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v斌a 1987 ; P a ir s ,肠m e l , 13 l p . et oT me l , 22 8p .
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旱柳叶中抗血栓 、 抗动脉硬化活性成分的研究
吉林农业大学中药材学院 (长春 1301 18) 张 晶 郑毅 男 韩立冲 `
摘要 本文从早柳叶中分离并鉴定了 3 个单体化合物 , 即芹黄素一7 一 0 一件D一毗喃葡萄糖醛酸贰 、 木择
草素一7 一 -o 件-D 毗喃葡萄糖醛酸贰及化合物 1 。 前两者为首次从柳属植物叶片中获得 , 后者为首次发现
的新化合物 。 测定它们对花生四烯酸代谢的影响 ,结果发现 :它们均可选择性抑制花生 四烯酸代谢产物
12
~
HD陀 的生成量 ,预示它们可防治动脉硬化及过敏症 ;芹黄素一7 一。 件D一毗喃葡萄糖醛酸贰水解后的贰
元芹黄素可抑制 .以几 的生成量 ,提示其对血栓的形成有防治功效 。
关键词 早柳叶 芹黄素 一7 一 -o 件-D 毗喃葡萄糖醛酸贰 木梅草素一 7 一仆卜卜毗喃葡萄糖醛酸贰
旱柳 叶是杨柳科柳属植物旱柳 (阮撇 恻-`战勿an oK idZ )的叶片 , 据载 “ 旱柳嫩叶或枝叶 ,
其性寒 、 味微苦 , 具散风 、 祛湿 、 清湿热 、 治
黄疽型肝炎 、 风湿性关节炎 、 湿疹 、 地方性 甲
状腺肿等功效 ” 〔’ 〕。 旱柳叶化学成分的研究目
前国内外尚未见报道 。 现将旱柳叶化学成分的
分离鉴定和药理活性测试结果报道如下 。
1 材料与方法
中药材第 2 卷第 3 期 19卯 年 3 月
1
.
, 实验材料 旱 柳 ( as 低 anI tS I拓阮an )叶 : 5
月 中旬采集于吉林农业大学校 园内 , 采后室温
阴干 。 实验动物 : iw s atr 鼠 , 150 一 20 9 。 ’ 4 c 一标
记花生 四烯酸购 自 N ew E n gl a n d Nuc leal 。 高效
薄层板 ( H团几C ) : 德国 eM er k 公司生产 。 其它
试剂均为分析纯 。
1
.
2 实验方法
,
.
2
.
1 化合物 的分离 : 干燥柳叶用 乙 醚脱脂
13 1
DOI : 10. 13863 /j . i ssn1001 -4454. 1999. 03. 014
了 19个信号 ,其中有黄酮化合物的特征信号 6
164
.
1即m ( C一2 ) , a 102 . 6 p p m ( C 一 3 )和 a 18 1 . 86
p p m ( C
一
4 ) ;且在 台 17 2 . 3 即m 处有 一 e o o H 信号 ,
所以 ,此黄酮 化合物 的糖部应 为葡萄糖醛酸 。
由 D ErP 谱图可知 , 此化合物结构中有 9 个季
碳 , or 个亚甲基碳 。 其 13 c 一N M R 信号归属见表
1
, 与参考文献值一致 。 综 合分析结果 , 化合物
工为芹黄素一 7一 O 一p一D 一毗 喃葡 萄糖醛酸 贰 ( aP i·
罗n i n 一 7一 O一 p一D 一咖 e o py la n s ide ) 。
表 1 化合物 1 的13 C~ NM R 信号归属
碳号 柳 m 碳号 如mP 碳号 柳m
C
一
2 164
.
15 C
一
9 1 56
.
87 C
一
6
,
118
.
24
l’尹罗4’5-CG
后用 95 % 乙 醇浸 提 , 减压 浓缩 乙 醇相 , 将 得
到的乙醇浸膏溶于少量水 中 , 然后依次 用苯 、
二氯甲烷 、 乙酸乙醋 、 正丁醇 、 水萃取 。 将正
丁醇层浓缩后溶于少量甲醇中 , 将甲醇的上清
液过葡聚糖凝胶 LH 一20 柱 , 用 甲醇洗脱 , 洗下
的流分用 n 刃 检验 (展开剂是 乙酸 乙醋 : 丁醇 :
甲酸 : 水 二 5 : 3 : 1 : 1 ) , 合并相 同部分 , 得 到 4
个单体化合物 , 即化合物 工、 化合物 n 、 化合
物 m 、 化合物W ; 将正丁醇浸膏过聚酞胺柱后
再将所得各部分分别过葡聚糖凝胶 LH 一20 柱就
得到另外 3 种化合物 。
1
.
2
.
2 活性测定 : 采大 鼠的血 , 加人 or % 血
液量的 3 . 8%拘榜酸钠抗凝 , 离心分离富血小
板血浆 ( P RP ) ,再将 PRP 离心后取血小板 (蛋
白含量 2 一 3 m g/ 时 ) 。 将样品 20 川与从鼠血中
得到的血小板 130 川混合 。 在 37 ℃水溶 中孵
化 5 而 n , 加人 50 风14 c 一标记的花生四烯酸 ( 7 . 4
/
l0’ B q/ 诫 )3 7 ℃继续保温 5 而 n , 加人 20 川
0
.
5 m o F L 甲酸停止反应 。 用乙 酸乙 醋充分提
取 、 离心 , 上层液移人离心试管 中 , 从 气流
干燥 。 干燥后加人 40 川 乙酸 乙醋并将其全部
点于薄层板上 , 展开 , 放射自显影 。 剪下薄层
板上 xT 残 及 12一 H E TE 位置斑点 , 用贝克曼液
闪计数仪进行放射量测定图 。
2 结果
2
.
1 结构鉴定
2
.
1
.
1 化合物 工: 黄色颗粒状结 晶 (甲醇 ) ;
m p3 2 1 一 32 ℃ , 易溶于 水及 甲醇 ; fR = .0 64
( E t 0 A
e 一 Bu t an o n e
一
fo耐e ac id一姚O 二 5 : 3 : 3 : l ) ;
HC I
一
M g 反应 ( + ) ; N aO H 反应 ( + ) ; 从C13 的纸
斑反应在紫外灯下显黄色荧光 。 这些现象提示
此化合物为典型的黄酮化合物 。 由质谱确定分
子量为 科 6 , 分 子式为 2C ; H 18 0 1 1。 其 `H 一NM R
谱给出 18 个质子信号 ,归属分别为 : 招 . 15 一 3 . 24
( 4H
,
m
,糖上 的三个经基质子 ) , 3 . 2 6一3 . 8 0 ( 4 H ,
m
,糖上质子 ) , 5 . 0 7 ( I H , d , J 二 6 . 9 H z > 4 zH 提
示此糖为 件D 构 型 , H一 l 即 ) , 6 . 3 8 ( r H , d , H 一 3 ) ,
6
.
7 2 ( ZH
,
t
,
H
一
6
,
4
` 一
O H )
,
6
.
8 5 ( ZH
,
d
,
J
= 8
.
5
zH )
,
7
.
45 ( I H
,
t
,
H
一
8 )
,
7
.
7 8 ( ZH
,
d
,
J 二 7 比 , H -
2
, ,
6
,
)
,
12
.
9 3 ( I H
, s , 5
一
O H )
。 `3 C一N M R 谱图显 示
1 32
·
102
.
5 8 C
一
10
181
.
84
16 2
. 以
C
一
1
’
C
一
2’
105
.
2 1
120
.
1 8
9
.
55
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.
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C
一
3
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C
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4
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12 8
.
24
1 15
.
7 3
9 46
72
,卯
7 3 80
7 1
.如
98
,
4 8 C
一
5
1印 . 90
1 1 5
.
73 C
一
6
即
76
.
40
172
.
30
q尸41、ù67只é-Cc
2
.
,
.
2 化合物 fl : 淡 黄色 颗粒状晶体 , mP >
340 ℃ , 易溶于 水及 甲醇 , H CI 一M g 反 应 ( + ) ,
N aO H 反应 ( + ) 。 提示化合物 1 为黄酮类化合
物 。 fR = 0 . 4 1 ( n Bu o H一HA e 一从。 = 4 : l : 5 , 上层 ) 。
根据 M S 图谱可知此物质分子量为 462 , 分子式
为 几 I 1H 8 ol Z 。 其 D E rP 图谱显示该化合物有 IC
个季碳 。 `3NC M R 图与化合物 工的图谱相 比较 ,
除 C一 3 `的化学位移值不同外 ,其余非常相似 (信
号归属见 表 2) , 结合 , HNM R 图谱和 M S 图谱 ,
确定化合物 H是木择草素一 7 一。 一俘一 D一毗喃葡萄糖
醛 酸 贰 ( 玩 t e l io n 一7一。 一日一 D一 glu c o p ym n s id e ) 。
其` HN M R 信号归属分别为 : 6 3 . 16 一 3 . 34 ( 4 H , m ,
糖部经基质子 ) , 3 . 3 9一3 . 8 6 ( 4 H , m , 糖部质 子 ) ,
5
.
0 8 ( I H
,
d
,
J
= 7 珑 , H一 l ” ) , 6 . 3 9 ( I H , d , J 二 1 . 5
112
,
H
一
3 )
,
6
.
6 ( I H
, s , H
一
6 )
,
6
.
7 4 ( I H
,
d
,
J 二 2
.
3
zH
,
H
一
8 )
,
6
.
8 5 ( I H
,
d
,
J
= 8
.
5 H z
,
H
一
5
`
)
,
7
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( IH
,
dd
,
J
二 8
.
5 12
,
H
一
6
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)
,
7
.
8 5 ( I H
,
d
,
J
二 8
.
,
zH
,
H
一
2
`
)
。
2
.
1
.
3 化合物 1 : 根据已有信息可知其为酚
贰类物质 , 其结构尚有待于进一步鉴定 。
中药材第 2 卷第 3期 19 9年 3 月
表 2 化合物五的 13. C NR M [信号归属
碳号 6即n l
C
一
2 164
.
51
碳号 占pP m
1 56
.
8 9
碳号
C
一
6
`
ap P m
1 18
.
93
C-9c lI2肠4
l能 . 6 9
18 1
.
76
l印 . 96
9
.
4 5
162
.
9 1
c-34 C S6 G翻
C
一
8 4 9
.
4 7 C
一
5
1 05
.
2 C
一
1
即
9
.
4 5
12 0
.
9 5C
一
2’ 72 . 93
113
.
3 3 C
一
3
”
73
.
78
146
.
0’ 7 C梁 71. 9 5
1 5 0
.
7 3 C
一
5
,
76
.
4 3
1 16
.
03 -C 6
即
172
.
12
2
.
2 药理 活性研究 利用放射自显影的方法
研究了化合物 工、 n 、 nI 对花生四烯酸代谢途
径的影响 。 实验结果表明 , 芹黄素一 7 一O 一俘一D 一毗
喃葡萄糖醛酸贰 (化合物 I ) 、 木择 草素一 7一 0 一日-
D
一毗喃葡萄糖醛酸贰 (化合物 fl ) 、 化合物 1 对
花生四烯酸代谢产物一 12 一H E T E 的生成量均有
抑制作用 , 且抑制作用的强度随样 品浓度的增
大而增强 。 将化合物 工经水解后 , 其贰元芹黄
素对 xT 几 的生成量也有较强的抑制性 ,作用强
度随浓度增大而增强 。
3 讨论
3
.
, 旱柳叶 (叙玩 动以劫之功阮 an )为 《中药大词典 》
收载的柳属药用植物 。 本研究从早柳叶中分离
得到了 3种 天然单体化合物 , 其中芹黄素 一7 -
O
一
p
一
D
一毗喃葡萄糖醛酸贰 、 木择草 素一7一 O 一日一D -
毗喃葡萄糖醛酸贰为首次从柳属植物中分离到
的已知成分 , 另一物质为首次发 现 的新化合
物 。
3
.
2 药理研究表明此 3 种单体均具有抗血
栓 、 抗动脉硬化的活性 。 我国柳属植物大约有
21 0 种 , 全国分布广泛 , 资源相 当丰富 。 从本
实验的研究结果来看 , 从柳叶中提取出更多的
具有抑制花生四烯酸代谢途径 的天然化学成分
是完全可能的 , 这将为中医药的研究 , 特别是
对防治血栓症 、 动脉硬化及过敏性疾病提供新
的解决途径 。
二 日本爱媛大学医学部第二教室
参 考 文 献
1 江苏新医学院 . 中药大辞典 (上册 ) . 上海 : 上海科
技出版社 , 19 7 : 1 23
Z eK 七。 跳峪y a , et 滋 . B ico he 而 c以 明d iB 叩hy s ic al eR -
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( 19 9 8
一 12 一 17 收稿 )
1幽, la 廿o n of R se is血 g T七州” n b su a n d A州比ir以 le n 粥 15 C o m op . 以 15 in l潇级 v se of 撇石沐州目翻姚如饥
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,
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o l e 罗 of Ch i n舰 M曰山c i ne Maet d al , ilJ n A r幼 e ul t u alr 枷 v o iyt , e h al 唱c hun 130 1 15 )
A饭泊 , tC 玩 iht s aP per
, th er e e o m即 un 击 ~
i sol at 司 a n d ids 幻t i 6ed fn 犯 1 ht el e~ of 叙玩 切。 。 U山朋
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T h e y 0 ap i
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罗 in 一 7一压件-D咖 c叩打 a sn lde ( I ) , lu t e o il -n 7一 -0 卜压砂u c o p卿招i d e ( n ) , c om即 tm d m . C o n 】卯 un d 工 and n aer isol a ted if srt -
卜加m 划认 sP . , c o m op un d 皿 is fo 山记 if sr il y i n ht e wo ldr . uF hlt e n on er , s t u dy on e任ce t of ~ ih do in o ac 记 m e t al 刃liis in n art禅a t e le st 场 山e m iw ht m id -o c ll r o ll la t o脚 p ll y fo l川( 1 ht at ht e y c an ia g 云Il c an u y iihn ibt het p耐 l l c it on of lZ ~ I狂: rE ( 12小 y dm xy’ 5 , 8 ,
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1牛 ie c o 翻狱e t r a e n o l c ac 记 ) , ihw ch
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肠gn hydor ly喇 aws 即i ge m n , it c an i ihn ibt xT 玩 (山功功。 x an e 几 ) ihw ch c an i n d t l c e p la tel et a婴 e g a it on .
K ey w or ds L阳 v es of 划舫 用。。 之川山姐 ; Ap i罗币, 7一压件-D砂u e o p” 翅妈 ide ; 恤即五, 7一压卜-D砂cu o p尹 asn i d e
作者来稿须知 来稿须经作者所在单位审查同意 ,
本人负责。 本刊一律不退稿 , 请留底稿 ; 如确需退者 ,
行处理 。
并附函介绍 。 不一稿二投 , 否则由此引起的后果 由作者
请来信说明并附邮资。 满 6 个月收不到用稿通知 , 可另
中药材第 2 卷第 3 期 1 99 年 3 月