全 文 ：大孔吸附树脂纯化花椒叶总黄酮的研究
杨立琛，李荣＊，姜子涛
（天津商业大学 生物技术与食品科学学院，天津市食品生物技术重点实验室，天津　３００１３４）
摘要：通过比较八种大孔吸附树脂的吸附和解吸性能，发现大孔吸附树脂Ｄ１０１对花椒叶黄酮的纯化效
果最佳。采用动态法对样品液吸附的流速、ｐＨ条件、解吸液乙醇浓度和解吸液流速进行了研究。同时
采用高效液相色谱法进行分析表征了分离纯化的效果。实验结果表明，大孔吸附树脂Ｄ１０１对花椒叶
总黄酮的最佳吸附解吸条件为：样品液ｐＨ 为４、吸附流速为２ＢＶ／ｈ、解吸液６０％乙醇，解吸流速
２ＢＶ／ｈ。经纯化后花椒叶黄酮纯度由２３．２％提高到了５６．４％。
关键词：花椒叶；黄酮；大孔吸附树脂；纯化
中图分类号：ＴＳ２０２．１　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１０００－９９７３（２０１２）０７－００３０－０６
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｂｙ　Ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ　Ｒｅｓｉｎ　ｏｆ　Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
ｆｒｏｍ　Ｚａｎｔｈｏｘｙｌｕｍ　ｂｕｎｇｅａｎｕｍＬｅａｖｅｓ
ＹＡＮＧ　Ｌｉ－ｃｈｅｎ，ＬＩ　Ｒｏｎｇ＊，ＪＩＡＮＧ　Ｚｉ－ｔａｏ
（Ｔｉａｎｊｉｎ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｆｏｏｄ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ａｎｄ
Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｔｉａｎｊｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｏｍｍｅｒｃｅ，Ｔｉａｎｊｉｎ　３００１３４，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｂｉｌｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ　ｒｅｓｉｎｓ　ｔｏ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍＺａｎｔｈｏｘｙｌｕｍｂｕｎｇｅａｎｕｍ
ｌｅａｖｅｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｏｔｈｅｒ　ｅｉｇｈｔ　ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｐａｐｅｒ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｗａｓ　ｆｏｕｎｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ　ｒｅｓｉｎ
Ｄ１０１ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ　ａｂｉｌｉｔｙ．Ｔｈｅ　ｆｌｏｗ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ，ｐＨ，ｔｈｅ　ｅ－
ｌｕｔｉｏｎ　ａｇｅｎｔ（ｅｔｈａｎｏｌ）ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｗａｓｈｉｎｇ　ｆｌｏｗ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｂｏｔｈ　ｄｙｎａｍｉｃ　ａｄ－
ｓｏｒｐｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｅｆｆｅｃｔ　ｗａｓ　ｅｓｔｉｍａｔｅｄ　ｂｙ　ＨＰＬＣ．Ａｓ　ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｓｈｏｗｓ
ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｄ１０１ｒｅｓｉｎ　ｆｏｒ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｒｅ　ａｓ　ｆｏｌｏｗ：ｓａｍｐｌｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ′ｓ　ｐＨ　ｖａｌｕｅ　ｉｓ　４，ａｄ－
ｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｆｌｏｗ　ｉｓ　２ＢＶ／ｈ，ｅｌｕｔｉｏｎ　ａｇｅｎｔ（ｅｔｈａｎｏｌ）ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　６０％，ａｎｄ　ｗａｓｈｉｎｇ　ｆｌｏｗ　２ＢＶ／ｈ．
Ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅ　ｐｒｏｐｏｓｅｄ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ　ｐｕｒｉｔｙ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍＺａｎｔｈｏｘｙｌｕｍ　ｂｕｎｇｅａｎｕｍｌｅａｖｅｓ　ｗａｓ　ｉｎ－
ｃｒｅａｓｅｄ　ｆｒｏｍ　２３．２％ｔｏ　５６．４％．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｚａｎｔｈｏｘｙｌｕｍ　ｂｕｎｇｅａｎｕｍｌｅａｖｅｓ；ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ　ｒｅｓｉｎ；ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ
　　花椒叶为芸香科花椒（Ｚａｎｔｈｏｘｙｌｕｍ　ｂｕｎｇｅａｎｕｍ）
的叶，《日华子本草》中记载，其性味辛，热，具有温中散
寒，燥湿健脾，杀虫解毒的功能，主要分布于四川、山
西、陕西、甘肃、河北、山东等地，花椒叶营养丰富，是我
国传统的调味香料和蔬菜［１，２］。
花椒属植物中富含黄酮，目前已从花椒果皮中分
离出１０余种黄酮类成分［３］，但花椒叶黄酮的研究应用
相对较少，范菁华等采用超声波辅助法提取了花椒叶
中黄酮类化合物并利用Ｄ４０２０树脂对其纯化，得到纯
度为１６．９２％的花椒叶黄酮［４，５］。现在已有的纯化黄
酮的方法很多，如铅盐沉淀法、柱层析法、萃取法等，而
大孔树脂吸附法是近些年发展起来的新方法，与其他
收稿日期：２０１２－０１－０９　　　　　　　　＊通讯作者
基金项目：天津市高校科技发展基金项目资助（２０１１０６０８）
作者简介：杨立琛（１９８９－），女，硕士研究生，研究方向为食品添加剂。
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试验研究　　２０１２年第７期
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方法相比，具有吸附速率快、吸附性能好、洗脱剂毒性
小、生产周期短、树脂再生方便等优点，已在环保、医药
领域得到了广泛的应用［６，７］。文章将探讨利用大孔吸
附树脂对花椒叶中黄酮类化合物进行纯化，从而为花
椒叶的综合利用提供理论依据。
１　材料与仪器
１．１　实验材料
花椒叶　采自山西运城，洗净后烘干备用；ＡＢ－８、
Ｄ１０１、Ｄ４０２０、ＮＫＡ－９、ＡＤＳ－７、ＡＤＳ－１７、ＡＤＳ－２１和Ｓ－８
八种大孔吸附树脂　南开大学化工厂；甲醇（色谱纯）
　天津市科密欧化学试剂有限公司；水（娃哈哈饮用纯
净水）　杭州娃哈哈集团有限公司出品；其余试剂均为
分析纯。
１．２　主要仪器
Ｕ－３９００紫外可见分光光度计 　 日本 Ｈｉｔａｃｈｉ
Ｈｉｇｈ－Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；ＫＱ　２２００Ｂ型超声波
清洗机　昆山市超声仪器有限公司；ＨＺＳ－Ｈ水浴振荡
器 哈尔滨市东联电子技术开发有限公司；ＭＡＳ－１微
波萃取仪 上海新仪微波化学科技有限公司；ＲＥ　５２－
８６Ａ型旋转蒸发仪 上海亚荣生化仪器厂；ＬＧＪ－１０冷
冻干燥机 北京松源华兴科技发展有限公司；高效液相
色谱仪 Ａｇｉｌｅｎｔ　１１００Ｓｅｒｉｅｓ；色谱柱：Ｚｏｒｂａｘ　ＳＢ－Ｃ１８
（２５０×４．６ｍｍ，５μｍ）。
２　实验方法
２．１　花椒叶黄酮储备液的制备
称取２０．０ｇ花椒叶粉末，以６０％乙醇溶液为溶
剂，放入特制的微波玻璃反应器中，在功率５００Ｗ 条
件下，按１∶３０的料液比在７０℃下用微波萃取仪萃取
４ｍｉｎ，提取液过滤，滤液经石油醚萃取３次，去掉石油
醚层，再于真空旋转蒸发仪中减压旋转蒸发，至花椒叶
粗提液中无乙醇，冷冻干燥，得到花椒叶粗黄酮的干燥
粉末。称取花椒叶粗黄酮干粉末０．５ｇ，用５ｍＬ无水
乙醇溶解，并用蒸馏水定容至２５０ｍＬ容量瓶中，即得
花椒叶粗黄酮储备液（浓度为２．０ｍｇ／ｍＬ），为样品液
备用。
２．２　大孔吸附树脂的筛选
２．２．１　树脂预处理［８］
将大孔吸附树脂于９５％乙醇中浸泡２４ｈ，用蒸馏
水洗至无乙醇，然后用５％ＨＣｌ溶液浸泡３ｈ，用蒸馏
水洗至流出液ｐＨ 值为中性，之后用５％ＮａＯＨ 溶液
浸泡３ｈ，用蒸馏水洗至流出液ｐＨ 值为中性，最后用
蒸馏水浸泡备用。
２．２．２　树脂的静态吸附与解吸
准确称取经预处理的八种大孔树脂各１．０ｇ于
５０ｍＬ具塞三角瓶中，加入经稀释后的样品液（浓度为
１．０ｍｇ／ｍＬ）２０ｍＬ，室温下于水浴振荡器中振荡２４ｈ
（频率为１３０ｒ／ｍｉｎ），使之充分吸附，分别扫描经八种
大孔树脂吸附后上清液在２００～５００ｎｍ下的吸收曲
线并按公式（１）计算各树脂对花椒叶粗黄酮的吸附率。
取以上吸附有花椒叶粗黄酮的八种树脂各１．０ｇ，
分别加入６０％的乙醇２０ｍＬ，室温下于水浴振荡器中
振摇１２ｈ（频率为１３０ｒ／ｍｉｎ），分别扫描解吸液在２００
～５００ｎｍ下的吸收曲线并按公式（２）计算解吸率。
吸附率Ｅ＝Ａ０－ＡｅＡ０
×１００％。 （１）
解吸率Ｄ＝ ＡｄＡ０－Ａｅ
×１００％。 （２）
其中Ａ０ 为样品液在３２８ｎｍ的吸光度，Ａｅ 为吸
附后上清液在３２８ｎｍ的吸光度，Ａｄ 为解吸液在
３２８ｎｍ的吸光度。
２．２．３　静态吸附动力学曲线的测定
取浓度为１．０ｍｇ／ｍＬ的样品液４０ｍＬ加入装有
２．０ｇ　Ｄ１０１大孔吸附树脂的具塞锥形瓶中，放入水浴
振荡器中室温振荡，每隔１５ｍｉｎ测定一次上清液的吸
光度，以时间为横坐标，吸附量为纵坐标绘制Ｄ１０１大
孔树脂对样品液的静态吸附动力学曲线。
吸附量Ｑ（ｍｇ／ｇ）＝
（Ａ０－Ａｅ）×Ｃ０×Ｖ
Ａ０×Ｗ 　
。 （３）
其中：Ａ０ 为样品液在３２８ｎｍ的吸光度，Ａｅ 为吸
附后上清液在３２８ｎｍ 的吸光度，Ｃ０ 为样品液浓度
（ｍｇ／ｍＬ），Ｖ为样品液体积（ｍＬ），Ｗ 为树脂质量（ｇ）。
２．３　花椒叶黄酮的纯化－动态法
２．３．１　大孔树脂吸附流速的测定
准确称取按２．２．１方法预处理的 Ｄ１０１树脂
６．０ｇ，采用湿法装柱。将浓度为１．０ｍｇ／ｍＬ的样品
液分别以１．５，２，３ＢＶ／ｈ不同流速加入到树脂柱中，
间隔４ｍＬ收集黄酮流出液，测定其吸光度，以泄漏点
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出现最迟为宜。泄漏点指该处黄酮流出液的吸光度为
样品液吸光度的１／１０。
２．３．２　大孔树脂吸附的ｐＨ值测定
将浓度为１．０ｍｇ／ｍＬ的样品液以２ＢＶ／ｈ的流速
加入树脂柱中，间隔４ｍＬ收集黄酮流出液，测定其吸
光度，分别研究在ｐＨ为２，４，６，８时大孔树脂对样品
液的吸附效果。
２．３．３　花椒叶黄酮洗脱液乙醇浓度的测定
取浓度为１．０ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ 为４的样品液以
２ＢＶ／ｈ通过树脂柱，待吸附达到泄漏点后，用不同浓
度的乙醇溶液洗脱，流速为１ＢＶ／ｈ，收集不同浓度下
的洗脱液，扫描其在２００～５００ｎｍ下的吸收曲线。
２．３．４　花椒叶黄酮洗脱流速的测定
取浓度为１．０ ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ 为４的样品液以
２ＢＶ／ｈ通过树脂柱，待吸附达到泄漏点后，用６０％的
乙醇溶液洗脱，每隔相同体积收集洗脱液，测定其吸光
度，分别绘制在不同流速１，２，３ＢＶ／ｈ下的洗脱曲线。
２．４　ＨＰＬＣ检测纯化效果
按２．３方法，在最佳动态条件下纯化花椒叶粗黄
酮，将收集的洗脱液除去乙醇后，冷冻干燥得纯化后的
花椒叶黄酮粉末。用３０％甲醇溶解纯化后的花椒叶
黄酮并稀释至０．１ｍｇ／ｍＬ，ＨＰＬＣ 流动相为甲醇
（Ａ）、水 （Ｂ）和 ５％ 乙 酸 水 溶 液 （Ｃ），流 速 为
０．９ｍＬ／ｍｉｎ，进样量为１０μＬ，梯度洗脱条件为０～
８ｍｉｎ：３０％～３４％Ａ；８～１０ｍｉｎ：３４％～５０％Ａ；１０～
２２ｍｉｎ：５０％～７５％Ａ；２２～２５ｍｉｎ：７５％～８０％Ａ；２５
～３０ｍｉｎ：８０％～８０％Ａ；５％乙酸水溶液（Ｃ）一直保持
１０％。检测波长为３２８ｎｍ。
２．５　花椒叶黄酮纯度计算
分别称取０．１ｇ纯化前后的花椒叶黄酮粉末，用
３０％乙醇溶解并定容至１００ｍＬ，按谢宗波［９］的方法绘
制标准芦丁曲线，并对纯化前后的花椒叶黄酮溶液进
行显色反应，计算纯化前后花椒叶黄酮的纯度。
３　结果与讨论
３．１　大孔吸附树脂的筛选
３．１．１　树脂的静态吸附与解吸
根据方法２．２．２，扫描大孔吸附树脂吸附样品液
后上清液在２００～５００ｎｍ的吸收曲线，见图１。
图１　八种树脂吸附样品液后上清液的吸收曲线
Ｆｉｇ．１Ｔｈｅ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅ
ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ａｆｔｅｒ　８ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ　ｒｅｓｉｎ
　　１→８分别为 Ｓ－８、ＡＤＳ－７、ＡＤＳ－２１、Ｄ１０１、Ｄ４０２０、ＡＢ－８、
ＮＫＡ－９、ＡＤＳ－１７，９为样品液的紫外吸收曲线。
　　由图１可知，强极性树脂Ｓ－８、ＡＤＳ－７和极性树脂
ＡＤＳ－２１吸附能力最强，因为黄酮属于多羟基酚类化
合物，具有一定的极性和亲水性，又能生成氢键，与树
脂具有较强的作用力。非极性的Ｄ１０１树脂吸附能力
也较强，是由于其具有较大的比表面积，从而对黄酮分
子产生强的吸附。
根据方法２．２．２，得到６０％乙醇洗脱液在２００～
５００ｎｍ波长下的吸收曲线，结果见图２。
图２　八种大孔树脂乙醇洗脱液的吸收曲线
Ｆｉｇ．２Ｔｈｅ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅｓ　ｏｆ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｅｌｕｔｅ　ｏｆ　８ｋｉｎｄｓ
ｏｆ　ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ　ｒｅｓｉｎ
　　注：１→８分别为 Ｓ－８、ＡＤＳ－２１、ＡＤＳ－７、ＡＤＳ－１７、Ｄ４０２０、
ＮＫＡ－９、ＡＢ－８、Ｄ１０１。
　　由图２可知，在八种大孔吸附树脂中，Ｄ１０１大孔
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树脂的乙醇洗脱液的吸光度最高，说明在６０％乙醇条
件下，Ｄ１０１大孔树脂对其所吸附的花椒叶黄酮的保
持力最小，容易被洗脱剂洗脱下来。按公式（１）、
（２）计算各大孔树脂的吸附率与解吸率，结果见表
１。
表１　八种大孔树脂的吸附率与解吸率
Ｔａｂｌｅ　１Ｔｈｅ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｒａｔｉｏｓ
ｏｆ　８ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ　ｒｅｓｉｎｓ
种类 极性
比表面积
（ｍ２／ｇ）
平均孔径
（ｎｍ）
吸附率
（％）
解吸率
（％）
Ｄ１０１ 非极性 ６００～７００ － ７０．４　 ７１．１
Ｄ４０２０ 非极性 ５４０～５８０　１０～１０．５　 ６４．９　 ６３．８
ＡＢ－８ 非极性 ４５０～５３０　 １３～１４　 ６２．２　 ７０．８
ＡＤＳ－１７ 中极性 ９０～１５０　 ２５～３０　 ９２．５　 ３６．４
ＡＤＳ－２１ 极性 ８０～１００　 １５～２０　 ８３．４　 ２９．２
ＮＫＡ－９ 极性 １７０～２５０　１５．５～１６．５　 ６０．６　 ７６．１
ＡＤＳ－７ 强极性 ≥１００　 ２５～３０　 ９２．５　 ３６．４
Ｓ－８ 强极性 ３２０～４２０　 ２８～３０　 ９１．６　 ４．１
　　由表１可知，在相同的静态条件下，Ｄ１０１大孔树
脂具有较高的吸附率与解吸率。故综合图１、图２和
表１，选用Ｄ１０１型大孔树脂对花椒叶粗黄酮进行纯
化。
３．１．２　静态吸附动力学曲线
根据方法２．２．３，得到Ｄ１０１树脂吸附量与吸附时
间的关系，结果见图３。
图３　Ｄ１０１大孔树脂的静态吸附动力学曲线
Ｆｉｇ．３Ｋｉｎｅｔｉｃ　ｃｕｒｖｅ　ｏｆ　ｓｔａｔｉｃ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｄ１０１ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ　ｒｅｓｉｎ
　　由图３可知，在０～４５ｍｉｎ时间内，树脂的吸附量
随时间的增加快速增大，４５～９０ｍｉｎ内，树脂吸附速
度减慢，９０ｍｉｎ以后树脂吸附基本达到平衡，说明
Ｄ１０１树脂是快速吸附型树脂，平衡时其对样品液的吸
附量为２３．６ｍｇ／ｇ。
３．２　花椒叶黄酮的纯化－动态法
３．２．１　流速对大孔树脂吸附的影响
根据方法２．３．１，得到大孔树脂对样品液吸附效
果与流速的关系，结果见图４。
图４　不同流速对Ｄ１０１树脂吸附的影响
Ｆｉｇ．４Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｖｅｌｏｃｉｔｉｅｓ
ｏｎ　ｔｈｅ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｄ１０１ｒｅｓｉｎ
　　由图４可知，流速快慢直接影响到黄酮与大孔树
脂的作用时间，流速过大，树脂未能完全吸附从而使树
脂吸附能力下降，流速过小会导致时间延长，１．５，２，３
ＢＶ／ｈ不同流速的泄漏点分别出现在３０，３２ｍＬ和
２２ｍＬ，从树脂吸附能力和时间考虑，选择上样流速为
２ＢＶ／ｈ。
３．２．２　ｐＨ对大孔树脂吸附的影响
根据方法２．３．２，得到大孔树脂对样品液吸附效
果与ｐＨ的关系，结果见图５。
图５　不同ｐＨ对Ｄ１０１树脂吸附的影响
Ｆｉｇ．５Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐＨ　ｖａｌｕｅｓ
ｏｎ　ｔｈｅ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｄ１０１ｒｅｓｉｎ
　　由图５可知，样品液在酸性条件下吸附能力较强，
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ｐＨ为４比ｐＨ为２，６吸附强，这是由于酸性的增大，
花椒叶黄酮会与溶液中的氢离子结合形成亻羊盐［１０］，从
而不利于大孔树脂的吸附；当样品液呈碱性时，大孔树
脂对花椒叶黄酮的吸附能力小，很快发生泄漏。扫描
其吸收曲线（图６）发现，ｐＨ为２，４，６的吸收曲线基本
重合，ｐＨ为８的吸收曲线与其他ｐＨ下的样品液相比
发生了变化，是因为花椒叶黄酮的酚羟基与碱发生了
酸碱中和反应，黄酮以离子形式存在，所以不容易被大
孔树脂所吸附。综合考虑，选择样品液ｐＨ为４。
图６　不同ｐＨ样品液的吸收曲线
Ｆｉｇ．６Ｔｈｅ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅ
ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐＨ
３．２．３　乙醇浓度对花椒叶黄酮解吸的影响
根据方法２．３．３，得到不同浓度洗脱液的吸收曲
线，见图７。
图７　不同乙醇浓度洗脱液的吸收曲线
Ｆｉｇ．７Ｔｈｅ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅｓ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｅｌｕｔｅｓ
　　注：从下往上分别为５０％、６０％、７０％、８０％的乙醇洗脱液
和样品液。
　　由图７可知，随着乙醇浓度的增大，从Ｄ１０１大孔
树脂解吸出的花椒叶黄酮越多，但７０％和８０％浓度乙
醇溶液解吸出的物质在２２０～２８０ｎｍ下的紫外吸收
均高于样品液，且整体峰形也有变化，说明乙醇浓度越
大洗下的杂质就越多，故应选择６０％浓度的乙醇溶液
为解吸液。
３．２．４　流速对花椒叶黄酮解吸的影响
根据方法２．３．３，得到不同洗脱流速下的洗脱曲
线，见图８。
图８　不同流速下的解吸曲线
Ｆｉｇ．８Ｔｈｅ　ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅｓ
　　由图８可知，在２ＢＶ／ｈ流速下洗脱峰最高且峰
型集中，无拖尾现象，故选择最佳洗脱流速为２ＢＶ／ｈ。
在不同流速下，当洗脱液体积达到３ＢＶ时，花椒叶黄
酮都能完全解吸下来，故选择洗脱液体积为３ＢＶ。
３．３　ＨＰＬＣ结果分析
按２．４方法进行 ＨＰＬＣ分析，得到花椒叶黄酮经
Ｄ１０１大孔树脂纯化前后在３２８ｎｍ下的色谱，结果见
图９。
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图９　经Ｄ１０１大孔树脂纯化前（上图）后
（下图）３２８ｎｍ下花椒叶黄酮的 ＨＰＬＣ图
Ｆｉｇ．９ＨＰＬＣ　ｐｒｏｆｉｌｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｚａｎｔｈｏｘｙｌｕｍ
ｂｕｎｇｅａｎｕｍ　ｌｅａｖｅｓ　ｍｏｎｉｔｏｒｅｄ　ａｔ　３２８ｎｍ　ｂｅｆｏｒｅ（ｕｐ）ａｎｄ
ａｆｔｅｒ（ｄｏｗｎ）ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｂｙ　Ｄ１０１ｒｅｓｉｎ
　　由图９可知，相同浓度纯化后的花椒叶黄酮色谱
峰均比纯化前的响应值增大约２倍，且２５ｍｉｎ之后的
杂质峰已经没有，表明经过Ｄ１０１大孔树脂处理，花椒
叶黄酮中的杂质被除去一部分。
３．４　花椒叶黄酮纯度计算
按２．５方法得到芦丁标准曲线方程，溶液吸光度
与浓度的关系为Ａ＝１３．１９４Ｃ－０．００１２，Ｒ２＝０．９９８５，
计算得纯化前后花椒叶黄酮粉末的纯度由２３．２％提
高到了５６．４％，进一步证明Ｄ１０１大孔树脂纯化了花
椒叶黄酮。
４　结论
在选择的八种大孔树脂中，Ｄ１０１大孔树脂是比较
理想的树脂，其吸附速度快，吸附率大，解吸率高，通过
ＨＰＬＣ分析的结果得出：该方法可以除去花椒叶中部
分杂质，并纯化主要黄酮成分，使纯度可提高到
５６．４％，适用于花椒叶黄酮的纯化，为其进一步的成分
分析奠定了基础，同时也为以后花椒叶黄酮的研究与
应用提供了理论依据。
参考文献：
［１］史劲松，顾龚平，吴素玲，等．花椒资源与开发利用现状调
查［Ｊ］．中国野生植物资源，２００３，２２（５）：６－８．
［２］邓振义，孙丙寅，康克功，等．花椒嫩芽主要营养成分的分
析［Ｊ］．西北林学院学报，２００５，２０（１）：１７９－１８０．
［３］Ｘｉｏｎｇ　ＧＢ，Ｓｈｉ　ＤＷ，Ｍｉｚｕｏ　Ｍ．Ｆｌａｖｏｎｏｌ　ｇｌｕｃｏｓｉｄｅｓ　ｉｎ　ｐｅｒｉ－
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（上接第２９页）用量２５％，大曲价格５元／ｋｇ，即每吨主
料耗用大曲费用２５０×５＝１２５０元。
采用生物酶解工艺：每吨投料消耗大曲５％，即每
吨主料耗用大曲费用５０×５＝２５０元，每吨主料使用酶
和菌种后费用约为６０～７５元。即通过工艺改进，应用
菌种发酵和酶制剂，在达到大或等于原有出醋率前提
下，投料每吨节约成本１２５０－（２５０＋７５）＝１２０２～
１１９０元。５度醋出醋率１∶４计，每吨醋节约成本约
３００元，毎千吨食醋生产节约成本３０万元以上。
３　结论
通过应用α－淀粉酶、糖化酶加速淀粉水解速度，
及时补充糖分，添加活性干酵母的方法可以提高小米
醋酒精发酵阶段酒精发酵率，降低传统小米醋酿醋工
艺中大曲的使用量，从而降低生产成本。
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２０１２年第７期
总第３７卷
　　　　　　　　　　　　　　　中 国 调 味 品
ＣＨＩＮＡ　ＣＯＮＤＩＭＥＮＴ 试验研究