全 文 ：植 物 病 理 学 报 A CT A PH Y T OT A PH L O O G IC AS IN IC A 19 9 5. 2 5( 4 ): 6 3 1一 36 5
侵染番红花的芜著花叶病毒 `
陈集双 李德葆
( 浙江农业大学生物技术研究所 , 杭州 3 10 0 2 9)
提要 从表现花叶症状的德国进 口 番红花上获得一线状病毒分离物 s A , 线状病毒粒子长度为 7 0 ~
8 0 o n m
。 其在人工接种的 1 科 39 种植物中能侵染 6 科 14 种植物 ,在克里芙兰烟 上产生系统坏死 , 在小白
菜 、 花椰菜等十字花科植物上产生系统花叶或为隐症 ,在昆诺菊等黎科植物上为局部侵染 。 在番红花病叶 、
球茎及克里芙兰烟病叶组织中观察到卷轴状和片层状聚集的风轮状内含体 。 免疫吸附和免疫修饰电镜观
察结果显示 , S A 与芜普花叶病毒 ( ( T u M v )具有紧密的血清学关系 。 根据这些特征将 S A 鉴定为 T u M V 的一
个分离物 。 这是 T u M v 侵染番红花的首次报道 。
关键词 : 番红花 芜蓄花叶病毒
番红花 ( `从火姗 蒯。二 L . )又名藏红花 、 西红花 ,是莺尾科 (方表人卫浇配 ) 多年生草本植物 , 以球茎繁
殖 ,原产于地中海沿岸地区 ,可作为名贵药用植物和观赏花卉 。 我国药用的栽培品种主要来自于德
国和 日本 〔 ’ 〕 。
从以上国家引进的小球茎 (芽球 )在田间种植 2一 3 年后均出现严重退化现象 ,病株在针状叶上
出现亮黄色条斑 , 整株矮化 、 黄化或顶端枯死 ,提前倒苗 ,球茎畸小 ,花产量大大降低 。
国内外对类似病害 已有报道 , lK ikn o w s ik ( 1 9 7 7) 认为引起番红花叶上条斑 、 花叶的病原为莺尾
花叶病毒 ( I M V ) 〔2 〕 ; C ia ol a ( 19 8 2) 从衰退的番红花病株的花器组织切片中观察到有片层状结构的风
轮状 内含体 , 并认 为此病原为菜豆黄花叶病毒 (B Y M V ) 〔3〕 。 国内赵培洁等 ( 19 9 0) 报道了浙江省从德
国和 日本 引进的 品种普遍 发生 花 叶病和 品质退 化 , 并 认 为其病原 可能是 莺 尾轻性花 叶病毒
( IM M V ) 〔 , 〕
。 此外 , 还报道过有 C M V 和烟草脆裂病毒 ( T R V ) 〔` 〕 。
我们 自 1 9 8 8 年至 1 9 9 2年对浙江省进 口番红花花叶和衰退 的病原进行了研究 ,现将研究结果
报道如下 。
l 材料与方法
1
.
1 毒源与抗血清
分离物 S A 采自浙江农业大学作物圃 ,原球茎从德国进口 。 T u M V 分离物 H , 及其抗血清由本实
验室分离和制备 。 T u M v 分离物 C : 及其抗血清由联邦德国 牛化与桔物病毒研究室 Dr . ve et n n 棋
供 。
1
.
2 生物学测定
寄主反应测定用常规汁液摩擦接种方法
,各寄主分别接种 5一 10 株 , 对照和处理均观察 20 天
至 2 个月 ,莺尾科植物采用球茎嫁接和汁液摩擦接种 ,接种后观察半年以 仁 。
一 — — - — — ~ — — . - 一 — ~
浙江省重点课题资助
行部分免疫 电镜观察
谢意 。
。 承蒙联邦德国生化和植物病毒研究所 rD .
V e t t e n n 提供 1泊 M v C Z 杭原和抗血清 , D r . L e s e o a n n 帮助进
,浙江 农业大学植保系许彩霞 、 电镜室边其均
、 杭 州药物试验场薛小红等同忐在工作中予以帮助 ,特致
修改稿收至11 [ 1期 : 19 9 4一 0月一 06
DOI : 10. 13926 /j . cnki . apps . 1995. 04. 020
3 6 2植 物 病 理 学 报 5 2卷
1
.
3 病毒粒子检查
用常规磷钨酸 ( P TA) 和醋酸铀 (U A c) 法负染后置电镜下观察 。
1
.
4组织病变观察
植物材料采用常规戊二醛 /饿酸双固定 、 E po n 81 2包埋 、 切片后用醋酸铀和柠檬酸铅双染色后
置电镜下观察〔5 〕 。
1
.
5 免疫电镜 (IS E M) 观察
采用改良 De ric k ` s 方法分别进行 免疫吸附和免疫修饰 L 6一 , 。 取 自然感病的番红花叶片 、 接种了 s A
的克里 芙兰烟 叶片 、 以及感染 T u M V H , 、 T u M V c Z 的小白菜 叶片 , 分别制 备成冷冻十粉 , 并用 .0
Zm of / L 磷酸缓冲液提取汁液后为抗原 、 进行同等倍比稀释后测定抗原的稀释终点并观察病毒粒子
被修饰的情况 。
2 结果与分析
2
.
1 病毒分离物 s A 的寄主反应
人工接种 1 科 39 种植物 , S A 能侵染 6 科 刊 种植物 , S A 在黎科的昆诺葵 、 觉色黎和灰黎上为
局部枯斑 , 在茄科的克氏烟 _ L为系统坏死 ,假酸浆和洋酸浆 上为局部枯斑 ,矮牵牛上 为系统黄斑 。 在
觅科的鸡冠花 、 玄参科的金鱼草和番杏科的番杏上为局部枯斑 。 在十字花科一的小白菜和花椰菜上为
系统花叶 ,甘蓝型油菜和大白菜上为隐症带毒 (图版 I , 、 S A 不侵染莺尾科 、 豆科 、 菊科 、 葫芦科和唇
形科的 25 种供试植物 ,寄主反应与芜若花叶病毒 ( `uT M v )相似 。
图版 I
自然感病的番红_花病叶 ,表现 为黄色条斑和斑块 2 . S A 授染克里芙 兰烟 产生系统坏死
3
.
5 入 侵染假酸浆产 ’ l几局部杖,斑 4 . S A 侵染昆诺黎产」局部拈斑 S S A 俊染鸡冠花产呀一 局部枯斑
P l a t e 】
F 19
.
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.
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j 期 陈集双 、 李德葆 :侵染番红花的芜善 花叶病毒 3 6 3
2
.
2 病毒粒子
用浸 出法直接负染从 自然感病的番红花 、 以及接种 S八 的克里芙兰烟和昆诺黎叶汁液 中均检
测到一种线状病毒 , 粒子大小为 7 0 一 8 0 On m 。
2
.
3 组织病变
在 自然感病的番红花 叶片 、 球茎和接种 S A 的克里芙兰烟叶组织 中均观察到典型的柱状 内含
体 (C I ) , 横切面 上的内含体结构主要 山卷 筒状 (s cr ol )和片层状聚集 (l a m i n a t ed ag g r eg at e )组成 、 外臂
(P lat
e )数量较少 , 这些结构具有典型的 T u M V 风轮状内含体的特征 〔 5 〕 。 在接种的克里芙兰烟叶细胞
中还存在排列成单层的病毒粒子 (图版 皿 )
图版 万
1
. 自然感病的番红花 仆卜细胞质中的柱状内含体 ( 5 0 3 。 _神
2
. 自然感病的番红花球茎细胞质中的柱状 内含体 ( 5 6 3 ) < )
3
、
4
.
5 八 侵染的克 里芙兰烟叶细胞中存在的柱状 内含体和 成片层排列的线状病毒粒子 ( 5 6 3 0 又 )
P l a t e 贾
F 19
.
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.
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F 19 3
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.2 4 血清学关系
在免疫吸附和免疫修饰试验中 , S A 与两种 T u M V 抗血清均有阳性反应 (图版 批 ) 。 在同等条件
36 4 植 物 病 理 学 报 2 5卷
下 , T u M V H l 的抗血清吸附到的 S A 和 T u M V H , 的病毒粒体相对数量没有明显差异 。 自然感染的番
红花叶片 、 接种 s A 的克里芙兰烟叶片 、 以及接种 T u M V c Z 的小白菜叶片的冷冻干粉 ,分别按倍比
稀释后用 T u M v c 。 的抗血清免疫修饰后测得三种接种材料 中的抗原的稀释终点均为 16/ 4 0 。
以上试验结果表明 s A 与 T u M V H . 和 C Z 分离物均有十分紧密的血清学关系 。
.2 5 田间调查
对从德国 、 日本引进的 50 余个番红花病样进行了生物学测定 、 病毒粒子检查和血清学测定 ,证
明其病原均为 T u M v 。
图版 .
1
. 用 T u M v 抗血清吸附的 S A 病毒粒子 ( 1 5 6 0 0 丫 )
2
.
T u M V 抗血清对 s A 病毒粒子的修饰 ( 1 6 4 0 0 0 火 )
P】a t e 皿
F百9 . 1 Im m u n e 一 o bs o r P t io n o f S A 四 r t ie les w i t h 之h e a n r i s e r u m o f T u M V ( 1 5 6 0 0 0火 )
F 19
.
2 氏 e o r a t i o n o f S A p a r t i e l es w i t h t h e a n t五s e r u m o f T u M V ( 16 4 0 0 0 又 )
3 讨 论
据报道 ,侵染莺尾科植物的病毒主要有 IM V 、 I MM v 、 BY M v 、 C M v 和 T R v 等〔 , · 3 , 7 〕 。 S A 的病毒粒
体为线形 ,病叶组织中能产生柱状内含体 , 因而排除了 c M V 和 T R V 的可能性 。 生物学测定表明 , S A
的寄主范围与 IM M v 和 IM v 类似 〔刁· ’ 〕 ,而与 B YM v 不同 〔8〕 。血清学测定表明 s A 与 T u M V H ; 和 cl 分
离物具有十分密切的血清学关系 。 根据生物学 、 血清学和组织病变的特点 , S A 被鉴定为 uT M V 的番
红花分离物 ,这是首次报道番红花为 T u M V 的一个新寄主植物 。 由于文献报道的 IM M V 和 IM V 没
有进行深入鉴定 ,作者推测 T u M V 与前人报道中侵染该作物的 IM M V 和 IM V 可能为同一病原 。
T u M V 多数株系的柱状内含体的横切面上同时具有卷筒状和片层状结构 , 风轮状外臂 ( lP at e )
卷曲数量少 〔 3〕 。 本文报道的病毒分离物 S A 的柱状 内含体结构则完全符合上述特征 。 在感染的克里
芙兰烟的细胞中还存在 K a m ie 等 ( 19 6 8) 报道的成单层排列的 T u M v 病毒粒子的结构 〔的 。
根据多年调查测定结果 ,作者认为 T u M v 可能是普遍引起番红花衰退和花叶病的主要病原 。
4期 陈集双 、 李德葆 :侵染番红花的芜蓄花叶病毒 6 3 5
参 考 文 献
勺é介 Jù esǐ 5广n ǎ IJftró厂.〔 1〕 薛小红 8 1 9 9, 杭 州科技 1 0 : 16一 18
〔2 〕 K Ii n k o w s k j M . 1 9 7 7 , P f l a n z l一e h e V i r o l o g i e B a n d 4 , D i e V ir o s e n
a n Z i e r P f la n z e n , G e h o l z e n u n d w i l d Pf la n z e n i n E u r o P a , eB
r l in
A k a d e m i
e 一 v e r la g 19 7 7 : 2一 7
〔3〕 C a io l a M . G 1 9 8 2 , P h y t o叩 t h . 2 . 1 0 : 9 2一 9 5
〔4〕 赵培洁等 19 9 0 中药材 13 : 4~ 6
〔8 〕
〔9〕
E d w a r d s o n J
.
R
. e t a l
.
1 9 8 4
, P h y t o P a t h o l o g y 7 4 : 1 1 11~ 1 1 14
徐均焕 、 李德葆 病毒学报 8 : 17 4 ~ 1 78
B r u n t A
.
A
. , 1 9 8 6 , I r is m i ld m os a ie v i r u s
, I n : D e s e r iP t i o n s o f
P l a n t V i r u s es
.
C M I / A A B
, 1 9 8 6
, N o
.
3 2 4
1 ) e r k s A
.
F
.
L
.
M
e t a l
.
19 8 5
, A e t a H or t i e u l t u r a 1 6 4
: 30 9 ~ 3 17
K a m e i T
.
e t
.
1 9 6 9
,
P h y t o P a t h o l o g y 5 9 : 13 9 ~ 14 3
A T U R N I P M O S A I C V IR U S IN F E C T IN G C R O C U S S A T I V U S
C h e n J i s h u a n g L i D
e
b a o
( I n
s t it u t e o f B i o t e e h n o l o g y , Z h e j i a n g A g r i e u l t u r a l U n i v e r s i t y , H a n g z h o u 3 10 0 2 9 )
A v i r u s i s o l a t e w a s o b t a i n e d f r o m im Po r t e d e r o e u s (阶~ as t
及姗 ) s h o w i n g m o as i e s y m P t o m s . 3 9 p la n t
s P
e e i e s f r o m 1 1 f a m i lie s h a d b e e n t e s t e d
,
i n w h i e h 1 4 s Pe e ie s w e r e i n f e e t e d
.
S y s t
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a n d s y s te m i e m o as i e o n
a b o u t 7 0 0 ~ 8 0 0 n m i n
l e n g t h
.
I S E M
-
C y l i n d r i e a l i n e l u s i o n b o d i e s w i t h s e r o l ls a n d la m i n a t e d a g g r e g a t e s w e r e o b s e r v e d i n i n f e e t e d Pl a n t s
,
d
e e o r a t i o n t e s t s s h o w e d th a t t h
e is o la t
e h a d e lo s
e r e l a t i o n s h i P w i t h t w o id
e n t i f i
e d t u r n i P m os a i e v ir u s
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e s f r o m 肠。吕史〔u s PP二 O n b a s is o f t h e s e e h a r a e t e r is t ie s , th e is o l a te S A w a s e o n s i d e r e d t o b e id e n ti e a l t o
T u M V
.
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K e y w o r d s : 价￡义: 2` , as 艺乞姗
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T u r n i P m os a i e v ir u s