全 文 ：书DOI:10． 3969 /J． ISSN． 1007 － 6611． 2010． 07． 001
木疏胶囊抗大鼠肝纤维化机制研究
高 萍1， 邵泽勇2， 刘 春3， 程留芳4* (1 北京市解放军总医院肿瘤内科， 北京 100853; 2 雅安市人民医
院; 3 总参军训和兵种部后勤部卫生处; 4 北京市解放军医院消化科; * 通讯作者，E-mail:greenpla@ 163． com)
摘要: 目的 通过观察木疏胶囊对肝纤维化大鼠纤维化相关基因表达的影响，探讨木疏胶囊抗肝纤维化分子水平的作用机
制。 方法 Wistar大鼠随机分为正常对照组，模型对照组，木疏胶囊预防组和治疗组，鳖甲软肝片预防组和治疗组。40%
CCl4 油溶液诱导大鼠肝纤维化模型。HE染色和 Masson染色观察肝组织病理改变。RT-PCR法检测各组 TGF-β1，α-SMA，col-
Ⅰ，col-Ⅲ基因表达。 结果 40%CCl4 皮下注射诱导大鼠肝纤维化模型，病理观察证实造模成功。与模型对照组比较，各用
药组各指标 PCR产物均显著降低(P ＜ 0． 01) ，木疏胶囊预防组分别与鳖甲软肝片预防组和治疗组比较显示 TGF-β，α-SMA，
col-Ⅰ，col-Ⅲ基因表达的降低均有统计学差异(P ＜ 0． 01) ，木疏胶囊治疗组分别与鳖甲软肝片预防组和治疗组比较，TGF-β，α-
SMA，col-Ⅰ，col-Ⅲ基因表达的降低均有统计学差异(P ＜ 0． 05 或 P ＜ 0． 01)。 结论 木疏胶囊预防和治疗用药均可使肝纤
维化大鼠肝组织 TGF-β1、α-SMA、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ基因表达下降。
关键词: 木疏胶囊; 肝纤维化; TGF-β1; α-SMA; col-Ⅰ; col-Ⅲ; 基因表达
中图分类号: R575 文献标志码: A 文章编号: 1007 － 6611(2010)07 － 0579 － 06
Antifibrotic effect of Mushu capsule in rats with hepatic fibrosis and its mechanism
GAO Ping1，SHAO Ze-yong2，LIU Chun3，CHENG Liu-fang4* (1Dept of Oncology，General Hospital of Chinese PLA，Beijing 100853，
China;2Hospital of Ya’an City;3Healthcare Office of Logistics Division，Department of Military Training and Arms of Services，General
Staff of Chinese PLA;4Dept of Gastroenterology，General Hospital of Chinese PLA;* Corresponding author，E-mail:greenpla@ 163． com)
Abstract: Objective To investigate the antifibrotic effect of Mushu capsule in rats with hepatic fibrosis and its molecular mechanism．
Methods Wistar rats were randomly divided into 4 groups:normal control group，model group，Mushu capsule group(MC)and Biejia
Ruangan tablet group(BRT)． MC group and BRT group were subdivided into prevention group and treatment group． A hepatic fibrosis
model was induced by subcutaneous injection of 40% carbon tetrachloride(CCl4)． Liver sections were stained with HE and Masson re-
spectively for pathological observation． The gene expression of TGF-β1，α-SMA，col-Ⅰ，col-Ⅲ was detected by RT-PCR． Results
The gene expression levels of TGF-β1，α-SMA，col-Ⅰand col-Ⅲ in model group were higher than that in normal control group(P ＜
0． 01) ，and all the expression levels in MC group and BRT group were significantly lower than that in model group(P ＜ 0． 01)． Com-
pared with BRT prevention group and treatment group，the gene expression of TGF-β1，α-SMA，col-Ⅰand col-Ⅲ in MC prevention
group and treatment group decreased statistically(P ＜ 0． 01 or P ＜ 0． 05)． Conclusion Mushu capsule has an antifibrotic effect in
rats with liver fibrosis by decreasing the gene expression of TGF-β1，α-SMA，col-Ⅰ，col-Ⅲ．
Key words: Mushu capsule; hepatic fibrosis; TGF-β1; α-SMA; col-Ⅰ; col-Ⅲ; gene expression
肝纤维化是慢性肝病向肝硬化发展的必经之
路，近年已提出肝纤维化完全有可能发生逆转的观
点［1］。当归、黄芪、鳖甲是我国的传统中药，在临床
上有着广泛应用，本研究中的木疏胶囊是以当归、黄
芪、鳖甲为主要成分的中药复方制剂，在益气养血的
同时注重活血化瘀，根据辨证论治，兼顾扶正、补虚、
利湿等。前期实验已证实木疏胶囊能有效干预肝纤
维化及其部分机制［2］，由于肝纤维化的发生发展与
一些细胞因子密切相关，本研究在分子水平研究木
疏胶囊对实验性肝纤维化大鼠 TGF-β1，α-SMA，col-
Ⅰ，col-Ⅲ基因表达的调节作用，为其抗纤维化机制
提供进一步的证据。
1 材料和方法
1． 1 材料
1． 1． 1 实验动物 同系 Wistar 大鼠 60 只，雌雄各
半，体重(200 ± 20)g，清洁级，解放军总医院动物实
验中心提供。
1． 1． 2 药物 木疏胶囊主要成分为当归、黄芪、鳖
甲、大枣、黑豆等。由北京宝树堂科技药业有限公司
精制而成胶囊。鳖甲软肝片主要成分为鳖甲、三七、
基金项目: 国家自然科学基金资助项目(30600727)
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赤芍、冬虫夏草、连翘等。解放军 302 医院研制，内
蒙古福瑞制药厂生产。
1． 1． 3 主要试剂及仪器 四氯化碳(CCl4)分析纯
(北京化学试剂公司，批号 000925)。总 RNA 提取
试剂盒及 RNA逆转录试剂盒由 Promega 公司提供。
TGF-β mRNA引物、α-SMA mRNA 引物、col-Ⅰ mR-
NA引物、col-Ⅲ mRNA引物、GAPDH mRNA 引物由
北京鼎国生物技术发展中心合成。琼脂糖粉为美国
Sigma公司产品。1． 2%琼脂糖凝胶由琼脂粉 0． 36
g与 TAE电泳缓冲液(Tris 242 g，Na2EDTA·2H2O
37． 2 g，57． 1 ml 醋酸)30 ml 配制。DNA Marker 为
美国 Sigma 公司产品。PCR 仪:美国 Perkimn-Elmer
公司产品。恒压恒流 DF-D 电泳仪:上海仪表厂。
图像扫描仪:中国科学院北京空海电子技术公司。
1． 2 方法
1． 2． 1 试剂配制 人与大鼠药物剂量换算［3］，根
据本课题组前期实验研究成果［2］选用木疏胶囊中
剂量 3． 125 g /(kg·d) ，鳖甲软肝片 0． 625 g /(kg·
d)作为本实验中的用药。将 CCl4 分析纯 40 ml 溶
于橄榄油 60 ml 中，配制成 40%的 CCl4 油溶液 100
ml，常温保存备用。
1． 2． 2 动物模型与分组 Wistar 大鼠 60 只，雌雄
各半，随机分为正常对照组(n = 10) ，模型对照组
(n = 10) ，木疏胶囊预防组(n = 10) ，鳖甲软肝片预
防组(n = 10) ，木疏胶囊治疗组(n = 10) ，鳖甲软肝
片治疗组(n = 10)。造模各组于实验第 1 天皮下注
射 40% CCl40． 5 ml /100 g 体重，以后每 4 d 皮下注
射 40% CCl4 油溶液 0． 3 ml /100 g 体重，连续 8
周［4］。各组均用普通饲料喂养，自由饮水。造模同
时正常对照组及模型对照组蒸馏水 5 ml /d，分 2 次
灌胃，预防实验组造模同时木疏胶囊 3． 125 g /(kg·
d)或鳖甲软肝片 0． 625 g /(kg·d)溶于 5 ml 蒸馏水
后，分 2次灌胃，治疗 4 周。治疗实验组在造模结束
后木疏胶囊 3． 125 g /(kg·d)或鳖甲软肝片 0． 625 g /
(kg·d)溶于蒸馏水 5 ml后，分 2次灌胃，治疗 4 周。
1． 2． 3 标本采集 取肝左叶相同部位组织液氮快速
冷冻保存，用于 RT-PCR法检测。取肝右叶相同部位
组织固定于 10%中性甲醛溶液中，乙醇梯度脱水，二
甲苯透明、浸蜡包埋，4 － 7 μm 厚度连续切片用于
Hemtoxycin Eosin(HE) ，Masson 染色行组织学观察，
由资深病理医师阅片确定肝纤维化模型是否成功。
1． 2． 4 RT-PCR 法检测大鼠肝组织 TGF-β1，α-
SMA，col-Ⅰ，col-Ⅲ表达 提取总 RNA，在线设计
TGF-β1，α-SMA，col-Ⅰ，col-Ⅲ和内参照 GAPDH 的
DNA片段引物，送北京鼎国生物技术发展中心合成
引物。一步法基因扩增，DNA(1． 2%)琼脂糖凝胶
电泳，将记录下来的照片扫入计算机图像分析系统
(Image tool) ，计算各实验组 TGF-β1，α-SMA，col-Ⅰ，
col-Ⅲ的 DNA片段的灰度值比值表示各因子的基因
相对表达水平。合成引物序列见表 1。
表 1 TGF-β1，α-SMA，col-Ⅰ，col-Ⅲ引物序列
Tab 1 The primer sequence of TGF-β1，α-SMA，col-Ⅰand col-Ⅲ
指标 序 列 长度
TGF-β1 5＇－ CTTCAGCTCCACAGAGAAGAACTGC － 3＇
5＇－ CACGATCATGTTGGACAACTGCTC － 3＇
298 bp
α-SMA 5＇－ GGCGCCGCTGAACCCTAAG －3＇
5＇－ AGCAGTGGCCATCTCATTTTCAAA －3＇
370 bp
Col-Ⅰ 5＇－ GTCCCCCTGGCTCTGCTGGT － 3＇
5＇－ ATGTGCGGGCGGGGTTCTT － 3＇
351 bp
Col-Ⅲ 5＇－ CCTAAGGGCGAAGACGGCAAAGAT － 3＇
5＇－ CAGGAGGACCAGGGCGACCAC － 3＇
322 bp
GAPDH 5＇－ ACC ACA GTC CAT GCC ATC AC － 3＇
5＇－ TCC ACC ACC CTG TTG CTG TA － 3＇
516 bp
1． 2． 5 统计学分析 数据采用 SPSS13． 0 统计软件
包进行分析，结果以 珋x ± s 表示。数值变量资料采用
独立样本 t检验。P ＜0． 05为差异具有统计学意义。
2 结果
2． 1 一般状况 实验结束时，正常对照组大鼠均存
活良好。皮下注射 CCl4 第 4 周动物出现乏力、嗜
睡、皮毛皱而不洁、进食减少、尿黄，个别大鼠趾甲易
出血，鼻有出血。造模结束时模型对照组大鼠皮毛
松弛、杂乱、粗糙无光泽，活动及食欲少、营养状况欠
佳;木疏胶囊及鳖甲软肝片预防组及治疗组大鼠皮
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毛松弛、无光泽，营养状况一般。实验结束时模型对
照组大鼠死亡 1 只，鳖甲软肝片预防组死亡 1 只，木
疏胶囊预防组大鼠死亡 2 只，鳖甲软肝片治疗组死
亡 1 只，木疏胶囊治疗组大鼠无死亡。
2． 2 大鼠肝组织病理结果 肝组织病理切片 HE
和 Masson染色观察，正常对照组大鼠肝小叶结构完
整，肝索排列整齐，汇管区无纤维化(见图 1A，2A，
见第 663 页) ;模型对照组造模后，大鼠肝细胞浊
肿，肝小叶失去正常结构，汇管区扩大增宽，汇管区
胶原沉积，可见胶原纤维自中央静脉及汇管区向周
围延伸，形成较粗的纤维间隔，有的已经有假小叶形
成(见图 1B，2B，见第 663 页) ;木疏胶囊预防组及
鳖甲软肝片预防组肝小叶结构基本正常，肝细胞无
明显变性、坏死，肝索排列相对整齐，仅汇管区少量
胶原沉积，无明显纤维间隔形成(见图 1C，2C，1E，
2E，见第 663 页) ;木疏胶囊治疗组、鳖甲软肝片治
疗组部分肝小叶结构排列仍紊乱，肝细胞轻度脂肪
变性，汇管区有较多胶原纤维沉积(见图 1D，2D，
1F，2F，见第 663 页)。
2． 3 木疏胶囊对肝纤维化大鼠血清细胞因子基因
表达的影响 RT-PCR 产物经 1． 2%琼脂糖凝胶电
泳鉴定，TGF-β1 大小为 298 bp，α-SMA 大小为 370
bp，col-Ⅰ大小为 351 bp，col-Ⅲ大小为 322 bp，GAP-
DH大小为 516 bp，见图 3。
1． DNA Marker;2．正常对照组;3．模型对照组;4．木疏胶囊预防组;5．鳖甲软肝片预
防组;6．鳖甲软肝片治疗组;7．木疏胶囊治疗组
图 3 TGF-beta1、α-SMA、col-Ⅰ、Col-Ⅲ及 GAPDH电泳图
Fig 3 Expression of TGF-beta1，α-SMA，col-Ⅰ，col-Ⅲ and GAPDH
·185·山西医科大学学报 (J Shanxi Med Univ)2010 年 7 月，41 (7)
与正常对照组比较，模型对照组 TGF-β1、α-
SMA、col-Ⅰ，col-Ⅲ相对表达显著升高(P ＜ 0． 01，见
表 2)。各用药组与模型对照组比较，TGF-β1、α-
SMA、col-Ⅰ、col-Ⅲ相对表达明显降低(P ＜ 0． 01)。
与鳖甲软肝片预防组和治疗组比较，木疏胶囊预防
组 TGF-β，α-SMA，col-Ⅰ，col-Ⅲ基因相对表达降低，
且差异均有统计学意义(P ＜ 0． 01)。与鳖甲软肝片
预防组和治疗组比较，木疏胶囊治疗组 TGF-β，α-
SMA，col-Ⅰ，col-Ⅲ基因相对表达降低，且差异均有
统计学意义(P ＜ 0． 05 或 P ＜ 0． 01)。
表 2 各组 TGF-β1、α-SMA、col-Ⅰ、col-Ⅲ基因表达相对值 (珋x ± s)
Tab 2 Relative expression of TGF-β1，α-SMA，col-Ⅰand col-Ⅲ in 6 grups (珋x ± s)
组 别 n TGF-β1 α-SMA Col-Ⅰ Col-Ⅲ
正常对照组 10 0． 464 ± 0． 038 0． 335 ± 0． 040 0． 510 ± 0． 136 0． 280 ± 0． 014
模型对照组 9 1． 776 ± 0． 089△ 0． 957 ± 0． 047△ 1． 719 ± 0． 106△ 1． 116 ± 0． 056△
木疏胶囊预防组 8 0． 830 ± 0． 044▲＊# 0． 396 ± 0． 020▲＊# 0． 816 ± 0． 136▲＊# 0． 369 ± 0． 018▲＊#
鳖甲软肝预防组 9 1． 090 ± 0． 087▲ 0． 644 ± 0． 040▲ 0． 952 ± 0． 048▲ 0． 589 ± 0． 029▲
鳖甲软肝治疗组 9 1． 112 ± 0． 085▲ 0． 703 ± 0． 035▲ 1． 036 ± 0． 138▲ 0． 556 ± 0． 048▲
木疏胶囊治疗组 10 0． 878 ± 0． 045▲＊# 0． 508 ± 0． 053▲＊# 0． 733 ± 0． 139▲＊＊# 0． 446 ± 0． 043▲＊#
与正常对照组比，△P ＜ 0． 01;与模型对照组比，▲P ＜ 0． 01;与鳖甲软肝片预防组比，#P ＜ 0． 01;与鳖甲软肝片治疗组比，
＊＊P ＜ 0． 05，* P ＜ 0． 01
3 讨论
肝纤维化是是慢性肝病向肝硬化发展的必经之
路。近年来明确提出了肝纤维化完全有可能发生逆
转［1］。木疏胶囊在益气养血的同时，根据辨证论
治，注重活血化瘀，兼顾扶正、补虚、利湿等，前期实
验［2］已证实能有效干预大鼠肝纤维化及其部分机
制，本研究从基因水平进一步揭示其抗大鼠肝纤维
化的机制。
肝纤维化形成的本质是肝脏内细胞外基质(ex-
tra cellular matrix，ECM)形成和降解失衡，表现为
ECM大量沉积。其中，胶原是 ECM 的主要组成成
分，肝脏组织胶原主要有Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ型，以Ⅰ、
Ⅲ型为主。HSC(hepatic stellate cell)是Ⅰ，Ⅲ型胶
原的主要来源细胞，而且 HSC 表达 α-SMA 是细胞
由静止型转变为肌成纤维细胞并合成和释放多种
ECM的重要标志。TGF-β1 为现知最强力的肝纤维
化促进因子［5］，可直接刺激 HSC 对胶原、纤维连接
蛋白、蛋白多糖的合成及胶原基因的表达［6，7］。因
此，我们以 TGF-β1、α-SMA 和Ⅰ，Ⅲ型胶原 mRNA
的表达为主要观察指标进一步研究木疏胶囊抗肝纤
维化的机制。
在肝脏中含量最高，具有生物活性的是 TGF-
β1，肝实质细胞受损后释放的 TGF-β1 是启动邻近
静息态 HSC激活和转化的初始信号之一［8］。研究
发现肝纤维化时，TGF-β1 在储脂细胞中的表达量增
加 12 倍，在内皮细胞中表达量增加 6 倍［9］。TGF-
β1 引起细胞自分泌 TGF-β1 的正反馈机制，使得它
加强细胞合成胶原的作用更加明显，细胞外基质大
量产生使肝纤维化过程不断加重。TGF-β1 使明胶
酶增加而胶原酶减少，明胶酶促进 Disse 间隙Ⅳ型
胶原分解，Ⅰ型胶原则因胶原酶减少而增加，并取代
Ⅳ型胶原，使肝窦毛细血管化，加速了肝纤维化的发
展。本研究中发现肝纤维化大鼠肝组织 TGF-β1
mRNA的表达明显增加可能与此有关，且发现肝纤
维化大鼠肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原 mRNA 转录同时增
加，与相关文献报道一致［10］。
目前，国内外已有部分血清学 －组织学的对照
研究表明，外周血 TGF-β1 水平可反映慢性肝病肝
纤维化中组织炎症坏死及纤维化程度［11］。因此，外
周血 TGF-β1 水平的动态检测对早期肝纤维化的诊
断和基础研究具有重要作用。高春芳等［12］发现血
小板数量可以影响血清 TGF水平，而肝纤维化患者
可能伴有程度不等的脾脏肿大、脾功能亢进，从而影
响血小板数量，而血小板数量的变化可能在一定程
度上掩盖纤维化相关 TGF-β1 变化，这就强烈提示
应用血清检测 TGF-β1 水平存在局限性。我们检测
肝组织中 TGF-β1 mRNA 的表达较好地反映木疏胶
囊对 TGF-β1 的影响。本研究结果显示木疏胶囊明
显降低肝纤维化大鼠 TGF-β1 mRNA的表达，为木疏
胶囊抗肝纤维化作用在细胞因子的基因水平提供了
证据，同时也揭示了木疏胶囊抗肝纤维化的作用可
能与 TGF-β1 高度相关，我们研究还发现木疏胶囊
对 TGF-β1 mRNA表达的降低作用大于鳖甲软肝片。
肝纤维化时各类 ECM 成分合成增加，HSC 是
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肝纤维化时 ECM产生的主要来源，它们的激活是肝
纤维化形成的中心环节［13］。α －平滑肌肌动蛋白
(smooth muscle actin，SMA)为 7 nm 的微丝，它是细
胞骨架的组成成分，是一种肌动蛋白，具有收缩功
能，主要存在于血管平滑肌细胞中，但在许多肌成纤
维样细胞中也表达，正常情况下肝星状细胞处于静
止状态，不表达 α-SMA，当肝细胞受到损伤时，HSC
则高度增生并激活，转化成肌成纤维样细胞，分泌以
Ⅰ型胶原为主的多种基质成分，表达 α-SMA，α-SMA
已成为肝纤维化形成过程中 HSC 活化的标志。作
为肌成纤维细胞的标志性抗原，α-SMA 在肝纤维化
及其他器官纤维化的科学研究中已被广泛应
用［14，15］，并发现随着器官纤维化程度的加重，α-
SMA表达增加，且这种异常表达与患者的预后密切
相关。已有研究表明 α-SMA 表达与肝纤维化程度
呈明显的正相关［16］。也有研究把活化的 HSC 数量
作为抗纤维化疗效的判断指标之一。因此本实验中
将 α-SMA作为主要观察指标之一，并发现在肝纤维
化大鼠肝组织中 α-SMA表达量明显增加，与文献报
道一致［17］，将该指标与木疏胶囊抗肝纤维化的疗效
相联系，能较客观的判断木疏胶囊的疗效。本研究
结果中木疏胶囊可明显降低肝纤维化大鼠肝组织
α-SMA mRNA，并且其影响大于鳖甲软肝片，故认为
木疏胶囊有较明显的抗肝纤维化的作用，且其抗肝
纤维化的作用可能与降低 HSC活化程度有关。
胶原是 ECM 的主要组成成分，肝纤维化时
ECM中胶原以Ⅰ，Ⅲ型胶原为主(占 ECM的 95%以
上) ，且其比例由正常时的 1∶ 1 增高至 3 倍左右。肝
纤维化时，早期以Ⅲ型胶原为主，晚期以Ⅰ型胶原为
主。所以我们把Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量变化作为观察
的主要指标之一。肝细胞的正常功能和 HSC 保持
在静止状态有赖于 ECM成分的正常。肝纤维化时，
Disse间隙内 ECM成分发生改变，以Ⅰ、Ⅲ型胶原为
主的间质型胶原取代了以Ⅳ型胶原为主的基底膜胶
原，这种改变不但激活 HSC 并维持它处于活化状
态，也是引起肝细胞功能障碍的直接原因。
肝纤维化的形成是一个缓慢的动态过程，涉及
到细胞 －细胞因子 －细胞外基质之间一系列复杂的
反应，最终以大量的 ECM合成或(和)分解为结局，
因此在不同的水平抑制胶原合成是当前抗纤维化研
究的一个热点。胶原蛋白合成涉及到基因的启动、
转录、翻译及翻译后的加工等多个环节，其中的转录
调节是胶原合成最重要的环节［18］。胶原 mRNA 半
衰期短，只有数小时，且不能通过一个细胞转移到另
外的细胞，而胶原蛋白产物半衰期长，达数月或数
年，难以辨别新旧胶原，且胶原蛋白还可因细胞吞
噬、转运、技术性因素污染而易位，因此检测胶原
mRNA更能体现胶原在体内的合成状态。所以，我
们检测肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原 mRNA 的表达可较好
地反映木疏胶囊对肝纤维化的作用。本研究结果显
示木疏胶囊预防组和治疗组肝纤维化大鼠肝组织的
Ⅰ、Ⅲ型胶原 mRNA 的表达明显下降，且与鳖甲软
肝片比较有统计学差异，因此认为木疏胶囊对肝纤
维化大鼠胶原的沉积有较好的降低作用，且此作用
可能优于鳖甲软肝片。由于 TGF-β1 是启动邻近静
息态 HSC 激活和转化的初始信号之一，并且，据报
道［19］，肝纤维化时 TGF-β1 表达增加与胶原的表达
增加呈平行，本研究结果中肝纤维化大鼠肝组织中
TGF-β1 mRNA表达降低同时，α-SMA mRNA 和Ⅰ、
Ⅲ型胶原 mRNA表达也降低，所以推测木疏胶囊可
能通过降低肝纤维化大鼠 TGF-β1 水平而降低肝纤
维化的关键因素 HSC 活化和增殖，从而减少 HSC
分泌一系列细胞因子和细胞外基质，进而减轻细胞
因子对肝组织的损伤和一系列促肝纤维化作用，减
轻肝脏细胞外基质分泌与降解失衡，所以能够较好
地发挥抗肝纤维化作用。
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·385·山西医科大学学报 (J Shanxi Med Univ)2010 年 7 月，41 (7)
DOI:10． 3969 /J． ISSN． 1007 － 6611． 2010． 07． 002
发育中大鼠皮层神经元惊厥样放电中 PSD-95 mRNA表达改变
郭秀娟1，2， 王静敏1* ， 姜 茜1， 牛争平2， 尚 晶1，2， 吴希如1， 姜玉武1 (1 北京大学第一医院儿科，
北京 100034; 2 山西医科大学第一临床医学院神经内科; * 通讯作者，E-mail:wang66jm@ 163． com)
摘要: 目的 探讨早期无镁细胞外液处理后惊厥样放电对发育中大鼠皮层神经元 PSD-95 mRNA 表达的影响。 方法 以
原代培养的大鼠大脑皮层神经元无镁诱导的反复惊厥样放电为模型，根据对培养 6 d皮层神经元的不同处理分为三组:正常
Neurobasal /B27 培养液组(CONT组)、正常细胞外液组(PS组)和无镁细胞外液组(MGF组)。神经元分别在上述三种液体中
孵育 3 h，然后换为正常 Neurobasal /B27 培养液继续培养，在处理后 6，24，72 h及处理后第 6 天时应用实时定量 PCR测定 PSD-
95 mRNA的表达。 结果 与 CONT组和 PS组相比，MGF组 PSD-95 mRNA表达在处理后 24 h明显增高(P ＜ 0． 05)。处理
后 6 h，72 h及第 6 天的皮层神经元 PSD-95 mRNA表达三组中两两比较差异无统计学意义(P ＞ 0． 05)。 结论 发育中大鼠
皮层神经元惊厥样放电可以导致神经元 PSD-95 mRNA表达的改变。
关键词: 神经元; 惊厥; PSD-95 mRNA
中图分类号: Q424 文献标志码: A 文章编号: 1007 － 6611(2010)07 － 0584 － 04
Effects of recurrent epileptiform discharges induced by magnesium-free treatment on alternations of PSD-95 mRNA expres-
sion in developing cortical neurons of rats
GUO Xiu-juan1，2，WANG Jing-min1* ，JIANG Qian1，NIU Zheng-ping2，SHANG Jing1，2，WU Xi-ru1，JIANG Yu-wu1(1Dept of Pedi-
atrics，First Hospital Peking University，Beijing 100034，China;2Dept of Neurology，First Clinical Medical College，Shanxi Medical Univer-
sity;* Corresponding author，E-mail:wang66jm@ 163． com)
Abstract: Objective To explore the changes of PSD-95 mRNA expression induced by early magnesium-free treatment in developing
cortical neurons of rats． Methods The seizure model of recurrent epileptiform discharges was induced by transient magnesium-free
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作者简介: 高萍，女，1974 － 09 生，博士，主治医师．
［收稿日期: 2010 － 05 － 04］
基金项目: 国家自然基金资助项目(30870865) ;北京市自然科学基金资助项目(7092106)
·485· 山西医科大学学报 (J Shanxi Med Univ)2010 年 7 月，41 (7)