全 文 ：· 1638· China Pharm acy 2009 Vol.20 No.21 中国药房 2009年第 20卷第 21期
Δ河南省教育厅自然科学研究计划项目(2008A360002);河南省
高等学校青年骨干教师资助计划(2008-23)
*主管药师。研究方向:中药活性成分及新药研究。电话:0371-
65589287。E-mail:dx dbz@163.com
#通讯作者:教授 , 硕士研究生导师。研究方向:中药活性成分及
新药研究。电话:0378-3880680。E-mail:kangweny@hotmail.com
枇杷花挥发性成分顶空固相微萃取-GC -MS 联用法分析 Δ
吴彩霞 1 , 2* ,王金梅 1 ,2 ,康文艺 1 , 2#(1.河南大学天然药物研究所 ,开封市 475004;2.河南省疾病控制中心 ,郑
州市 450003)
中图分类号 R284.1;R927 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2009)21-1638-03
摘 要 目的:采用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用(SPME-GC-MS)法分析鉴定枇杷花挥发性成分 , 并优化S PM E的
操作条件 。方法:色谱柱为 DB-5 MS 石英弹性毛细管柱(30.0 m ×250μm×0.25μm),载气为高纯氦气(99.999%),流速为 1.0
mL ·min -1 ,进样口温度为 250 ℃,电离方式为 EI 源 ,电离能量为 70 eV ,质量扫描范围为 30 ～ 440 amu 。结果:样品在 80 ℃、用 65
μm 聚二甲基硅氧烷-二乙烯苯(PDMS -DVB)萃取头对枇杷花顶空吸附 30 min , 250 ℃解吸 1 min ,GC-MS对解析物进行分离
鉴定 ,共获得 34个峰 ,鉴定出 29个组分 ,占总峰面积的 97.42%,主要为苯甲醛和 4-甲氧基苯甲醛 。结论:本方法可用于枇杷花中
挥发性成分的快速分析 。
关键词 顶空固相微萃取;气相色谱-质谱联用技术;枇杷花;挥发性成分
Analysis of Volatile Components of Eriobotrya japonica by Headspace SPME-GC-MS
WU Cai_x ia , WANG Jin_mei , KANG Wen_yi(I nsti tute of N atural Products , Henan Universi ty , K aifeng
475004 ,China)
WU Cai_x ia ,WANG Jin_mei , KANG Wen_yi(Henan Center for Disease Contro l , Zhengzhou 450003 , China)
ABSTRACT OBJECTIVE:To analyze the vo la tile component s in the E riobotrya japonica by headspace so lid-phase mi-
croex traction -gas chromatog raphy -mass spec trom etry(SPME -GC -M S)and to optimize the operating conditions for
S PM E.M ETHODS:DB-5 MS elastic silica capillary co lumn(30.0 m×250μm×0.25 μm)was used as the chromatog raphic
co lum n w ith helium of high purity(99.999%)as car rie r gas a t a flow rate o f 1.0 mL ·min -1.T he injector temperature w as 250
℃;M S condition:ioniza tion m ode w as EI w ith electron energy of 70 eV and the mass scan range of 30 ～ 440 amu.RESU LTS :
Af te r headspace absorption for 30 min at 80 ℃using 65 μm polydimethy lsiloxane -div iny l-benzene ex traction head fo llow ed
by desorption f or 1 min at 250 ℃, the E.japonica sample w as separa ted and identified by GC-M S analysis.A total of 34 peaks
w ere obtained and 29 com ponents w ere identified w hich accounted for 97.42%o f the tot al peak area , topping the list w ere
benzaldehyde and 4-methoxybenzaldehyde.CONCLUS ION :HS -S PM E-GC-MS can be used fo r t he rapid analysis of the
volatile componen ts in E.japonica.
KEY WORDS Headspace solid-phase microex traction;Gas chromatog raphy -mass spectrometry ;Eriobotrya japonica ;Vola_
tile com ponents
枇杷花为蔷薇科枇杷属植物枇杷 Eriobot rya japonica
(T hunb.)Lindl.的花 ,主要分布在四川 、陕西 、广东 、云南等省
区 [1 ]。枇杷药用历史悠久 ,具有化痰止咳 、和胃降气之功效 。作
为传统中药 , 枇杷的研究集中于叶和果实 , 而枇杷花的研究很
少 , 仅被分离得到了 4个三萜类化合物 [2 ] 。枇杷花气味香醇独
特 ,是秋 、冬季节难得的蜜源植物 ,其味淡 、性微温 ,用于治疗伤
风感冒 、咳嗽 、痰血 。现代药理研究发现 , 枇杷花具有抑菌 、止
咳 、祛痰和抗炎作用 [3 ,4 ]。张丽华等 [5 ]采用固相微萃取(SPM E)
技术分析了枇杷花的香气成分 。本试验采用顶空 SPM E与气
相色谱-质谱 (GC-M S)联用技术结合保留指数法对枇杷花
的挥发性成分进行分析 , 考察了 SPME的操作参数 (纤维头 、
萃取时间 、萃取温度和解吸时间), 确定了 S PM E提取枇杷花
挥发性成分的最佳条件 。
1 仪器与试药
6890N GC/5975 MS 联用仪(美国安捷伦公司);手动 SP_
M E装置(美国 Supelco 公司);65 μm聚二甲基硅氧烷-二乙
烯苯(PDMS-DV B)萃取头 、100μm PDMS-DVB萃取头 、85
μm 聚丙烯酸酯(PA)萃取头(美国 Supelco 公司);C 6 ～ C26正
构烷烃(色谱纯 , Alf a Aesar 公司)。枇杷花于 2008年 11月采
集于河南省开封市 , 由河南大学天然药物研究所李昌勤副教授
鉴定为蔷薇科枇杷属植物枇杷 E.japonica(T hunb.)Lindl.
的花 ,标本存放于河南大学天然药物研究所。
2 方法与结果
2.1 顶空 SPME
使用前先将 SPME的萃取头在GC的进样口老化 10 min ,
老化温度为 250 ℃,载气体积流量为 1.0 mL ·min -1。
取枇杷花 1.1 g , 置于 5 mL 样品瓶中 , 盖上盖子 , 插入 65
μm PDMS-DV B萃取头 , 80 ℃下顶空取样 30 min ,取出后立
即插入 GC进样口(250 ℃),解吸 1 min 。
2.2 分析条件
2.2.1 GC 条件:色谱柱为 DB-5 MS 石英弹性毛细管柱
(30.0 m×250μm ×0.25μm), 载气为高纯氦气(99.999%),
中国药房 2009年第 20卷第 21期 Ch ina Pharmacy 2009 V ol.20 No.21 · 1639·
流速为 1.0 mL ·min -1 , 进样口温度为 250 ℃;色谱柱初始温
度为 50 ℃(保持 1.0 min),以 3 ℃·min -1升温至 120 ℃(保
持 2 min), 最后以 4 ℃·min -1升温至 210 ℃(保持 10 min);
不分流进样 。
2.2.2 MS 条件:电离方式为 EI 源 ,电离能量为 70 eV ,离子
源温度为 250 ℃,四极杆温度为 150 ℃,传输线温度为 280 ℃,
电子倍增器电压为 1 765 V ,质量扫描范围为 30 ～ 440 am u 。
2.3 保留指数(KI)测定
按照文献方法 [6 ～ 8 ] , 以正构烷烃(C6 ～ C 26)为参比计算各
组分的 K I 。
2.4 萃取条件的优化
2.4.1 萃取头的选择:在萃取温度 70 ℃、样品平衡时间 30
m in 、萃取时间 30 min的条件下 , 分别考察 65μm PDMS -
DVB 、100μm PDMS -DVB和 85μm PA 萃取头的萃取能力 ,
根据所得峰数目和总峰面积 ,对 3种萃取头进行比较 。结果 , 65
μm PDMS-DVB萃取头所得峰数目和总峰面积最大 , 故选用
65μm PDMS-DV B萃取头进行试验 。
2.4.2 萃取温度的确定:温度在 SPM E过程中会产生 2种相
反效果:一方面 ,升高温度会加快样品和涂层间传质过程 ,且在
顶空取样中升温有助于样品和样品上空间的传质;另一方面 ,
因吸附过程是一个放热过程 , 升温会降低样品的分配常数;此
外 , 温度过高还会给操作带来不便 。在萃取头为 65 μm
PDM S-DVB 、萃取时间 30 min的条件下 , 笔者选取 40 、50 、
60 、70 、80 、90 ℃进行试验 ,考察萃取温度与总峰面积的关系。
结果表明 , 萃取温度为 80 ℃时 , 总峰面积最大 , 故确定萃取温
度为 80 ℃。
2.4.3 萃取时间的确定:结合上述结果 , 在萃取头为 65μm
PDM S-DVB 、萃取温度 80 ℃的条件下 , 将样品萃取时间从 5
min延长到 40 min , 考察萃取时间与总峰面积的关系 。结果表
明 ,萃取时间越长 ,总峰面积越大 ,当萃取时间达到 30 min后 ,
总峰面积基本不变 ,故确定 30 min为萃取时间 。
2.4.4 解吸时间的确定:解吸过程受进样口温度 、解吸时间 、
待测物性质等因素的影响 。较高进样口温度可以缩短解吸时
间 ,但也会使某些不稳定物质发生热降解 。试验表明 ,进样口温
度为 250 ℃、解吸时间在 1 min内 , 总峰面积随解吸时间的增
加而增大;当解吸时间超过 1 min后 , 总峰面积基本不变。因
此 ,本试验确定进样口温度为 250 ℃、解吸时间为 1 min 。
2.5 枇杷花挥发性成分分析
在确定的萃取参数和仪器条件下 , 对枇杷花的挥发性成分
进行分析 ,由化学工作站给出总离子流图 ,对枇杷花进行GC-
M S分析 ,经计算机M S数据系统检索 ,并查对有关资料 ,共鉴
定出 29个组分 。按峰面积归一化法确定各组分在挥发性成分
中的相对含量 , 各组分按照从 GC毛细管柱中流出的顺序排
序 。枇杷花的挥发性成分和相对百分含量见表 1 。
表 1 枇杷花的挥发性成分和相对百分含量
Tab 1 Volat ile components and relat ive percentage contents of E.japonica
编号 组分 中文名 保留时间/min 含量/ % K I 相似度
1 Benzaldehyde 苯甲醛 5.923 26.39 963 96
2 Nonana l 壬醛 10.900 1.88 1 107 91
3 Phenylca rbinol 苯甲醇 11.258 5.28 1 113 94
4 Benzy l nitr ile 苯甲腈 12.092 0.66 1 136 97
5 Benzoic acid , et hy l e ster 苯甲酸乙酯 13.384 1.42 1 166 95
6 4-met hoxy-Benza ldehyde 4-甲氧基苯甲醛 17.119 27.15 1 254 96
7 2-hydro xy-Benzoic acid , et hy l e ster 2-羟基苯甲酸乙酯 17.460 0.54 1 262 94
8 4-met hoxy-Benzenemethano l 4-甲氧基苯甲醇 18.269 1.05 1 281 94
9 (E , E)-2 , 4-Decadiena l (E , E)-2 , 4-癸二烯醛 19.736 0.38 1 315 91
10 Phenyle thanol 苯乙醇 20.153 0.34 1 325 87
11 4-met hoxy-Benzo ic acid ,met hy l est er 4-甲氧基苯甲酸甲酯 21.895 1.11 1 367 97
12 Vanillin 香草醛 22.771 0.52 1 388 97
13 T et radecane 十四烷 23.263 0.72 1 399 98
14 4-met hoxy-Benzo ic acid , e thyl ester 4-甲氧基苯甲酸乙酯 25.047 6.54 1 441 91
15 (E)-3-phenyl-2-Propenoic a cid , ethy l este r (E)-3-苯基-2-丙烯酸乙酯 25.705 0.86 1 457 96
16 3 , 4-dime thoxy-Benzaldehyde 3 ,4-二甲氧基苯甲醛 26.414 1.09 1 473 96
17 Pent adecane 十五烷 27.564 2.04 1 500 95
18 3-met hoxycinnama ldehyde 3-甲氧基肉桂醛 30.624 0.64 1 559 98
19 Benzoic acid ,hexyl ester 苯甲酸己酯 31.315 0.52 1 573 98
20 Dodecanoic acid , et hy l est er 十二酸乙酯 32.483 0.29 1 595 93
21 Hexadecane 十六烷 32.733 1.13 1 600 95
22 4-(4-hydro xy-3-met hoxypheny l)-2-Butanone 姜油酮 34.092 3.90 1 635 99
23 Heptadecane 十七烷 36.667 0.85 1 700 98
24 T et radecanoic acid , et hy l e ster 十四酸乙酯 39.727 0.39 1 794 97
25 Hexadecanoic acid , et hy l est er 十六酸乙酯 45.196 2.79 1 995 96
26 Heneicosane 二十一烷 47.763 2.32 2 101 97
27 Lino lei c acid , e thyl ester 亚油酸乙酯 48.997 0.49 2 156 99
28 Docosane 二十二烷 49.997 0.47 2 200 99
29 Eico sane 二十烷 52.198 5.65 2 300 99
合计/ % 97.41
表 1显示 , 枇杷花通过 SPME得到的主要成分是苯甲醛
和 4-甲氧基苯甲醛 ,含量分别为 26.39%和 27.15%;此外 ,还
含有较多酯类化合物 , 如 4-甲氧基苯甲酸甲酯 、4-甲氧基苯
甲酸乙酯 、十四酸乙酯 、十六酸乙酯 、苯甲酸乙酯 、亚油酸乙酯 、
十二酸乙酯等 ,含量达 14.95%。张丽华等 [5 ]以 100 μm PDMS
萃取头 、采用 SPME 法检测到枇杷花的主要成分是苯乙醇 , 其
次为苯甲醛(7.00%)。由此可见 ,萃取头不同所检测到的成分
亦不同 [3 ] 。
3 讨论本试验采用 PDMS -DVB 萃取头 , 以顶空 SPME -
· 1640· China Pharm acy 2009 Vol.20 No.21 中国药房 2009年第 20卷第 21期
不同剂型冠心丹参制剂中丹参酮 ⅡA含量的比较分析
杨小英 1 * ,马启珍 1 ,刘 帅 2(1.宁夏医科大学附属医院药剂科 ,银川市 750004;2.宁夏医科大学药学系 ,银
川市 750004)
中图分类号 R283;R927 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2009)21-1640-03
摘 要 目的:测定冠心丹参片 、冠心丹参胶囊 、冠心丹参颗粒和冠心丹参滴丸中丹参酮ⅡA的含量 ,并进行比较 。方法:以甲醇为溶
剂 , 采用超声法提取上述 4种冠心丹参制剂中的丹参酮ⅡA ;采用高效液相色谱法测定其含量 , 色谱柱为 Agilen t Zorbax C8(150
mm×4.6 mm , 5μm),流动相为甲醇-水(72∶28),检测波长为 270 nm 。结果:丹参酮ⅡA的检测浓度在 2.76 ～ 138 μg ·mL -1范
围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r =0.999 9);冠心丹参片 、冠心丹参胶囊 、冠心丹参颗粒 、冠心丹参滴丸的平均回收率分别
为 99.29%、100.37%、100.18%、98.71%, RSD 分别为 1.78%、2.10%、1.55%、1.09%(均 n =6)。结论:不同冠心丹参制剂中丹
参酮ⅡA含量差别较大 ,故应尽快建立其质量标准 。
关键词 高效液相色谱法;冠心丹参制剂;剂型;丹参酮ⅡA ;含量;比较
Comparison of the Content of Tanshinone ⅡA in Dif ferent Dosage Form of Guanxin Danshen Preparations
YANG Xiao_y ing , MA Qi_zhen(Dept.o f Pharmacy , The Aff iliated Hospi tal of Ningxia M edical University ,
Yinchuan 750004 ,China)
LIU Shuai(Dept.of Pharmacy , Ningxia M edical Unive rsity , Yinchuan 750004 , China)
ABSTRACT OBJECTIVE:To de term ine and compare the content s o f tanshinone ⅡA in difference dosage fo rm of Guanx in
danshen prepara tions(table ts , capsules , granules and dripping pills).METHODS :The tanshinone ⅡA in different Guanx in
danshen prepara tions w as ex trac ted by ultrasonic ex traction w ith met hanol as so lvent , and the content o f tanshinone ⅡA w as
de te rmined by HPLC on Agilent Zorbax C8(150 mm×4.6 mm , 5μm)colum n w ith mobile phase consisted o f methano l-w ater
(72∶28)under a detection w aveleng th o f 270 nm.RESULTS:The linear ranges f or tanshinone ⅡA stood at 2.76 ～ 138 μg ·
mL -1(r =0.999 9).The average recoveries o f Guanx in danshen table ts , Guanx in danshen capsules , Guanxin danshen granules
and Guanx in danshen dripping pills w ere 99.29%, 100.37%, 100.18% and 98.71%, respective ly w ith RSD a t 1.78%,
2.10%, 1.55%, and 1.09%(all n =6), respectively.CONCLUS ION :The content of t anshinone ⅡA in dif fered greatly in dif-
ferent Guanx in danshen preparations;the refo re it is urgent to establish the quality standard fo r Guanxin danshen p reparations
as soon as possible.
KEY WORDS HPLC ;Guanxin danshen prepara tions;Dosage fo rm ;T anshinone ⅡA ;Content;Compar ison
*副主任药师。研究方向:药动学。电话:0951-6743031。E-
mail:yxy -1970@163.com
GC-MS 联用法分析枇杷花的挥发性成分 ,方法快速 、简便 ,适
用于天然产物等复杂体系的分析工作 。但是 , 在实际应用中要
充分考察样品的性质 , 从而选取最合适的 S PM E萃取头 , 才能
得到良好的分析结果 。
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(收稿日期:2009-02-02 修回日期:2009-06-27)
丹参为唇形科植物丹参 S alvia mi ltiorrhiza Bge.的干
燥根及根茎 ,具有活血化瘀 、通经止痛的功效 。丹参酮ⅡA 是丹
参中的脂溶性成分 , 现代药理研究表明其具有广泛的生理活
性 。1995年版《中国药典》收载了传统方冠心丹参片;参照此制
剂 ,冠心丹参颗粒 、冠心丹参胶囊 、冠心丹参滴丸作为新中药制
剂陆续上市 ,处方均为丹参 、三七和降香油 。其中 ,冠心丹参胶
囊收载于 2005年版《中国药典》 [1 ] ,该制剂项下将丹参酮ⅡA 作
为质量控制指标(规格:每粒 0.3 mg),而其余剂型未见质量控
制方法 。因此 ,本研究以丹参酮ⅡA为指标 ,采用超声法提取上
述 4种冠心丹参制剂中丹参酮ⅡA成分 , 采用高效液相色谱
(HPLC)法测定其含量 ,并作比较分析 。
1 仪器与试药
1100型 HPLC仪 , 包括 G 1311A 型四元泵 、G1316A 型柱
温箱 、G 1315B型二极管阵列检测器 、全自动进样器(美国 Agi-