次数对总三萜含量的影响
3.1.7　提取料液比的选择:枇杷花总三萜含量随
料液比增大而增大 ,当料液比大于 1∶12时 ,增大料
液比 ,总三萜含量上升开始缓慢 ,说明当料液比达到
1∶12以后 ,总三萜已经基本全部溶出 ,所以提取率
不会随料液比的增大而明显上升 ,因此 1∶12为提取
较佳料液比 。结果见图 7。
图 7　料液比对总三萜含量的影响
3.2　正交试验结果　按 “2.2.2”项下正交试验方
法操作 ,试验因素水平见表 1,正交试验结果与方差
分析见表 2、3。
　表 1 　正交试验因素水平表
水平
因素
温度 /℃A 提取时间 /minB 料液比 /%C 提取次数 /次D
1 40 10 8 1
2 60 15 12 2
3 80 20 20 3
　　通过正交试验结果可得 ,各因素影响顺序为 D
>A>B>C;由表 3方差分析结果表明 ,相对于 C因
素(料液比)(误差来源), A(温度)、D(提取次数)
两因素有显著性意义(P<0.05), B(时间)因素则
无显著性意义 , C因素对试验结果的影响最小 。故
超声提取枇杷花总三萜最佳工艺条件为 A1B2C2D2 ,
即溶剂加 12倍量 , 40 ℃超声提取 2次 , 每次 15
min。
　表 2 　正交试验结果
编号 A B C D 总三萜含量/‰
1 1 1 1 1 9.211
2 1 2 2 2 8.926
3 1 3 3 3 9.552
4 2 1 2 3 8.175
5 2 2 3 1 8.980
6 2 3 1 2 5.834
7 3 1 3 2 5.348
8 3 2 1 3 9.210
9 3 3 2 1 8.529
K1 27.69 22.73 24.26 26.72
K2 22.99 27.12 25.63 20.11
K
3 23.09 23.92 23.88 26.94
R 4.70 4.39 1.75 6.83
　表 3 　正交试验方差分析结果
方差来源 离差平方和 自由度 均方 F P
A 0.0678 2 0.0339 19.94 <0.05
B 0.0081 2 0.0041 2.41
C(误差) 0.0034 2 0.0017 1.00
D 0.1990 2 0.0995 58.53 <0.05
3.3　验证试验结果　按 A1B2C2D2的条件提取 3
次 ,总三萜含量平均值为 10.133‰,结果见表 4。
　表 4 　验证试验结果
提取次数 1 2 3
三萜化合物含量 /‰ 10.367 9.798 10.235
三萜化合物含量平均值 /‰ 10.133
RSD/% 2.939
4　小结
4.1　本实验采用超声波提取法 ,以总三萜含量为
指标 ,通过正交试验结果可得 ,各因素影响顺序为 D
>A>B>C;故温度和提取次数对总三萜提取有较
大影响 ,得最佳提取工艺 A1B2C2D2 ,即溶剂加 12倍
量 , 40℃超声提取 2次 ,每次 15min。
4.2　结合单因素及正交试验结果得到提取枇杷花
总三萜的工艺参数为在 40 ℃、超声功率 800 W、超
声间歇时间为 10/3 s条件下 ,加入 12倍量 95%乙
醇 ,超声提取 2次 ,每次 15 min。验证试验结果表
明 ,本工艺条件对枇杷花总三萜的提取是比较稳定
的 ,为枇杷花的制剂和新药开发提供了很好的参考。
·796· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 34卷第 5期 2011年 5月
参 考 文 献
[ 1] 郑美瑜 ,陆胜民 , 陈剑兵 ,等 .枇杷花总黄酮的提取工艺
优化 [ J] .食品与发酵科技 , 2009, 4(5):52-54.
[ 2] 李琪 , 杨必坤 , 张晓喻 , 等 .枇杷花有效成分的含量
[ J] .广西植物 , 2009, 29(5):698-702.
[ 3] 张晓喻 , 黄春萍 , 张宏 , 等 .RP-HPLC-PDA测定枇杷花
中齐墩果酸和熊果酸的含量 [ J] .药物分析 , 2006, 12
(5):144-147.
[ 4] 江绍琳 , 江绍玫 ,曾令聪 , 等.分光光度法快速测定灵芝
中总三萜含量 [ J] .江西农业大学学报 , 2006, 28(4):
634-636.
收稿日期:2010-12-09作者简介:罗建明(1973-),男,本科 ,主管药师 ,主要从事药物新剂型与新技术研究;Tel:13600486547, E-mail:gz221318@sina.com。＊通讯作者:杨帆 , Tel:13922135439, E-mail:gzyangfan@hotmail.com。
气相色谱测定脑清喷鼻乳剂中
麝香与冰片的方法学研究
罗建明1 ,李　桃 1 ,王欣然 2 ,杨　帆2＊
(1.广东省人民医院药学部 /广东省医学科学院 ,广东 广州 510080;2.广东药学院药科学院 ,广东 广州
510120)
　　摘要　目的:建立脑清喷鼻乳剂中麝香与冰片含量的气相色谱测定方法。方法:采用 VARIANDB-WAX52毛
细管色谱柱(30.0 m×320 μm, 0.25 μm),柱温由 80 ℃升至 210 ℃,采用程序升温;FID检测器 , 检测器温度为 300
℃。结果:样品中的龙脑 、异龙脑 、麝香酮成分完全分离且线性关系良好 , 龙脑 、异龙脑 、麝香酮的加样回收率分别
为 98.66%、102.39%、98.61%(n=6)。结论:该法简便快速 , 灵敏度高 , 重复性好 ,结果准确 , 适用于脑清喷鼻乳剂
中麝香与冰片的含量测定。
关键词　脑清;气相色谱法;麝香酮;龙脑;异龙脑
中图分类号:R927.2　文献标识码:A　文章编号:1001-4454(2011)05-0797-03
　　脑清喷鼻乳剂由三七 、川芎 、冰片等 6味药材组
成 ,用于治疗缺血性脑中风 , 临床治疗效果确
切 〔1, 2〕。该制剂根据方中药物性质和临床用药需
要 ,将中药乳剂和喷鼻给药相结合 ,提高了药物有效
成分的生物利用度 ,增加了患者用药依从性 ,特别是
利用喷鼻剂具有的剂型特点 ,加强了药物针对脑部
的靶向作用 ,适用于缺血性脑血管机能不全急性期
的应急处理 。笔者在参考文献 〔3-5〕与大量实验研究
的基础上 ,采用气相色谱法对脑清处方中的君药冰
片和麝香进行了检测 ,结果表明 ,该方法专属性强 ,
重现性好 ,可为该制剂的质量控制提供参考。
1　仪器与试药
1.1　材料　脑清喷鼻乳剂(自制 ,批号为 101201、
101202、101203)。
1.2　试剂　龙脑对照品(中国药品生物制品检定
所 ,批号为 200702,含量测定用);异龙脑对照品(中
国药品生物制品检定所 ,批号为 200708,含量测定
用);麝香酮对照品(中国药品生物制品检定所 ,批
号为 200706,含量测定用);正己烷(分析纯 ,天津试
剂厂);氯化钠(化学纯 ,天津试剂厂),乙醇及其他
化学试剂为进口或国产分析纯以上。
1.3　仪器　瓦里安 CP3800气相色谱仪 , DB-WAX
52(30.0m×320 μm, 0.25 μm)毛细管色谱柱 , FID
检测器;电子天平(AUW200D, SHIMADZU),高速台
式离心机(TGL-20B,上海安亭科学仪器厂)。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 　色谱柱:VarianCP-WAX52毛细
管色谱柱(30.0m×320 μm, 0.25μm);柱温采用程
序升温 , 80 ℃维持 2 min,再以 20 ℃/min升温至
120 ℃维持 10min,再以 20℃/min升温至 190℃维
持 5min,再以 10 ℃/min升温至 210 ℃维持 5 min;
进样口温度为 250 ℃;检测器温度为 300℃;载气为
氮气;流速为 5 mL/min;分流比为 5∶1;进样量 2μL。
在此色谱条件下 ,供试品中异龙脑 、龙脑和麝香酮与
其他组分峰达到基线分离 ,分离度均大于 1.5。
2.2　溶液的配制 　对照品溶液的配制:精密称取
龙脑 、异龙脑 、麝香酮对照品适量 ,置于 5mL棕色容
量瓶中 ,加无水乙醇稀释至刻度 ,摇匀 ,制成 2.258
·797·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 34卷第 5期 2011年 5月