全 文 ：鸡肝散总黄酮抗胸痹证的实验研究
楼 洪刚 ’ 何俏军 2吴洪海 2楼宜嘉 ,
( L 浙江 大学医学院附属第二 医院 , 杭州 3 10 0 0 9 ; 2 . 浙江 大学药学院药理 学与毒理学研 究室 , 杭州 31 0 0 3 1)
摘要 目的 :研究鸡肝散总黄酮 ( oT alt n va ()1I e for m lE s h(, lz l(I l) aI dl( , , ,rF E )B 抗冠脉结扎诱发大鼠胸痹证之功效
及其机制 方法 :雄性 SD大鼠 19 T FE B S天 , 结扎冠脉左前降支 ( le ft a n t e r io r d e s e e n d i n g e o or n a理 a rt e r y , I AD )造成
大鼠胸痹模型 , 3 h 后处死大鼠 ,取左心室 , 氯化硝基四氮哇蓝 ( n ir or t e t r a z o li u m b l u e 。 h lo r i d e , N B r )染色以区分梗死
区和非梗死 伏 , 计算心肌梗死指数 ; 另取心室肌心尖部分做组织切片 , H E 染色 , 光镜检查心肌的损伤程度 , 评价
T F E B 对胸痹证的作用 取血清测定一氧化氮 ( iN itr o ox id e , N O) , 探讨 T F E B 抗胸痹证的机理 结果 : T FE B 各剂量
组均可显著减少大鼠冠脉结扎后左室梗死区的心肌重量 , 心肌梗死指数明显减小 ( P < 0 . 05 一 0 . 01 ) , 呈良好的剂量
依赖关系 光镜检查结果显示 ,假手术组心肌形态学无明显改变 , 肌纤维完整 , 心肌细胞排列整齐 ;溶剂组心肌纤
维大范围肿胀 、断裂 、坏死融合 , 并可见心 肌细胞破裂 ; T F E B 各组心肌病理性变化程度都较溶剂组减轻 『伴 E B
10
、
15 0 m岁 k g 均可显著降低大鼠冠脉结扎后血清中 N O 含量 ( P < 0 . 05 一 0 . 01 ) 。 结论 : T F E B 能对抗大鼠冠脉结
扎诱发的心肌缺血 , 具有对抗胸痹证之功效 , 其机制可能与 T F E B 降低血清 N O 含量有关 厂〕
关键词 鸡肝散 胸痹证 心肌缺血 总黄酮 一氧化氮
鸡肝散为唇形科香蕾属植物 四方篙 E八ho Z蕊a
bl an d(l ( B
e nl h
.
) eB nt h
. 的全草 , 主要产于我国西南
部温暖地区 ,资源十分丰富。 据《中华药海》 、 《云南
中药资源名录》等记载 , 本品性凉 、 味苦微辛 , 人肝 、
肺二经 ,具清肝明目 、清热解表 、 消炎止痛等效 , 当地
哈尼族 、拉枯族民间主要用于治疗眼睛疾患 , 同时对
胸痹证也有明显的改善作用 。 本研究按照国家药品
监督管理局《药品注册管理方法的要求》 (试行 ) 的
要求 ,采用冠脉结扎诱发大鼠胸痹证的动物模型 ,观
察鸡肝散总黄酮 ( T o t a l fl a v o n e fr o m lsE h o l招 i a b l a n -
d a
,
TF E B )对胸痹证的保护作用 , 并探讨其作用机
制 二
, 实验材料
1
.
1 实验动物 Sp r a g e 一 D aw l e y 大鼠 , 占 , 体重 2 2 0
土
20 9
, 由浙江省实验动物中心提供 (动物质量合格
证号 : 浙实动单项准第 2 0 0 1001 号 2 001 年合格 )
1
.
2 实验仪器 M ed l a bs . 5 生物信号采集系统 : 南
京美易公 司产品 ;动物人工呼吸机 : D H 一 150 型 , 浙江
大学医学仪器厂产品 。
1
.
3 实验 药品与试剂 鸡肝散 ,产于云南元阳县 ,
由 云 南 金 殿 制 药 厂 鉴 定 为 lE hs ol itz a b al n da
( B e
,、 th
.
) B
e n t h
. 的全草 , 并由其提供 。 T FE B , 由本
院中药与天然药物研究室制备 , 批号 2 2 0 502 , 浅黄
色粉末 ,总黄酮含量为 92 . 5% ,临用前加 0 . 5% CM C
溶液研磨成所需浓度的混悬液 。 心血康胶囊 ( C ap -
s u l e x i n x u e k a n g
,
X x K )
,成都地奥制药集团有限公司
产品 , 批号 0 2 0 2 0 2 7 , 每粒胶囊含 街体总皂昔 10 0
m g
。 临用前取内容物加 0 . 5% CM C 溶液研磨成所
需浓度的混悬液 ;氯化硝基四氮哇蓝 ( N i t r o t e t r a z o l i -
·
87 8
·
u m b lu e e h l o
r id e
,
N B T )
, 上海恒生应用化学研究所
产品 ; 一氧化氮 ( N it r i C 。 x id e , NO )测定试剂盒 (硝酸
还原酶法 ) : 南京建成生 物工 程研究所产品 , 批号
2 0 0 2 0 7 2 4
。
2 实验方法〔 ’ 、 2 〕
S D 雄性大鼠 9 0 只 , 按 表 1 随 机 分 为 6 组 ,
T F E B 低 、 中 、 高剂量组 分别灌胃 ( 19 ) FT E B 提取物
10
、 巧0 、 20 0 m彭 k g (以总黄酮含量计 , 其中高剂量
为大鼠最大耐受量的 l / 10 ) ,溶剂对照组 咭 4 m l/ k g
0 5% C M C 溶液 , 阳性对照组 19 XX K 15 O m创 k g ( 以
街体总皂昔计 ) ,假手术组 19 4 m l / k g 0 . 5% c M C 溶
液 (只穿线 , 不结扎 ) 。 上述各组大鼠均连续 电给药
5 天 ,于第 5 天 19 后 2 0 m i n , i p 4 o m岁 k g 戊巴比妥钠
麻醉 , 采用 M de lab s . 5 生物信号采集系统连续描 记
一段 E C G , 分离气管后气管插管 , 连接动物人工呼
吸机行人工呼吸 , 呼吸时 比 1 : 2 , 呼吸频率 60 次 /
m in
, 潮气量 3 m ll/ 0 9 。 于左胸第二 、 三肋 间开胸 ,
暴露心脏 ,用细小弯针在动脉圆锥与左心耳之间冠
脉左前降支 ( l e ft a n t e r io r d e s e e n d i n g e o or n a , y a rt e 卿 ,
L AD )下穿一 7 0/ 医用缝合线 ,稳定 5 m in , 结扎冠
脉 ,连续记录 E C G 巧 m in , 缝合胸壁 , 停止人 l 一呼
吸 。 实验过程中 , 以 n 导 E C G T 波或 ST 的 显著抬
高为冠脉结扎成功的指标 ,结扎后 E C G 无变化或变
化不明显的大鼠退 出实验 。 结扎后 3 h 断头处死大
鼠 ,取心脏 ,用 4 ℃生理盐水冲洗干净残 留血液 , 吸
水纸吸干 ,分离左心室称重 , O℃冷冻后将左心室平
均分成 0 . 1 c m 厚的薄片 ,置于 37 ℃ 0 . 5% N B T 液
染色 巧 m in , 10 % 福尔马林固定 ,区分心肌梗死区与
非梗死区 ,分别称重 ,计算梗死心肌重量占左室重量
中药材第 2 6 卷第 12 期 2 00 3 年 12 月
DOI : 10. 13863 /j . i ssn1001 -4454. 2003. 12. 015
的百分比即心肌梗死指数 ( m y ocr ad il a infr act in o in 一 mn i,分离血清 ,采用硝酸还原酶法按试剂盒说明书
d e x )
。 测定 N O 含量 。
上述心脏 , N B T 染色后 , 随机每组抽取 2 个 心 3 统计学方法
脏 ,取心室肌心尖部分做组织切片 , H E 染色 , 光镜 实验数据均以 又士 S 表示 , 采用 SSP S 10 . 0 软件
下观察心肌纤维排列是否整齐 , 有否断裂 、 坏死 ;心 包进行统计分析 ,方差齐性者 ,进行 L SD 检验 , 反之
肌细胞的排列情况 、 形态以及完整性等 , 由此判断心 则进行 D un ne t ’ t 检验 ;均以 P < 0 . 05 为显著性差
肌的病理损伤程度 。 异 。
上述大鼠结扎后 3 h 断头取血 , 60 x g , 离心 or 4 结果
T a b 1 E fe
e t o f T F E B o n m y o e a r d i a l i n afr
e t i o n i n d e x b y L A D lig a t io n fo r 3 h in r a st ( x 士 s )
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T F E B
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.
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1 5 1 士 0
.
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* △ △
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.
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.
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136 士 0
.
0 7 2
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.
4 3 7 土 0 . 09 6 么 △
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.
4 9 1 士 0 . 04 7 * △ △
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.
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.
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.
5 1 4 士 0
.
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.
5 0 5 士 0 . 0 8 2 △ △
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.
6 16 士 0
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.
7 士 9 . 3 △ △
100
15 0
200
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.
4 士 6 . 4
.
3 士 1 1
.
.
1 士 10 .
.
2 土 1 1 .
* 凸 △
. * △ △
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5
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3 士 8 . 8
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, 中 *
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5弧 CM C : △ P < 0 . 0 5 . △ △ p < 0 . 0 1 v s sh a m
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T a b 2 E fe
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4
.
, TF E B 对大鼠冠脉结扎后 心 肌梗死指数的影
响 与溶剂组比较 , T F E B 10 0 、 15 0 和 2 0 0 m g/ k g 均
可显著减少大鼠冠脉结扎后左室梗死区的心肌重量
( P < 0
.
05
一 0
.
01 )
, 增加大鼠左室非梗死区的心肌
重量 ( P < 0 . 05 ) , 心肌梗死指数明显减少 ( P < 0 . 05
一 0
.
01 )
, 并呈 良好 的剂量依赖关 系 。 阳性对 照
X X K 组也有上述变化 ;与假手术组 比较 ,溶剂对照
组 、 阳性对照组及 T F E B 各剂量组大鼠的心肌梗死
指数均有显著增加 。 (见 T a b l 及 F i g l )
4
.
2 TF E B 对大鼠冠脉结扎后心 肌形态学的影响
光镜检查结果显示 , 假手术组心肌形态学无 明显
改变 , 肌纤维完整 ,心肌细胞形态规则 ,排列整齐 ,细
胞核均匀分布 ;溶剂组心肌纤维大范围肿胀 、 断裂 、
坏死融合 , 肌纤维空隙变宽 ,并可见心肌细胞破裂 ,
空泡变性 ,部分呈液化性肌溶解 ; T FE B 各组和 XX K
组心肌病理性变化程度都较溶剂组减轻 。 ( iF g 2)
4
.
3 T F E B 对大鼠冠脉结扎 后血清 N O 含 量的影
响 与溶剂组 比较 , T FE B 10 0 和 15O m创 k g 均可显
著降低大鼠冠脉结扎后血清中 N O 的含量 ( P < 0 . 05
一 0
.
01 )
, 与假手术组 比较 , X X K 增加血清 NO 的含
量 。 ( T a b Z )
中药材第 26 卷第 1 2 期 20 03 年 1 2 月
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.
5 % CM C
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T F E B
T F E B
X X K
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.
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.
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.
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.
0 5
, △ △ P < 0
.
0 1
v s s h a m
5 讨论
“ 胸痹证 ” 的病机为本虚标实 , 中医认为其主要
是由于气滞血疲 、 血脉疲塞所致 。 采用较长时间结
扎大鼠冠脉造成心肌缺血模型 , 与中医 “ 胸痹证 ” 相
似 ,是一种合理 、实用的实验方法 , 能客观 、准确地评
价药物的疗效 ,是研究抗胸痹证药物的经典动物模
型 〔’川 。 本研究结果发现 , T FE B 能显著减少大鼠冠
脉结扎后心肌梗死指数 ,呈 良好的剂量依赖关系 , 明
显改善心肌的病理损伤程度 ,表明 T FE B 对冠脉结
扎诱发的胸痹证有良好的保证作用 。
N O 作为体内重要 的细胞内信使和活跃的自由
基 , 近年研究发现其代谢异常与胸痹证的发生 、 发展
有着密切的关系川 。 N O 在胸痹证中的作用 尚有争
议 , 但较一致的看法 是 , 过多 的 N O , 特别是诱导诱
生型 NO 合成酶 ( iN O )S 激活合成大量 的 NO , 能加
重心肌缺血损伤〔’ 川 。 在本实验中 , 采用较长 时间
结扎大鼠冠脉 ,破坏了冠脉内皮的完整性 ,心肌内皮
·
87 9
·
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应相对较多 , 长期用药仍有明显弊端 〔8〕 。 中药的治
则是在辨证论治思想的指导下 , 通过调节或恢复机
体的生理机能平衡 , 活血化疲通络 , 改善冠脉循环 ,
保护缺血心肌 , 从根本上达到治疗的 目的 ,特别适于
预防和长期 用药 〔8〕 。 开发中药新药作为 预防和治
疗胸痹证的有效手段 ,应该是我国当前新药研制的
重点 。 鸡肝散在我国资源十分丰富 ,且有着民间长
期用药的实践经验 , 具有非常良好的开发前景 。 本
实验的研究为进一步开发 T F E B 奠定 了坚实的基
础 。澎所琳
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4
5
功能受损 , 原生型 NO 合成酶 ( c N O )S 表达减少 , iN -
0 5 表达增加 , 产生大量的 N O , 加重缺血心肌 的损
伤 , T FE B 可能抑制 iN O S , 减少 N O 的产量 , 保护缺
血心肌 。 这可 能是 T F E B 抗胸痹证的重要机制之
6
7
胸痹证 ,属于现代医学冠心病的范畴 ,在 21 世
纪仍被列为重大疾病 〔’ 〕北学药物治疗胸痹证主要
以改善症状为主 ,全身性调理作用不显著 ,且不 良反
8
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:
104 2
~ 10 58
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-
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.
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b e r k e p t in t e幼 ty a n d t h e e a r d i a e m yo e y t e li n e d u p i n o dr e r . W h il e e o n t or l 脚 u p d is p la y e d e x t e n s i v e s w e ll in g , ur p t u r e , e o n fl u e n t , e v e n
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· 中药材第 2 6 卷第 12 期 200 3 年 1 2 月
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、 h o l tz ia 乙la n d a : X io n g b i s y n 一p t o m : M y ( )。吸 rd ia l i s o h e m ia ; T o t a l fl a v o n e : N i t r ie o x id e
复方血栓通滴丸对大鼠体内血栓形成和体外溶栓的作用
张建浩 , 黄巧冰 , 刘玉华 , 黄绪亮 2 赵桂玲 , 潘秉兴 2 网文宏 2 赵克森 ,
( 1
. 中山大学中山眼科中心 ,广州 51 0 0 6 ;0 2 . 第一 军医大学病生微循环实验 室 ,广州 51 05 巧 )
摘要 目的 :研究复方血栓通滴丸对大鼠体内血栓形成和体外溶栓的作用 〕 方法 :用动 一静脉旁路血栓形成法
和体外恒温自然溶解法 , 测定复方血栓通滴丸对大鼠体内血栓形成和体外血凝块溶解作用的影响 。 结果 : 复方血
栓通滴丸各剂量组对体外血凝块有显著的溶解作用 , 对体内血栓形成有明显的抑制作用 。 结论 : 复方血栓通滴丸
具有显著抑制体内血栓形成和溶解血栓的作用
关键词 复方血栓通滴丸 血栓形成 溶栓作用
复方血栓通滴丸是在复方血栓通胶囊的基础上
研制而成 ,其主要成分为三七 、丹参等提取物 。 本文
观察了复方血栓通滴丸对大鼠体内血栓形成和体外
血凝块的溶解实验 ,现报道如下 。
实验材料
药品与试剂 复方血栓通 滴丸 (广东高盛医
药发展有限公司 , 1 9 生药 / g , 批号为 01 0 128 ) , 复方
血栓通胶囊 (广东众生制药厂提供 , 0 . 5岁每粒 ,批号
为 0 10 2 0 2 ) ,戊 巴比妥钠 ( o n i o n 上海分装 ) , 肝素钠
(徐州万邦生化制药有限公司 ,批号为 0 10 4 18 ) 。
1
.
2 仪 器和器械 S盯 tor in s B lA l 0 S 型万分之一
电子天平 (德国 Sar toI’ iu S 公 司生产 ) , 一般手术 器
械 。
1
.
3 动物 S D 大 鼠 6 5 只 , 体重 2 0 0 一 2 5 0 9 , 雌雄
各半 ; S D 大 鼠 5 0 只 ,体重 30 0 一 3 0 5 9 , 雌雄各半 , 均
由第一军医大学动物实验中心提供 。
方法
滴丸对体外血液凝块溶 解的侧定方 法 65
只大鼠按表 1 分成 5 组 , 每组 13 只 。 大 鼠称重后 ,
用 13 . 3% 乌拉坦和 0 . 5% 的氯醛糖按 0 . 6 m l月 0 0 9
的剂量进行麻醉 ,行一侧颈总动脉插管 ,抽取 0 . 3 ml
非抗凝动脉血迅速注人离心管 , 待其凝成血块后小
心取 出 , 吸干沾染的液体部分 ,用 电子天平称重后 ,
将血凝块重新装人离心管 , 按组别加人相应药物 l
ml
,对照组加人等量生理盐水 。 室温静置 24 h 后再
取出 ,吸干沾染的液体部分 , 用电子天平称重 , 比较
给药前后血凝块的重量〔 ’ 、 2〕 。 并依下式计算 :
只大鼠按表 2 随机分成 5 组 ,每组 10 只 。 将 1一 丝
线用生理盐水浸泡后用 电子天平称重并记录 ,将丝
线穿人聚乙烯管 P E 60 内 , 两端各留 1 c m , 并用 60
u / m l 肝素灌注 ,作插管备用 。 大鼠禁食约 12 h 后按
1 m l/ 10 0 g 灌胃相应药液 ,对照组灌胃等容积生理盐
水 ,灌胃后用 13 . 3% 乌拉坦和 0 . 6% 的氯醛糖腹腔
注射麻醉 , 分离大鼠一侧颈 总动脉和对侧颈外静
脉 〔’ 川 ,将准备好 的聚 乙烯导管两端分别插人颈总
动脉和颈外静脉 ,注意外置线头 , 并保持动脉夹关闭
状态 。 待灌胃 l h 后 ,打开动脉夹 ,让血流 自然通过
插管 ,形成动静脉短路 , 巧 m in 后夹 闭颈总动脉 ,迅
速取出插管 内丝线并血凝块 , 吸干后用 电子天平称
重 ,减去丝线湿重 , 即为血栓湿重 。
2
.
3 统计学分析 数据表达为均数 士 标准差 , 采
用 S PS S 一 10 . 0 统计软件对各组数据进行单因素方差
分析 。
3 结果
3
.
1 对体外血液凝块的溶解作 用 表 l 显示 , 复
方血栓通滴丸各剂量组和复方血栓通胶囊组对凝血
表 1 复方血栓通的体外溶栓作用 ( n = 13 )
2
组别 剂量
( m留 m l )
凝血块的溶解率
( %
, x 土 s )
F r i e dm
a n 检验的排序系数
生理盐水组
滴丸组
2 2
.
5 4 士 15 . 7 6
35
.
0 4 3
.
59 士 2 1 . 5 9
2 4
.
5 3 9
.
0 5 土 19
.
2 0
4 6
`
3 1
南
胶囊组
17
.
2
4 6
.
9
3 4
.
2 3 士 16
.
2 8
4 2 80 士 15
.
3 1
2
.
62
3
.
4 5
凝血块溶解率 给药前血栓重量
一给药后血栓重量
给药前血栓重量
x 10 0 %
2
.
2 滴九对大鼠体 内血 检形成 的侧 定方法 50
中药材第 26 卷第 12 期 2 003 年 12 月
注 : rF ide m an 检验的排序系数越大 , 说明溶解效果越好 ; ’ 与生
理盐水对照组 比较 , P < 0 . 05
块都有明显的溶解作用 。 与生理盐水对照组 比较 ,
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