全 文 ：维药阿育魏实总黄酮抗氧化活性研究
张 慧，章立华，黄 琼，热娜·卡斯木* (新疆医科大学药学院，新疆乌鲁木齐 830011)
摘要 ［目的］评价阿育魏实总黄酮的抗氧化能力。［方法］采用羟自由基、超氧阴离子自由基、亚硝基自由基、DPPH自由基、ABTS自由
基体系对阿育魏实总黄酮抗氧化的能力进行研究。［结果］在质量浓度 0． 025 ～ 0． 500 mg /ml的范围内，阿育魏实总黄酮对羟自由基、超
氧阴离子自由基、亚硝基自由基、DPPH自由基、ABTS自由基的清除率分别为 31． 68% ～99． 01%、27． 45% ～90． 52%、11． 62% ～ 86． 40%、
41． 31% ～92． 21%和 17． 53% ～62． 67%，且存在明显的量效关系。IC50分别为 0． 038 49、0． 053 51、0． 271 60、0． 026 17和 0． 033 87 mg /ml。
［结论］阿育魏实总黄酮具有很好的体外抗氧化活性，是一种新型天然抗氧化物质来源。
关键词 阿育魏实;总黄酮;自由基;抗氧化活性
中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611( 2014) 15 －04624 －02
Study on Antioxidant Activity of Total Flavonoids of Trachyspermum ammi ( L． ) Sparuge
ZHANG Hui，ＲENA·Kasim et al ( Pharmacy College of Xinjiang Medical University，Urumqi，Xinjiang 830011)
Abstract ［Objective］To evaluate antioxidant capacity of total flavonoids of Trachyspermum ammi ( L． ) Sparuge． ［Methods］Using hydroxyl
free radicals，superoxide anion free radicals，nitroso free radicals，DPPH free radicals，and ABTS free radical system on total flavonoids of
Trachyspermum ammi ( L． ) Sparuge． ［Ｒesults］ In the mass concentration within the range of 0． 025 － 0． 5 mg /ml，its ability to remove the
free radicals was 31． 68% － 99． 01%，27． 45% － 90． 52%，11． 62% － 86． 40%，41． 31% － 92． 21%，and 17． 53% － 62． 67%，and there
was significant dose － response relationship． IC50 was 0． 038 49 mg /ml，0． 03849 mg /ml，0． 03849 mg /ml，0． 053 51 mg /ml，and 0． 033 87
mg /ml respectively． ［Conclusion］Total flavonoids of Trachyspermum ammi ( L． ) Sparuge has high antioxidant activity in vitro and is a new
kind of natural antioxidant．
Key words Trachyspermum ammi ( L． ) Sparuge; Total flavonoids; Free radical; Antioxidant activity
基金项目 新疆医科大学创新基金( XJC2011117) 。
作者简介 张慧( 1964 － ) ，女，安徽亳州人，副教授，从事天然药物研
究。* 通讯作者，教授，博士生导师，博士，从事天然药物
研究。
收稿日期 2014-05-04
阿育魏实为伞形科糙果芹属［Trachyspermum ammi (L．)
Sparμge］植物的干燥成熟果实。全世界糙果芹属植物有 12
种，分布于非洲至南亚，我国有 2 种即糙果芹和马尔康糙果
芹(T． triadiatum WoLff)及1个变种［T． scaberu Lum(Franch．)
WoLff． ex hand － Mazz． var． ambrosii － foLium(Franch)］又称
阿米糙果芹［1］。新疆和田、喀什地区普遍栽培［2］，具有驱风
散寒，健胃消食，用于食欲不振、胃寒作痛、小便不利、尿路结
石、偏瘫及皮肤病等。阿育魏实所含麝香草酚，对口腔、咽喉
粘膜有杀细菌和真菌的作用，对龋齿有防腐和局麻作用［3］，
还用于皮肤化脓性感染及真菌和放线菌病，其醇提物(10%)
对葡萄球菌、大肠杆菌有抑制作用，其稀释液可作祛痰剂［4］。
阿育魏实用于很多维吾尔药的复方制剂中，是常用的药材品
种，收载于中华人民共和国药品标准维吾尔药分册［5］。在印
度等地阿育魏实被用作香料，也作为糕点和饮料添加剂和防
腐剂［6］。
为了进一步开发利用阿育魏实资源，笔者以阿育魏实总
黄酮为研究对象，采用羟自由基、超氧阴离子自由基、亚硝基
自由基、DPPH自由基、ABTS自由基体系对阿育魏实总黄酮
抗氧化的能力进行研究，以期为阿育魏实总黄酮的开发利用
提供参考。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象。阿育魏实种子，购自自治区维吾尔医院、
喀什地区维吾尔医院、和田地区维吾尔医院，经新疆医科大
学药学院天然药物化学教研室帕丽达·阿布利孜教授鉴定
为伞形科糙果芹属［Trachyspermum ammi (L．)Sparμge］的成
熟果实。
1． 1． 2 主要仪器。UV －2550型分光光度计，购自日本岛津
公司;SK2510HP超声波清洗仪，购自上海科导超声清洗仪有
限公司;XS105型十万分之一电子天平，购自瑞士梅特勒 －
托利多公司。
1． 1． 3 主要试剂。芦丁对照品，购自中国药品生物制品检定
所;OH试剂盒，购自南京建成生物工程研究所;二苯代苦味肼
基自由基，购自 DPPH． sigma公司;ABTS，购自 sigma公司;三羟
甲基氨基甲烷(Tris)、亚硝酸钠、对氨基苯磺酸和盐酸萘乙二
胺，均购自上海缘聚生物科技有限公司;浓盐酸、无水乙醇、三
氯化铝均为分析纯，市售;水为超纯水，实验室自制。
1． 2 方法
1． 2． 1 阿育魏实黄酮工作液的制备。精密称取阿育魏实样
品:自治区维吾尔医院 1． 000 6 g，喀什地区维吾尔医院
1． 000 4 g，田地区维吾尔医院 1． 000 2 g，分别置于索氏提取
器中，用石油醚加热回流 30 min，弃去提取液，挥干残渣，然
后加入浓度 60%乙醇 50 ml超声 2次，每次 30 min，过滤，用
浓度 60%的乙醇定容至 100 ml，摇匀备用。
1． 2． 2 芦丁标准曲线的绘制［7］。精密称取 120 ℃干燥恒重
的芦丁对照品 10． 00 mg，用浓度 60%的乙醇溶解，定容为
100 ml，即配置成浓度为 100 μg /ml 标准溶液。准确吸取芦
丁标准溶液 0、0． 4、0． 8、1． 2、1． 6、2． 0 和 2． 4 ml 分别置于 10
ml容量瓶中，加入浓度 5%的三氯化铝溶液 3 ml，pH = 6 的
醋酸 －醋酸钠缓冲液 1 ml，最后用浓度 60%的乙醇定容，摇
匀，即配成标准工作溶液。荧光测定条件优化为:激发波长
429． 0 nm，发射波长 529． 0 nm，激发光谱通带 10． 0 nm，发射
光谱通带5． 0 nm，测定溶液的 pH =6的条件下绘制芦丁标准
责任编辑 石金友 责任校对 况玲玲安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2014，42(15):4624 － 4625，4639
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2014.15.145
曲线。
1． 2． 3 阿育魏实总黄酮含量测定。精密量取样品溶液 0． 5
ml至 10 ml容量瓶中，加入浓度 5%的三氯化铝 3 ml，pH = 6
的醋酸 －醋酸钠缓冲液 1 ml，最后用浓度 60%的乙醇定容至
10 ml 。按“1． 2． 2”项下条件操作。
1． 2． 4 对超氧阴离子自由基 O －2 ·的清除能力
［8 －9］。采用
邻苯三酚自氧化法，在碱性条件下邻苯三酚迅速发生自氧
化，生成红色中间产物同时释放出 O －2 ·，O
－
2 ·可加速邻苯
三酚自氧化速率。当有清除剂存在时可清除 O －2 ·，从而阻
止中间产物的积累，通过比色法检验物质清除 O －2 ·的能力。
测定步骤为:取 0． 05 mol /L的 pH = 8． 2 的 Tris － Hcl 缓冲液
4． 5 ml于试管中，置 25 ℃水浴中预热 20 min，分别加入样品
溶液 0． 1 ml后均加入 2． 5 mmol /L 的邻苯三酚 0． 4 ml，混匀
后 25 ℃水浴中准确反应 4 min，立即加入 8 mol /L的 HCL两
滴终止反应，蒸馏水调零在 300 nm处测吸光度，空白以 0． 1
ml蒸馏水代替样品试液。按下式计算清除率:O －2 ·清除率
(%)=(V空白 － V样品)/ V空白 ×100。
1． 2． 5 对·OH的清除能力［8 －9］。参照 Fenton反应法建立
·OH自由基体系模型:H2O2 与 Fe
2 +混合后产生·OH 的
Fenton反应为:H2O2 + Fe
2 + = OH － +·OH + Fe3 +，试验操
作按照南京建成生物工程研究所提供的·OH试剂盒说明书
进行。在反应体系中分别加入样品溶液 0． 2 ml，检测体系中
的·OH的剩余量。按下式计算阿育魏实总黄酮对·OH的
清除率:·OH清除率(%)=(对照管 OD －测定管 OD)/ 对
照管 OD ×100。
1． 2． 6 对亚硝基自由基 NO －2 的清除能力
［10］。亚硝酸钠在
弱酸性条件下与对氨基苯磺酸重氮化后再与 N － 1 －苯基乙
二胺盐酸盐偶合生成的红色化合物 540 nm 处有特征吸收
峰，加入清除剂后可有效清除 NO －2 ，使亚硝酸钠含量减少，从
而使红色化合物生成减少，吸光度值下降，可通过添加试样
前后吸光度值的变化判定试样对 NO －2 的清除效果。测定步
骤为:取 3支试管 a、b、c，准确吸取 0． 5 ml的浓度为 5 μg /ml
的亚硝酸钠溶液 2份分别加入到 a和 c中，在 a和 b管中加
入样品溶液 1 ml，反应 10 min 后，a、b、c 管分别加入浓度
0． 4%的对氨基苯磺酸溶液1． 0 ml，摇匀反应5 min，再加入浓
度 0． 2%的 N －1 －苯基乙二胺盐酸盐 1． 0 ml，摇匀 15 min后
在最大吸收波长 540 nm处测定吸光度。按下式计算阿育魏
实总黄酮对 NO －2 的清除率:NO
－
2 清除率(%)= Ao －(Ai －
Aj)/Ao ×100。式中:Ao 为不加样品溶液的吸光度;Ai 为加入
样品溶液后的吸光度;Aj 为不加亚硝酸钠溶液的吸光度。
1． 2． 7 对 DPPH自由基的清除能力［11］。DPPH自由基是一
种稳定的有机自由基，由于 DPPH自由基有一个单电子并在
517 nm处有强的吸收，其乙醇溶液呈深紫色，如果有其他物
质提供一个电子使此单电子配对，其吸收将会消失，褪色程
度与其接受的电子呈定量关系。测定步骤为:取 2 ml的样品
溶液于 5 ml 容量瓶中，加入 2 ml 浓度为 2 × 10 －4 mol /L 的
DPPH溶液混合均匀，密闭静止 30 min后，在 517 nm处测定
其吸光度 Ai，2 ml的 0． 1 mg /ml样品与 2 ml醇溶液测定吸光
度为 Aj，2 ml DPPH溶液与 2 ml 2次蒸馏水的吸光度 Ao。按
下式计算阿育魏实总黄酮对 DPPH自由基的清除率。DPPH
自由基清除率(%)=［Ao －(Ai － Aj)］/Ao × 100。式中:Ao
为未加抗氧化剂时 DPPH溶液的吸光度;Ai 为加抗氧化剂后
DPPH溶液的吸光度;Aj 为抗氧化剂在测定波长的吸光度。
1． 2． 8 ABTS 自由基的清除能力［11］。取 7 mol /L 的 ABTS
和 140 mmol /L的过硫酸钾溶液分别取 5 ml和 88 μl，在室温
避光条件下静置过夜，配置 ABTS 自由基储备液，然后按照
1∶ 50的比例用蒸馏水稀释成工作液。样品管中加入 200 μl
的样品溶液和 3 ml的 ABTS工作液，空白管用 2次蒸馏水代
替样品溶液，对照管用 2次蒸馏水代替 ABTS溶液，在室温条
件下避光放置 1 h，于 730 nm处测定吸光度。按下式计算阿
育魏实总黄酮对 ABTS自由基的清除率。ABTS自由基清除
率(%)=［Ao －(Ai － Aj)］/Ao ×100。
2 结果与分析
2． 1 阿育魏实总黄酮含量的测定 计算得芦丁回归方程
问:Y =19． 156X － 0． 090 5，Ｒ = 0． 999 8。试验结果表明，在
4 ～24 μg /ml范围内，芦丁浓度与吸光度具有良好的线性关
系。按回归方程计算阿育魏实总黄酮含量，和田地区总黄酮
含量最高，为(14． 06 ± 0． 26)mg /g;其次为喀什地区，含量为
(13． 72 ± 0． 21)mg /g;最小的为自治区维医院 ，含量为
(13． 24 ±0． 23)mg /g(表 1)。
表 1 阿育魏实总黄酮含量测定结果
样品名称 测定值∥mg /g ＲSD∥%
自治区维医院 13． 24 ±0． 23 1． 72
喀什地区 13． 72 ±0． 21 1． 56
和田地区 14． 06 ±0． 26 1． 83
2． 2 阿育魏实不同浓度总黄酮清除各自由基的能力 图 1
表明，阿育魏实总黄酮对羟基自由基、超氧阴离子自由基、亚
硝基自由基、DPPH自由基、ABTS自由基都有一定的清除作
用，在质量浓度 0． 025 ～ 0． 5 mg /ml 的范围内，其清除各自由
基的能力分别为 31． 68% ～ 99． 01%、27． 45% ～ 90． 52%、
11． 62% ～86． 40%、41． 31% ～92． 21%和 17． 53% ～ 62． 67%，
且随着浓度的增加，其对上述各自由基的清除能力增强，即
两者之间存在量效关系。阿育魏实总黄酮浓度对各自由基
清除率的变化曲线，对羟基自由基、超氧阴离子自由基、DP-
PH自由基以质量浓度的对数对清除率进行线性回归，计算
IC50分别为 0． 038 49、0． 053 51 和 0． 271 60 mg /ml，对亚硝基
自由基、ABTS自由基以质量浓度对清除率进行线性回归，计
算 IC50分别为 0． 026 17和 0． 033 87 mg /ml。结果发现，阿育
魏实总黄酮对各自由基的清除能力有差别，IC50越低，清除自
由基的能力越强，阿育魏实总黄酮对上述自由基的清除能力
为:清除 DPPH·能力最强，高于 ABTS·，羟基自由基，超氧
阴离子自由基，对亚硝基自由基的清除能力最低。所以可以
选择性使用阿育魏实总黄酮清除不同的自由基。
2． 3 不同地区阿育魏实总黄酮清除自由基能力的比较 取
( 下转第 4639页)
526442 卷 15 期 张 慧等 维药阿育魏实总黄酮抗氧化活性研究
(4)3种桑树林地中以嘉陵 20 号内摩擦角最高，其数值
为 13． 712°，说明该桑树土壤稳定性最好;黏聚力以湖桑 32
号最高(43． 85 kPa)，说明该桑树土壤固结性最好，土壤本身
不易受到破坏侵蚀。
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706 －714．
(上接第 4625页)
图 1 阿育魏实不同浓度总黄酮清除各自由基的能力
不同地区的阿育魏实总黄酮样品，配制相同浓度的维生素 C
溶液作阳性对照，计算清除率。图 2 表明，不同地区阿育魏
实总黄酮清除各自由基的能力有差别，其能力的差别与不同
地区阿育魏实所含的总黄酮含量成正比，3 个地区阿育魏实
总黄酮含量为:和田地区 14． 06 mg /g，喀什地区 13． 72 mg /g，
自治区维医院 13． 24 mg /g。与维生素 C相比，除羟基自由基
图 2 不同地区阿育魏实总黄酮清除自由基的能力
外，维生素 C对各自由基的清除能力在 0． 1 mg /ml 时，多高
于阿育魏实总黄酮。
3 结论与讨论
经过阿育魏实总黄酮对羟基自由基、超氧阴离子自由
基、亚硝基自由基、DPPH自由基、ABTS自由基的清除作用试
验表明，阿育魏实总黄酮能有效清除羟基自由基、超氧阴离
子自由基、亚硝基自由基、DPPH自由基和 ABTS 自由基，其
中清除 DPPH自由基活性最强，且对各自由基的清除能力与
用量成正相关。试验结果表明，阿育魏实总黄酮含量丰富。
其总黄酮的抗氧化活性的研究显示，阿育魏实总黄酮具有较
强的抗氧化活性，提示阿育魏实总黄酮极有可能是一种天然
抗氧化剂的新资源，值得进一步深入研究。
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