全 文 ：收稿日期:2013-08-05
基金项目:四川省科技厅第三批应用技术研究与开发项目(2009SZ005);四川省教育厅青年基金项目(2006B035)
作者简介:李琪(1983-)，女，实验师，研究方向:天然产物化学;Tel:13438317397，E-mail:liqi-99@ 163. com。
* 通讯作者:张宏，Tel:18008021106，E-mail:zhanghong651@ aliyun. com。
枇杷花药材 HPLC指纹图谱研究
李 琪1，2，李慧敏1，杨必坤1，张 宏1，2* ，刘 刚1，2
(四川师范大学 1. 生命科学学院;2. 植物资源应用与开发研究所，四川 成都 610068)
摘要 目的:建立枇杷花药材 HPLC 指纹图谱分析方法。方法:采用 Alltech Apollo C18(250 mm × 4. 6 mm，5
μm)色谱柱，流动相为甲醇-0. 1%冰醋酸溶液梯度洗脱，流速:0. 5 mL /min，检测波长:210 nm，柱温:20 ℃，以熊果
酸为参照物，对 13 批不同产地枇杷花药材进行指纹图谱分析。结果:建立了枇杷花药材的 HPLC指纹图谱，标定出
共有峰 17 个，并用对照品指认了 2 个峰，13 批不同产地枇杷花相似度存在差异。结论:根据该色谱条件构建的
HPLC 指纹图谱为枇杷花药材质量评价提供了科学依据。
关键词 枇杷花;HPLC指纹图谱;相似度分析
中图分类号:Ｒ282. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2014)02-0224-04
Study on HPLC Fingerprint of Eriobotrya japonica Flower
LI Qi1，2，LI Hui-min1，YANG Bi-kun1，ZHANG Hong1，2，LIU Gang1，2
(1. College of Life Sciences;2. Institute of Phytochemistry，Sichuan Normal University，Chengdu 610068，China)
Abstract Objective:To establish an HPLC fingerprint of Eriobotrya japonica flower. Methods:13 batches of Eriobotrya japonica
flowers from different habitats were analyzed by HPLC with ursolic acid as reference substance. The chromatographic condition was per-
formed on Alltech Apollo C18 column(250 mm ×4. 6 mm，5 μm)，eluted with mobile phase containing methanol and 0. 1% glacial ace-
tic acid in gradient mode. The flow rate was 0. 5 mL /min and the detection wavelength was set at 210 nm. The temperature of column
was 20 ℃ ． Ｒesult:The HPLC fingerprint of Eriobotrya japonica flower had been established. There were 17 common peaks，two of which
were identified by reference substances. 13 batches of sample from different habitats can be distinguished from their
fingerprints. Conclusion:This method is reasonable and reliable，which can be used for quality evaluation of Eriobotrya japonica flower.
Key words Eriobotrya japonica L. flower;HPLC fingerprint;Similarity evaluation
枇杷花，别名土冬花，系蔷薇科植物枇杷 Erio-
botrya japonica (Thunb. )Lindl. 的干燥花蕾及花序，
收载于 2010 年版《四川省中药材标准》〔1〕。秋、冬
季采收，晒干、阴干或低温干燥。枇杷花味淡，性平，
归肺经，具有疏风止咳、通鼻窍的功效，主治感冒咳
嗽、鼻塞流涕、虚劳久咳、痰中带血〔2〕。我国是世界
上最主要的枇杷生产国，产量在 38. 79 万吨左右，占
世界的 2 /3 以上〔3〕。主要分布于四川，湖南、湖北、
浙江、福建、重庆等地亦产。枇杷花主要含有三萜
类、黄酮类化合物，并含挥发性成分〔4〕。本课题组
研究认为提取物中的三萜类化合物是止咳的主要活
性成分〔5〕，且测定的不同产地枇杷花中有效成分含
量差异较大〔6〕，并且由于资源分布广泛，地理、气候
等因素的变化都可能对枇杷花药材的质量产生影
响。因此本文在已有的研究基础上利用高效液相色
谱法对 13 批不同产地枇杷花药材进行考察，以熊果
酸为参照物，建立枇杷花药材的 HPLC指纹图谱，以期
为枇杷花药材的质量评价和研究开发提供参考依据。
1 材料与仪器
1. 1 材料 枇杷花药材样品由本课题组在全国 13
地采集，经四川师范大学马丹炜教授鉴定，均为蔷薇
科植物枇杷 Eriobotrya japonica (Thunb. )Lindl. 的干
燥花。样品粉碎过 24 目筛，冷藏保存。药材来源见
表 1。
表 1 枇杷花药材样品来源信息
样品
编号 采集地 采集时间
样品
编号 采集地 采集时间
S1 四川自贡 2008. 09 S8 四川仁寿文宫 2008. 10
S2 福建莆田 2007. 11 S9 四川蒲江 2008. 10
S3 湖北黄石 2007. 10 S10 四川遂宁 2007. 10
S4 湖南岳阳 2007. 10 S11 浙江杭州 2007. 10
S5 四川龙泉 2008. 10 S12 浙江余杭 2007. 10
S6 四川内江 2008. 10 S13 重庆壁山 2008. 10
S7 四川攀枝花 2007. 09
1. 2 仪器与试剂 DIONEX-Summit P680A DGP-6
型双三元高效液相色谱仪(美国戴安公司);Syncore
Analyst Ｒ-12 多功能平行浓缩仪(瑞士 BUCHI 公
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司)，Millipore 超纯水器(美国 MILIPOＲE 公司)，
BP211D 型电子天平(德国赛多利斯科学仪器北京
有限公司)，ESJ120-4 电子天平(沈阳龙腾电子有限
公司)。熊果酸(批号:110742-200516)、齐墩果酸
(批号:110709-200304)对照品购自中国食品药品检
定研究院。冰醋酸为分析纯，由成都科龙化工试剂厂
生产;色谱用试剂为色谱纯，由美国 Tedia公司生产。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱:Alltech Apollo C18(250
mm ×4. 6 mm，5 μm);流动相:甲醇-0. 1%冰醋酸溶
液，梯度洗脱程序:0 ～ 5 min(25∶ 75)，5 ～ 30 min(25
∶ 75 ～ 75∶ 25)，30 ～ 40 min(75∶ 25)，41 ～ 55 min(94
∶ 6)，55 ～ 65 min(94 ∶ 6 ～ 100 ∶ 0)，65 ～ 80 min
(100∶ 0)。流速:0. 5 mL /min;柱温:20 ℃;检测波
长:210 nm;进样量:20 μL。
2. 2 溶液的制备
2. 2. 1 对照品溶液的制备:精密称取熊果酸及齐
墩果酸对照品，用色谱纯甲醇超声溶解，分别配制成
浓度为 100. 0、20. 0 mg /L的对照品溶液。
2. 2. 2 供试品溶液的制备:取过 24 目筛的枇杷花
药材样品粉末 1 g，精密称定，置 100 mL具塞锥形瓶
中，加入甲醇 30 mL，超声(100 W，40 kHz)提取 30
min，温度 50 ℃，提取液过滤、浓缩，并用甲醇定容于
10 mL量瓶中，过 0. 45 μm微孔滤膜，取续滤液作为
供试品溶液。
2. 3 方法学考察
2. 3. 1 精密度试验:取枇杷花药材样品同一供试
品溶液按“2. 1”项下色谱条件下连续进样 6 次，记
录指纹图谱。检测结果表明，各共有色谱峰保留时
间 ＲSD 均小于 0. 1%，除 5 号(ＲSD = 4. 39%)、10
号(ＲSD = 4. 21%)峰以外其他共有峰峰面积 ＲSD
均小于 3. 0%。表明仪器精密度良好，符合指纹图
谱要求。
2. 3. 2 稳定性试验:取枇杷花药材样品同一供试
品溶液，分别在 0、4、8、12、16、20、24 h按“2. 1”项下
色谱条件进样，考察各共有色谱峰的相对保留时间
及相对峰面积的一致性。检测结果表明，各共有色
谱峰保留时间 ＲSD均小于 0. 1%，13 个共有峰峰面
积 ＲSD小于 3. 0%，其他色谱峰 ＲSD 介于 3. 0% ～
5. 0%。表明供试品溶液在 24 h内稳定性良好。
2. 3. 3 重复性试验:精密称取同一枇杷花药材样品
5份，按“2. 2. 2”项下方法制备供试品溶液，进行测
定。检测结果表明，各共有色谱峰保留时间及峰面积
ＲSD分别小于 0. 1%和 5. 0%。表明方法重现性良好。
2. 4 HPLC指纹图谱的建立
2. 4. 1 样品测定:按“2. 2. 2”项下方法分别制备 13
批枇杷花药材样品的供试品溶液，按“2. 1”项下色
谱条件进样检测，记录 HPLC图谱，见图 1。
采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”
(2004 A版)对 13 批枇杷花药材 HPLC 指纹图谱进
行分析。确定共有指纹峰 17 个，占总峰面积
61. 72% ～72. 58%，其中 3 号峰和 7 号峰较大，单峰
面积与总峰面积平均比值分别为 14. 09% 和
18. 53%。通过与对照品图谱比较，指认 15 号峰为
齐墩果酸，16 号峰为熊果酸。以熊果酸为参照峰
(S)，计算共有峰相对保留时间和相对峰面积。
图 1 13 批不同产地枇杷花药材样品 HPLC指纹图谱
2. 4. 2 指纹图谱的相似度分析:通过相似度计算
(见表 2)，所测的 13 批不同产地枇杷花的差异较
大，相似度范围较宽，因此部分产地的药材不适合作
为模式指纹图谱建立的原料。只有采自福建莆田、
湖北黄石、四川内江、四川攀枝花、四川仁寿文宫、浙
江杭州、浙江余杭的样品相似度(以共有峰为测度)
均大于 0. 9。
表 2 13 批不同产地枇杷花药材 HPLC
指纹图谱相似度计算结果
药材来源
测度
相关系数1 夹角余弦1 相关系数2 夹角余弦2
四川自贡 0. 846 0. 868 0. 888 0. 893
福建莆田 0. 905 0. 913 0. 903 0. 909
湖北黄石 0. 979 0. 985 0. 917 0. 925
湖南岳阳 0. 872 0. 904 0. 845 0. 861
四川龙泉 0. 532 0. 696 0. 776 0. 802
四川内江 0. 907 0. 921 0. 866 0. 882
四川攀枝花 0. 932 0. 941 0. 884 0. 894
四川仁寿文宫 0. 915 0. 926 0. 924 0. 931
四川蒲江 0. 523 0. 682 0. 635 0. 677
四川遂宁 0. 738 0. 808 0. 813 0. 831
浙江杭州 0. 996 0. 997 0. 906 0. 914
浙江余杭 0. 953 0. 967 0. 911 0. 920
重庆壁山 0. 685 0. 716 0. 700 0. 737
注:以 13 批样品峰面积均值为对照，1. 共有峰，2. 全谱图
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为了更直观地鉴别不同来源的枇杷花药材，以
共有峰峰号为横坐标，以相对峰面积为纵坐标，绘制
13 批枇杷花指纹条形码图，见图 2。从该条形码图
中较容易获得主要指标成分相对含量信息，从而快
捷地对样品来源做出判断。
图 2 13 批不同产地枇杷花药材条形码图
2. 4. 3 系统聚类分析:以共有峰相对峰面积为指
标，运用 SPSS 13. 0 软件对 13 批不同产地枇杷花药
材进行聚类分析，采用组间均联法(between-groups
linkage)，以余弦为测度进行聚类，聚类结果见图 3。
系统聚类结果与相似度分析、直观比较结果基本吻
合，13 批不同产地枇杷花被分为 3 个大类。
图 3 不同产地枇杷花药材系统聚类图
2. 4. 4 对照指纹图谱的建立及适用性考察:以相
似度大于 0. 9 的福建莆田、湖北黄石、四川内江等地
的 7 批枇杷花药材，采用均值法建立对照指纹图谱，
结果见图 4。并以此指纹图谱为对照，使用“中药色
谱指纹图谱相似度评价系统”(2004 B版)计算所采
集的 13 批不同产地枇杷花药材指纹图谱的相似度，
相似度结果见表 3，该对照指纹图谱的区分度比由
13 批枇杷花生成的对照图谱更好，这有利于药材的
鉴别。13 批枇杷花药材中有 7 批样品的相似度大
于 0. 90，有 2 批样品相似度仅为 0. 64 和 0. 69。
图 4 枇杷花药材对照指纹图谱(A)与混合
对照品(B)HPLC图(示共有峰)
15．齐墩果酸 16．熊果酸
3 讨论
本实验建立了 13 批不同产地枇杷花药材的
HPLC 指纹图谱。共标定出 17 个共有峰，为有效控
制枇杷花药材的质量提供了可靠的方法。并进行了
HPLC 的方法学考察，结果显示精密度、重复性、稳
定性良好，能有效地评价枇杷花药材的质量。在相
似度比较上，无论采用 Pearson 相关系数或夹角余
弦，共有指纹峰或全谱图计算枇杷花药材相似度的
结果均趋于一致，说明几种指纹图谱相似度评价方
法有较好的一致性，这为枇杷花药材 HPLC 指纹图
谱的研究提供了数据的可靠性。通过聚类分析得
出，在四川自贡和攀枝花采摘的枇杷花的指纹图谱
与四川其他地区的枇杷花差异较大，可能与这 2 个
地区的疏花时间早有关。而其余四川产地的枇杷花
指纹图谱也分为了 2 类，这可能与枇杷的品种差异
有关。因此，为保证枇杷花药材质量的稳定、可靠，
建议选择相近品种的枇杷在适宜的区域种植，并根
据当地的气候等环境条件选定适宜的采摘时间。
表 3 以对照指纹图谱为标准对 13 批不同产地枇杷花药材检验的相似度结果
产地 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13
相似度 0. 89 0. 91 0. 93 0. 86 0. 75 0. 91 0. 91 0. 92 0. 64 0. 79 0. 92 0. 93 0. 69
参 考 文 献
［1］四川省食品药品监督管理局 . 四川省中药材标准［S］．
成都:四川科学技术出版社，2011:377-381.
［2］国家中医药管理局《中华本草》编委会．中华本草［M］．
第四册．上海:上海科学技术出版社，1999:145．
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［3］《全国中草药汇编》编写组． 全国中草药汇编［M］． 北
京:人民卫生出版社，1996:504．
［4］张丽华，杨生婷，徐怀德，等．枇杷花香气成分固相微萃
取 GC-MS分析研究［J］．食品科技，2008，(3):108-110．
［5］王静波，杨必坤，张宏，等．枇杷花提取物止咳作用研究
［J］．中草药，2009，40(7):1106-1109．
［6］李琪，杨必坤，张晓瑜，等．枇杷花主要有效成分的研究
［J］．广西植物，2009，29(5):698-702．
草果与拟草果的性状与显微鉴别
罗晓霞
(广东省中医院，广东 广州 510120)
摘要 目的:比较草果和拟草果的性状和显微鉴别特征。方法:采用石蜡切片法和粉末制片法对草果和拟草
果果皮及种子的横切面与粉末进行研究。结果:拟草果和草果显微特征相似，果实性状特征有一定区别，可从果皮
颜色深浅、纵沟与纵棱的粗细与深浅以及种子的形状加以区分。结论:上述特征可作为草果与拟草果生药学鉴别
的依据。
关键词 草果;拟草果;性状鉴别;显微鉴别
中图分类号:Ｒ282. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2014)02-0227-03
收稿日期:2013-10-24
作者简介:罗晓霞(1978-)，女，主管药师，研究方向:中药鉴别与药房管理;E-mail:yuerluo@ qq. com。
Macroscopic and Microscopic Identification of Amomum tsao-ko and Amomum paratsao-ko Fruits
LUO Xiao-xia
(Guangdong Provincial Hospital of Chinese Medicine，Guangzhou 510120，China)
Abstract Objective:To compare macroscopic and microscopic characteristics of the fruits of Amomum tsao-ko and Amomum par-
atsao-ko. Methods:Transverse section and powder of pericarp and seeds of these two species were identified. Ｒesults:The fruits of Amo-
mum tsao-ko and Amomum paratsao-ko had similar microscopic characteristics. They could be distinguished from each other by the peri-
carp color，furrows and ribs，and the shape of seeds. Conclusion:Above characteristics can be used as basis of pharmacognostical study
of Amomum tsao-ko and Amomum paratsao-ko.
Key words Amomum tsao-ko Crevost et Lemarie;Amomum paratsao-ko S. Q. Tong et Y. M. Xia;Macroscopic identification;Mi-
croscopic identification
草果为姜科植物草果 Amomum tsao-ko Crevost
et Lemarie的干燥成熟果实〔1〕，是著名的药食两用中
药材，入药具有燥湿温中、截疟除痰的功效，也是传
统的常用辛香料，主产于广西、云南、贵州等省区。
笔者在中药房工作时，发现有个别批次的草果药材
性状特征与中国药典描述略有不同，但经薄层色谱
法鉴别却符合中国药典的要求。后经专家鉴定，这
几个批次的草果药材来源于姜科植物拟草果 Amo-
mum paratsao-ko S. Q. Tong et Y. M. Xia 的干燥成熟
果实。拟草果是童绍全等〔2〕于 1988 年将其从草果
中单列出来的新种。为了更好的鉴别草果与拟草
果，本实验对来源于草果和拟草果的药材进行了性
状与显微鉴别。
1 材料与方法
1. 1 材料 实验材料为本院中药房草果药材留
样，批号、产地与鉴定结果见表 1。所有样品经中国
科学院华南植物园吴德邻研究员鉴定为姜科植物草
果 Amomum tsao-ko Crevost et Lemarie或拟草果 Amo-
mum paratsao-ko S. Q. Tong et Y. M. Xia 的干燥成熟
果实。
表 1 草果药材的来源
样品编号 批号 产地 鉴定结果
1 121113701 广西 草果
2 121223801 云南 草果
3 130122621 云南 草果
4 130203531 云南 草果
5 130225401 广西 草果
6 130301331 云南 草果
7 130319201 广西 草果
8 130421441 广西 拟草果
9 130509221 广西 拟草果
10 130612611 云南 拟草果
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