全 文 ：药 物 研 究
The medicine study
基金项目:伊犁哈萨克自治州科技计划项目 (YZ201201032)。
作者简介:杨元华 (1969 －) ，男，高级讲师，主要从事药理学教科研工作。
白番红花球茎提取物对小鼠急性毒性的实验研究
杨元华1 刘 静1 韩汝春1 陈媛媛1 孙 艳2 周冬梅2 牛 榕2
1. 新疆伊宁卫生学校，新疆 伊宁 835000;2. 新疆伊犁州友谊医院，新疆 伊宁 835000
【摘 要】 目的:观察白番红花球茎提取物对小鼠的急性毒性反应，评价其安全性，为其新药开发和临床安全用药提供理论依据。
方法:采用急性毒性实验方法，对小鼠 ig不同浓度 (88. 80、93. 86、99. 20、104. 86、111. 00g /kg)的白番红花球茎提取物，观察并记录小
鼠的活动和毒性反应;采用改良寇氏法计算白番红花球茎提取物对小鼠 ig的半数致死量 (LD50)和 95%的可信区间。结果:白番红花球茎
提取物对小鼠 7d内 ig的 LD50为 100. 46g /kg，其 95%的可信区间为 91. 42 ～ 109. 50g /kg。结论:白番红花球茎提取物有较小的毒性，该结果
为其药效学实验和临床应用提供了科学依据。
【关键词】 白番红花球茎;急性毒性;半数致死量
【中图分类号】Ｒ285. 5 【文献标志码】A 【文章编号】1007 － 8517 (2015)05 － 0023 － 02
Acute Toxicity of the Crocus Alatavicus Ｒegel et Sem Sativus Corms Extract on Mice
YANG Yuan-hua1，LIU Jing1，HAN Ｒu-chun1，CHEN Yuan-yuan1，SUN Yan2，ZHOU Dong-mei2，NIU Ｒong2
1. Xinjiang Yining health school，Yining 835000，China;
2. Xinjiang Yili Prefecture friendship hospital，Yining 835000，China
Abstract:Objective To observe acute toxicity of the Crocus alatavicus Ｒegel et Sem sativus corms extract in mice，evaluate its
safety，provide a theoretical basis for new drug research and clinical safety of medication． Methods To record its activity and toxicity
in mice by Acute toxicity test method，The mouse ig with different concentrations (88. 80、93. 86、99. 20、104. 86、111. 00g /kg)
of Crocus alatavicus Ｒegel et Sem sativus corms extract;Using Karber method modified to calculate Crocus alatavicus Ｒegel et Sem
corms extract on mice ig median lethal dose (LD50)and 95% confidence intervals． Ｒesults Crocus alatavicus Ｒegel et Sem sativus
corms extract on mice 7d ig LD50 is 100. 46g /kg，Its 95% confidence interval 91. 42 ～ 109. 50g /kg． ConclusionCrocus alatavicus Ｒe-
gel et Sem sativus corms extract had lower toxicity，It provide a scientific basis for pharmacodynamic experimental and clinical applica-
tions．
Key words:Crocus alatavicus Ｒegel et Sem sativus corms;Acute toxicity;Median lethal dose
白番红花 (Crocus alatavicus Ｒegel et Sem)是鸢尾科番
红花属的多年生草本植物，主要分布在新疆伊犁地区各县
的山坡上 (海拔 1200 ～ 3000m) ，物产资源丰富。白番红花
球茎是白番红花的地下球茎，又称土马钱子，是哈萨克族
民间常用药物，在民间主要是捣碎放入马奶子中服用，用
于治疗风寒湿痹、跌打肿痛、腰脚无力等疾病。目前该药
的文献记载很少，只是对白番红花的植物形态有所描
述［1 － 3］，对白番红花球茎提取物毒性研究未见报道。本实
验对白番红花球茎提取物进行了小鼠灌胃急性毒性研
究［4 － 6］，为其进一步药效学实验提供理论依据。
1 材料与仪器
1. 1 药材 白番红花球茎采于新疆伊犁察布查尔锡伯自治
县海拔 1500 米的山坡上，经新疆维吾尔自治区药品检验所
主任药师刘勇民鉴定为鸢尾科番红花属多年生植物白番红
花的球茎。药材晾干，粉碎成粗粉备用。
1. 2 动物 昆明小鼠，SPF级，雌雄各半，18 ～ 22g，由新
疆医科大学动物实验中心提供，许可证号:SCXK (新)
2003 － 001，雌性未产无孕，自由摄食和饮水，室温保持 18
～ 22℃，相对湿度 40% ～70%，实验前适应 3d。
1. 3 仪器 电子天平;ＲE － 2000A旋转蒸发仪 (上海亚荣
生化仪器厂) ;SHZ － D (Ⅲ)循环水式真空泵 (上海卫凯
仪器设备有限公司卫凯) ;电热恒温水浴锅 (北京永光明医
疗仪器厂) ;注射器;小鼠灌胃器等。
2 方法
2. 1 药物制备 称取白番红花球茎粗粉 100g，加 1000ml
60%的乙醇于水浴上加热回流 2h，过滤，提取 2 次，合并
滤液，于旋转蒸发仪上浓缩至无醇味，得浓缩液 54ml (每
毫升浓缩液相当于 1. 85g 生药)备用，用时再用蒸馏水配
成相应浓度。
2. 2 急性毒性实验 预试验找出药物对小鼠的最大不致死
量 Dn为 88. 80g /kg和最小全致死量 Dm为 111. 00g /kg，共分
5组，求出组间比 r 为 1. 057;正式试验:选取昆明小鼠 50
只，雌雄各半，随机分成 5组，每组 10只，给药前 12h均禁
食不禁水，分别按照预试验结果 88. 80、93. 86、99. 20、
104. 86、111. 00g /kg药物剂量，依次给 5 组小鼠灌胃一次，
连续观察并记录 7d 内出现的中毒症状、死亡情况，并对死
亡小鼠立即解剖，肉眼观察记录主要损害的器官及病理变化
情况，最后根据各组动物死亡数，计算出小鼠口服白番红花
球茎提取物的半数致死量 (LD50)和 95%的可信区间。
3 结果
3. 1 一般症状观察 白番红花球茎提取物随剂量的升高，
小鼠表现为安静、活动减少、饮食减少，未死亡小鼠观察 4
～ 6d基本恢复正常。中毒死亡的小鼠主要在 72h 内，中毒
死亡的小鼠外观主要表现为嘴、鼠尾、眼球等处发紫;解
剖后发现胃肠胀气，肝脏发黑。
3. 2 LD50测定 小鼠 ig白番红花球茎提取物，随剂量增大
死亡率增加，各剂量组小鼠死亡状况见表 1，根据改良寇氏
(Karber)法计算半数致死量 (LD50)为 100. 46g /kg，其
95%可信区间为 91. 42 ～ 109. 50g /kg。
(下转第 27 页)
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中国民族民间医药
Chinese journal of ethnomedicine and ethnopharmacy
药 物 研 究
The medicine study
3. 2 细胞凋亡率 如图 2，横坐标代表 Annexin V － FITC
的荧光强度，纵坐标代表 PI 荧光强度，均采用对数坐标
轴。左下象限为正常细胞，右上象限为坏死细胞，右下象
限为凋亡细胞。经藤茶提取物处理 24h 后，凋亡细胞明显
比对照组多，且有量效依赖关系 (表 1)。坏死细胞结果类
似凋亡细胞。
表 1 不同剂量藤茶提取物对 LNcap细胞的凋亡作用 (x ± s，%)
组别 n 凋亡率 /%
对照组 3 4. 88 ± 1. 27
低剂量组 (25μg /ml) 3 9. 19 ± 1. 16*
高剂量组 (50μg /ml) 3 12. 67 ± 1. 08＊＊
注:与对照组比较，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01。
4 讨论
据文献报道，藤茶提取物对多种人癌细胞都有很好的
抑制作用。但除本课题组外，鲜有见到关于抗前列腺癌的
报道［3 － 4，7］。我们前期研究发现藤茶提取物在较低浓度下即
对 LNcap细胞有明显的增殖抑制作用，并推测凋亡诱导可
能是其发挥抗肿瘤作用的一个途径。
流式 Annexin V /PI 双染法是较为灵敏的细胞凋亡测定
方法，通过 Annexin V － FITC 和 PI 双重荧光标记以区分正
常细胞、早期凋亡细胞和坏死细胞。生长旺盛的 LNcap 细
胞经过消化、洗涤、离心等操作也有一定比例的细胞凋亡
和坏死，但发生率较低。在加入藤茶提取物处理 24h 即发
现肿瘤细胞的凋亡率显著上升，且呈量效依赖关系。提示
藤茶提取物可能激活肿瘤细胞的信号通路，诱导肿瘤细胞
凋亡，从而发挥抗肿瘤作用。
参考文献
［1］ 中国科学院植物所． 中国高等植物图谱补编第 2 册 ［M］． 北京:科学
出版社，1983:242．
［2］ 陈晓明，倪峰． 藤茶药理作用研究进展 ［J］． 海峡药学，2010，22
(1) :16 － 17．
［3］ 周春权，姚欣，陈晓明，等． 藤茶提取物的抗肿瘤作用研究 ［J］． 中
药新药与临床药理，2011，22 (6) :640 － 642．
［4］ 倪峰，姚欣，郭丹，等． 蛇葡萄素对人前列腺癌 PC3 细胞增殖与凋亡
的影响 ［J］． 中药药理与临床，2012，28 (3) :39 － 41．
［5］ 倪峰，周金荣． 蛇葡萄素及富含蛇葡萄素的总黄酮有效部位在制备防治
前列腺癌药物中的应用:中国，ZL200810071687. 2 ［P］． 公告日期．
［6］ 周春权，倪峰，林静瑜，等． 藤茶提取物的超声提取及含量测定 ［J］．
中华中医药学刊，2011，21 (3) :2312 － 2314．
［7］ 姚欣，倪峰，郭丹，等． 蛇葡萄素对人乳腺癌 MCF －7 细胞增殖与凋亡
的影响 ［J］． 福建中医药大学学报，2014 (1) :22 － 23．
(收稿日期:2015. 01. 15
檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾
)
(上接第 23 页)
表 1 白番红花球茎提取物对小鼠急性毒性实验死亡率的影响
组别
动物数
/只
剂量
(g /kg)
死亡数
(只)
死亡率
(%)
P P2
1 10 88. 80 0 0 0 0
2 10 93. 86 3 30 0. 3 0. 09
3 10 99. 20 4 40 0. 4 0. 16
4 10 104. 86 6 60 0. 6 0. 36
5 10 111. 00 10 100 1 1
4 讨论
急性毒性实验是药物安全性评价的第一步，为全身给
药的毒性研究内容之一，它可以为今后长期毒性实验、特
殊毒性实验和药效学实验等研究的剂量选择和指标设计提
供参考依据。本次急性毒性实验的结果小鼠 ig 白番红花球
茎提取物的 LD50为 100. 46g /kg，其 95%可信区间为 91. 42
～ 109. 50g /kg，如按白番红花球茎生药、药理实验中动物
间和动物与人体间的等效剂量换算［7］，相当于成人 (60kg)
用 669. 7g生药量，而该药材在民间最高用量为 9g，则相当
于成人用量的 74 倍，根据化学物质的急性毒性分级标准，
该药材属低毒药材。由于该药材有一定毒性，因此在哈萨
克族民间使用时一定要注意适应症、剂量、疗程等，以防
毒性反应的发生。
参考文献
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疆科技卫生出版社，1996:563．
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［M］． 北京:科学出版社，1985:122．
［4］ 徐淑云，卞如濂，陈修． 药理实验方法学 ［M］． 3 版． 北京:人民卫
生出版社，2002．
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［J］． 时珍国医国药，2012，23 (10) :2542．
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效剂量换算 ［J］． 中国临床药理学与治疗学，2004，9 (9) :1069．
(收稿日期:2014. 12. 10)
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