全 文 ：北方园艺２０１５（１４）：１２９～１３２ ·贮藏保鲜加工·
第一作者简介：库尔班江·巴拉提（１９６２－），男，维吾尔族，教授，研
究方向为中药与天然药物。Ｅ－ｍａｉｌ：ｋｏｒｂａｎｊｈｏｎ＠１２６．ｃｏｍ．
基金项目：国家自然科学基金资助项目（２１１６６０２４）。
收稿日期：２０１５－０３－１５
ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１５１４０３４
苹果叶总黄酮的提取及其含量测定
库 尔 班 江 · 巴 拉 提１，王 　 萌２，张 小 莺１，２
（１．新疆伊犁师范学院 化学与生物科学学院，新疆 伊宁８３５０００；２．西北农林科技大学 动物医学院，陕西 杨凌７１２１００）
　　摘　要：以“红元帅”苹果的干燥叶子为试材，通过单因素试验确定苹果叶总黄酮的最佳提取
工艺条件，采用可见分光光度法对苹果叶中总黄酮含量进行测定，以期为苹果叶中总黄酮提取工
艺及含量测定提供方法和依据。结果表明：苹果叶总黄酮的最佳提取工艺条件为乙醇作溶剂，乙
醇浓度６０％，料液比１∶２０ｇ／ｍＬ，提取温度为７０℃，提取时间为３０ｍｉｎ；在选定试验条件下对苹
果叶进行含量测定，对芦丁对照品浓度与吸光度进行线性回归，其回归方程为Ｙ＝２４．８２１　４３Ｘ－
０．０３１，Ｒ２＝０．９９９　４５（ｎ＝６），芦丁对照品质量在４～２４μｇ范围内呈良好的线性关系，在此条件下
测定苹果叶中总黄酮平均含量为３０．２８ｍｇ／ｇ。试验优选出了苹果叶中总黄酮的最佳提取工艺条
件及含量测定方法，该方法简单、快速，准确，精密度，稳定性，重现性良好。
关键词：苹果叶；总黄酮；提取工艺；含量测定
中图分类号：Ｒ　２８４．２　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１５）１４－０１２９－０４
　　苹果系蔷薇科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）苹果属（Ｍａｌｕｓ　ｐｕｍｉｌａ
Ｍｉｌ．）植物苹果的果实，属大宗水果，是我国及全世界上
　　　　
种植最广、产量最多的果品。新疆苹果资源丰富，已发
展成为我国苹果主产区之一［１－２］。大量的苹果叶大多被
废弃或焚烧，不但造成严重的资源浪费而且污染了环
境。黄酮类化合物是植物的次生代谢产物，广泛存在于
高等植物及啮齿植物的根、茎、叶、花、果实等中，是许多
中草药的有效成分。由于其生理活性多样性，近年来，
　　
［１１］赖传雅，李朝生，韦迎春，等．龙眼叶枯病菌疏毛拟盘多毛孢生物学
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Ｐａｔｈｏｇｅｎ　Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　Ｒｏｓｅ　Ｌｅａｆ　Ｂｌｏｔｃｈ　ｉｎ　Ｔｉａｎｊｉｎ
ＦＥＮＧ　Ｙｏｕｒｅｎ，ＬＩＵ　Ｂａｏｓｈｅｎｇ，ＢＡＩ　Ｐｅｎｇｈｕａ
（Ｔｉａｎｊｉｎ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ　Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，Ｔｉａｎｊｉｎ　３００３８１）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ　ｏｎｅ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｏｎ　ｌｅａｆ　ｏｆ　Ｒｏｓａ　ｃｈｉｎｅｒｓｉｓ　ｔｈａｔ　ｆｏｕｎｄ　ｉｎ　Ｔｉａｎｊｉｎ　ｆｌｏｗｅｒ　ｎｕｒｓｅｒｙ　ａｓ　ｔｅｓｔ　ｍａｔｅｒｉａｌ，ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎ
ｗａｓ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ　ａｎｄ　ｒＤＮＡ－ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ，ｓｉｍｐｌｅ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｆ　ｔｈｉｓ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｗａｓ　ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ　ａｌｓｏ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｆｕｎｇａｌ　ｃｏｌｏｎｙ　ｔｈａｔ　ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ　ｏｎ
ＰＤＡ　ｗａｓ　３４．６－３７．２ｍｍ　ｉｎ　ｄｉａｍｅｔｅｒ，ｗｉｔｈ　ｃｏｎｃｅｎｔｒｉｃ　ｒｉｎｇｓ　ｉｎ　ｗｈｉｔｅ　ｉｎ　ｆｏｕｒ　ｄａｙｓ．Ｔｈｅ　ｃｏｎｉｄｉａ　ｗａｓ　ｆｕｓｉｆｏｒｍ　ａｎｄ　４．８３－
９．１１μｍ　ｉｎ　ｄｉａｍｅｔｅｒ，ｆｏｒｍｅｄ　ｂｙ　ｆｉｖｅ　ｃｅｌｓ　ｗｉｔｈ　ｆｏｕｒ　ｔｒａｎｓｖｅｒｓｅｓ；ｔｈｅ　ａｐｉｃａｌ　ａｐｐｅｎｄａｇｅ　ｏｆ　ｃｏｎｉｄｉａ　ｗａｓ　２－３，５．９３－
３６．２３μｍ　ｉｎ　ｌｅｎｇｔｈ；ｔｈｅ　ｂａｓａｌ　ａｐｐｅｎｄａｇｅ　ｏｆ　ｃｏｎｉｄｉａ　ｗａｓ　１，２．８５－１６．０５μｍ　ｉｎ　ｌｅｎｇｔｈ．Ｔｈｅ　ｈｏｍｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｒＤＮＡ－ＩＴＳ
ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｉｓ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ａｎｄ　Ｐｅｓｔａｌｏｔｉｏｐｓｉｓ　ｃｌａｖｉｓｐｏｒａ　ｗａｓ　９９％．Ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ａｎｄ
ｒＤＮＡ－ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ，ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｗａｓ　ｆｉｎａｌｙ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ａｓ　Ｐ．ｃｌａｖｉｓｐｏｒａ．Ｔｈｉｓ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ｒｅｐｏｒｔ　ｔｈａｔ
Ｐｅｓｔａｌｏｔｉｏｐｓｉｓ　ｃｌａｖｉｓｐｏｒａｃｏｕｌｄ　ｃａｕｓｅ　ｌｅａｆ　ｂｌｏｔｃｈ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｏｆ　Ｒｏｓａ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　Ｊａｃｑ　ｉｎ　Ｃｈｉｎａ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｓｔｕｄｉｅｓ
ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｆｏｒ　ｇｒｏｗｔｈ　ｗａｓ　２５℃，ｎｏ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ　ｅｘｉｓｔｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　２０－
３０℃；ｔｈｅ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｐＨ　ｖａｌｕｅ　ｗａｓ　ａｒｏｕｎｄ　５．０；ｔｈｅ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｃａｒｂｏｎ　ｓｏｕｒｃｅ　ｗａｓ　ｌａｃｔｏｓｅ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｒｏｓａ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　Ｊａｃｑ；ｌｅａｆ　ｂｌｏｔｃｈ；ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ；Ｐｅｓｔａｌｏｔｉｏｐｓｉｓ　ｃｌａｖｉｓｐｏｒａ
（Ａｒｔｈ．）Ｓｔｅｙ．
９２１
·贮藏保鲜加工· 北方园艺２０１５（１４）：１２９～１３２
引起了国内外学者的广泛重视，研究进展较快［３－６］。对
黄酮类物质的分离提取方法和抗氧化、抗癌及抗菌等作
用的研究日渐增多［７－８］。
为充分利用废弃资源，更好地开发利用苹果叶中的
黄酮类物质，试验拟对苹果叶黄酮类化合物的提取工艺
进行优化，确定其最佳工艺条件，并对苹果叶总黄酮进
行含量测定。
１　材料与方法
１．１　试验材料
苹果叶２０１２年１０月采自新疆伊宁县阿热吾斯
坦乡，并被新疆伊犁师范学院专家检定为蔷薇科
（Ｒｏｓａｃｅａｅ）苹果属（Ｍａｌｕｓ　ｐｕｍｉｌａ　Ｍｉｌ．）“红元帅”苹果
的干燥叶子。
芦丁（生化试剂，国药集团化学试剂有限公司，批号
为２０１２０１２２）；９５％乙醇（Ａ．Ｒ．，天津市大茂化学试剂
厂）；无水乙醇 （Ａ．Ｒ．，天津市大茂化学试剂厂）；甲醇
（Ａ．Ｒ．，天津市大茂化学试剂厂）；氢氧化钠（Ａ．Ｒ．，天津
市大茂化学试剂厂）；硝酸铝（Ａ．Ｒ．，天津市大茂化学试
剂厂）；亚硝酸钠（Ａ．Ｒ．，天津市大茂化学试剂厂）。
ＤＦ－１０１Ｓ蒸热式磁力加热搅拌器 （金坛市医疗仪器
厂）；ＫＱ－２５０ＤＥ超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公
司）；ＦＡ－Ｎ／ＪＡ－Ｎ系列电子天平（上海民桥精密科学仪器
有限公司）；ＰＣ－７２３可见分光光度计（北京普析通用仪器
有限责任公司）；ＱＥ－１０Ａ型５００ｇ装高速中药粉碎机；
ＳＨＺ?Ⅲ循环水真空泵（上海亚荣生化仪器厂）。
１．２　试验方法
黄酮类化合物提取的影响因素众多，根据相关文
献［９－１１］，分别对溶剂、乙醇浓度、料液比、温度和时间进行
了分析。
１．２．１　溶剂对总黄酮提取率的影响　准确称取苹果叶
粉末５份（每份２．８ｇ），提取条件为：料液比１∶２０ｇ／ｍＬ、
提取温度７０℃、超声波强度１００％，分别用９５％乙醇、无
水乙醇和甲醇等超声提取３０ｍｉｎ，采用可见光分光光度
法在５１０ｎｍ波长处测定提取液吸光度，比较不同溶剂
对黄酮类化合物提取率的影响。
１．２．２　乙醇的不同浓度对总黄酮提取率的影响　准确
称取苹果叶粉末５份，在料液比１∶２０ｇ／ｍＬ、提取温度
７０℃、超声波强度为１００％的条件下，分别用５０％、６０％、
７０％、８０％、９０％的乙醇等超声提取３０ｍｉｎ，比较乙醇浓
度对黄酮类化合物提取率的影响。
１．２．３　料液比对总黄酮提取率的影响　准确称取苹果
叶粉末５份，在提取温度７０℃、超声波强度为１００％的条
件下，用６０％乙醇分别在料液比１∶１０、１∶２０、１∶３０、
１∶４０、１∶５０ｇ／ｍＬ对样品进行超声波提取３０ｍｉｎ，比较
不同料液比对黄酮类化合物提取率的影响。
１．２．４　温度对总黄酮提取率的影响　准确称取苹果叶
粉末５份，在超声波强度为１００％、乙醇浓度为６０％、料
液比１∶２０ｇ／ｍＬ的条件下，分别对样品在４０、５０、６０、
７０、８０℃进行超声波提取３０ｍｉｎ，比较不同温度对黄酮类
化合物提取率的影响。
１．２．５　时间对总黄酮提取率的影响　准确称取苹果叶
粉末５份，在超声波强度为１００％、乙醇浓度为６０％、料
液比１∶２０ｇ／ｍＬ、提取温度７０℃的条件下，对样品分别
进行超声波提取１０、１５、２０、２５、３０、３５ｍｉｎ，比较提取时间
对黄酮类化合物提取率的影响。
１．３　项目测定
通过检测芦丁的含量检测苹果叶中总黄酮的含
量［１２］。对照品溶液的配制：精确称取芦丁对照品１０ｍｇ，
置于小烧杯中，用体积分数７０％的乙醇溶解并定量转移
至５０ｍＬ容量瓶中定容，摇匀，即得浓度为０．２０ｍｇ／ｍＬ
的芦丁标准溶液。供试品溶液的制备：称取干燥至粉碎
的苹果叶２．０ｇ，置于１００ｍＬ带塞锥形瓶中，按试验最
佳提取条件进行超声提取，提取液减压抽滤，取其滤液。
将滤液定量转移至５０ｍＬ容量瓶中，加相同浓度的乙醇
定容至刻度，摇匀、备用。测定波长的选择：精密量取芦
丁标准品溶液１．５ｍＬ，置于１０ｍＬ容量瓶中，加入体积
分数７０％乙醇至５ｍＬ。加５％亚硝酸钠溶液０．３０ｍＬ，
摇匀，放置６ｍｉｎ；再加入１０％硝酸铝溶液０．３０ｍＬ，摇
匀，放置６ｍｉｎ；加入１．０ｍｏｌ／Ｌ的氢氧化钠溶液４．００ｍＬ，
加水至刻度，摇匀，放置１５ｍｉｎ。以不加芦丁对照品溶液
作为空白。采用ＰＣ－７２３可见分光光度计在４４０～５６０ｎｍ
波长范围内测定吸光度。标准曲线：精密量取芦丁标准
溶液０．００、１．００、２．００、３．００、４．００、５．００、６．００ｍＬ分别置
于２５ｍＬ容量瓶中，各加入体积分数７０％乙醇至１０ｍＬ，
加５％亚硝酸钠溶液１．００ｍＬ，摇匀、放置６ｍｉｎ；加
１０％硝酸铝溶液１．００ｍＬ，摇匀、放置６ｍｉｎ；加４％氢
氧化钠溶液１０．００ｍＬ，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀、放置
１５ｍｉｎ。配成浓度０．００４、０．００８、０．０１２、０．０１６、０．０２０、
０．０２４ｍｇ／ｍＬ溶液，以不加芦丁对照品溶液为空白，采用
可见分光光度法在５１０ｎｍ波长处测定吸光度。
苹果叶中总黄酮含量测定［１３］：准确吸取供试品溶液
１．５ｍＬ置于２５ｍＬ容量瓶中，加入体积分数７０％乙醇
至１０ｍＬ，加５％亚硝酸钠溶液１．００ｍＬ，摇匀、放置６ｍｉｎ；
加１０％硝酸铝溶液１．００ｍＬ，摇匀、放置６ｍｉｎ；加４％氢
氧化钠溶液１０．００ｍＬ，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀、放置
１５ｍｉｎ，采用ＰＣ－７２３可见分光光度计于５１０ｎｍ处测定
供试品溶液吸光度。以芦丁的标准曲线，总黄酮含量测
定：总黄酮含量＝Ａ／Ｍ×１００×稀释倍数。式中：Ａ为标
准曲线中的含量（ｍｇ）；Ｍ为样品的质量（ｇ）。
１．４　数据分析
试验数据采用Ｅｘｃｅｌ软件进行处理和分析。
０３１
北方园艺２０１５（１４）：１２９～１３２ ·贮藏保鲜加工·
２　结果与分析
２．１　苹果叶总黄酮的提取工艺优化
２．１．１　溶剂对总黄酮提取率的影响　由图１可以看出，
９５％乙醇作为溶剂所得黄酮提取量最高，因此超声波提
取的最适溶剂为９５％乙醇。
图１　溶剂对总黄酮提取率的影响
Ｆｉｇ．１　Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｓｏｌｖｅｎｔｓ　ｏｎ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｉｏ
２．１．２　乙醇的不同浓度对总黄酮提取率的影响　由图
２可以看出，乙醇浓度为６０％时所得黄酮提取量为最高，
因此超声波提取的最适乙醇浓度为６０％。
图２　乙醇的不同浓度对总黄酮提取率的影响
Ｆｉｇ．２　Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｎ
ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｉｏ
２．１．３　料液比对总黄酮提取率的影响　由图３可以看
出，随料液比的增大，黄酮提取效果随之降低，在料液比
１∶２０ｇ／ｍＬ的条件下所得黄酮类物质的提取效果
最好。
图３　料液比对总黄酮提取率的影响
Ｆｉｇ．３　Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｓｏｌｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ　ｒａｔｉｏ　ｏｎ
ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｉｏ
２．１．４　温度对总黄酮提取率的影响　由图４可以看出，
随着提取温度的升高，苹果叶总黄酮提取效果呈上升趋
势，提取温度在７０℃的条件下所得黄酮类物质的提取量
为最高，所以提取温度以７０℃为最佳。
图４　温度对总黄酮提取率的影响
Ｆｉｇ．４　Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｎ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｉｏ
２．１．５　时间对总黄酮提取率的影响　由图５可以看出，
随超声波处理时间延长，苹果叶总黄酮提取效果呈上升
趋势，提取时间在３０ｍｉｎ的条件下所得黄酮类物质的提
取量为最高，所以提取时间以３０ｍｉｎ为最佳。通过单因
素试验表明，超声波对提取黄酮类化合物效果的影响
大小依次为不同的溶剂、乙醇浓度、料液比、温度、时
间。最佳条件是乙醇作为溶剂，乙醇浓度为６０％，料液
比１∶２０ｇ／ｍＬ，提取温度为７０℃，提取时间为３０ｍｉｎ。
图５　时间对总黄酮提取率的影响
Ｆｉｇ．５　Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ｏｎ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｉｏ
２．２　苹果叶中总黄酮含量测定
２．２．１　最大吸收波长的确定　由图６可知，芦丁标准溶
液吸收波长增大至５１０ｎｍ时吸光度最大，随着波长继续
增大，吸光度又开始降低。说明芦丁标准溶液在５１０ｎｍ
波长处有固定且很强的吸收峰。因此，选择波长５１０ｎｍ
为最大吸收波长。
２．２．２　芦丁标准曲线的绘制　由图７芦丁标准溶液的
浓度与吸光度进行线性回归可知，其回归方程为Ｙ＝
２４．８２１　４３Ｘ－０．０３１，Ｒ２＝０．９９９　４５（ｎ＝６），结果表明，芦
丁标准品的质量在４～２４μｇ范围内与吸光度呈良好的
线性关系。
２．２．３　苹果叶中总黄酮含量测定结果　通过对提取条
件的摸索，选择最优方法分别对３个不同批次的苹果叶
总黄酮含量进行测定，由表１可知，苹果叶中总黄酮的
含量约为３０．２８ｍｇ／ｇ，且不同批次间的差异不显著。
１３１
·贮藏保鲜加工· 北方园艺２０１５（１４）：１２９～１３２
图６　芦丁标准溶液的吸收光谱
Ｆｉｇ．６　Ｔｈｅ　ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ　ｏｆ　ｒｕｔｉｎ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｓｏｌｖｅｎｔ
图７　芦丁标准溶液的吸收曲线
Ｆｉｇ．７　Ｔｈｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｃｕｒｖｅ　ｏｆ　ｒｕｔｉｎ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ
表１ 苹果叶中总黄酮含量测定
　　Ｔａｂｌｅ　１ Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅ　ｉｎ　ａｐｐｌｅ　ｌｅａｖｅｓ
批次Ｂａｔｃｈｅｓ　 １　 ２　 ３
均值
Ｍｅａｎ
吸光度 Ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ　 ０．４２１　 ０．４１９　 ０．４２　 ０．４２
总黄酮含量Ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ／（ｍｇ·ｇ－１） ３０．３５　 ３０．２１　 ３０．２８　 ３０．２８
３　结论
通过单因素试验表明，超声波对提取黄酮类化合物
效果的影响大小依次为不同的溶剂、乙醇浓度、料液比、
　　　　
温度、时间。最佳条件是乙醇作为溶剂，乙醇浓度为
６０％，料液比１∶２０ｇ／ｍＬ，提取温度为７０℃，提取时间为
３０ｍｉｎ。
采用可见分光光度法，按单因素最佳条件下测定苹
果叶中总黄酮含量平均值为３０．２８ｍｇ／ｇ，超声波技术应
用于苹果叶中黄酮类化合物的提取可行的。此法具有
仪器方便、操作简单、快速、溶剂用量小、成本低、无毒害、
准确等优点，为提高了苹果叶的利用价值及进一步开发
利用可提供参考依据。
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Ｋｏｒｂａｎｊｈｏｎ·ＢＲＡＤ１，ＷＡＮＧ　Ｍｅｎｇ２，ＺＨＡＮＧ　Ｘｉａｏｙｉｎｇ１，２
（１．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｙｉｌｉ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙｉｎｉｎｇ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ　８３５０００；２．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ
Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ，Ｓｈａａｎｘｉ　７１２１００）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ　ｄｒｙ　ａｐｐｌｅ　ｌｅａｆ　ｏｆ‘Ｒｅｄ　ｄｅｌｉｃｉｏｕｓ’ａｓ　ｔｅｓｔ　ｍａｔｅｒｉａｌ，ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ａｐｐｌｅ　ｌｅａｖｅｓ
ｗａｓ　ｅｘｐｌｏｒｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｓｉｎｇｌｅ　ｆａｃｔｏｒ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．Ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｗｅｒｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｖｉｓｉｂｌｅ
ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ，ｔｏ　ｓｕｐｐｌｙ　ａｎ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ　ｍｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｃａｌ　ｂａｓｉｓ　ｆｏｒ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ａｐｐｌｅ　ｌｅａｖｅ．
Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ａｐｐｌｅ　ｌｅａｖｅｓ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｗｅｒｅ　ｄｉｌｕｔｅｄ　ｉｎ　６０％ｅｔｈａｎｏｌ　ｂｙ　ｔｈｅ
ｒａｔｉｏ　ｏｆ　１∶２０ｇ／ｍＬ，７０℃ｆｏｒ　３０ｍｉｎｕｔｅｓ．Ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅ　ａｂｏｖｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｉｎ　ａｐｐｌｅ　ｌｅａｖｅｓ　ｗａｓ
ｍｅａｓｕｒｅｄ　ａｎｄ　ｔｏｏｋ　ｒｕｔｉｎ　ａｓ　ｓｔａｎｄａｒｄ．Ｔｈｅ　ｌｉｎｅａｒ　ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｗａｓ　ｇｏｏｄ　ｗｉｔｈｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　４－２４μｇ　ｏｆ　ｒｕｔｉｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ
ｅｑｕａｔｉｏｎ　ｗａｓ　Ｙ＝２４．８２１　４３Ｘ－０．０３１，Ｒ２＝０．９９９　４５（ｎ＝６）．Ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　ｉｎ　ａｐｐｌｅ　ｌｅａｖｅｓ　ｗａｓ　３０．２８ｍｇ／ｇ　ａｔ
ａｖｅｒａｇｅ．Ａｎｄ　ｈａｄ　ｓｅｔ　ｕｐ　ａｎ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒ　ａｐｐｌｅ　ｌｅａｖｅ．Ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ，
ｒａｐｉｄ，ａｃｃｕｒａｔｅ，ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ，ｓｔａｂｌｅ　ａｎｄ　ｇｏｏｄ　ｒｅｐｅａｔａｂｌｅ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ａｐｐｌｅ　ｌｅａｖｅｓ；ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ；ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ
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