全 文 ：鸡肝散总黄酮对小鼠非特异性免疫和体液免疫的影响
朱红岗1，陈丛英1，楼洪刚2(1. 浙江省武义县第一人民医院 武义 321200;2. 浙江大学医学院附属第二医院 杭
州 310000)
摘要:目的 研究鸡肝散总黄酮( TFEEB) 对机体非特异免疫作用和体液免疫作用的影响。方法 TFEEB 分为高、中、低( 200、150、100mg·
kg －1 ) 3 个剂量组，用碳粒廓清法测定单核巨噬细胞的吞噬功能，从而研究对非特异性免疫功能的影响;用血清溶血素实验研究对体液免疫功能
的影响。结果 碳粒廓清试验，TFEEB高剂量组可显著提高小鼠碳粒阔清指数 k 和吞噬指数 α( P ＜ 0. 05 ) ，增强正常小鼠巨噬细胞的吞噬功
能; 血清溶血素试验，高、中、低剂量组光密度值均大于模型组，TFEEB能明显促进鸡红细胞致敏小鼠溶血素的生成;同时，高、中剂量组小鼠脾指
数和胸腺指数均有显著升高( P ＜ 0. 05) 。结论 TFEEB对正常小鼠的非特异性免疫、体液免疫功能具有增强作用。
关键词:鸡肝散总黄酮;免疫调节;非特异性免疫;体液免疫
中图分类号:R969 文献标识码:A 文章编号:1006-3765(2013)-05-0024-02
作者简介:朱红岗，男(1975. 9 －)。毕业于浙江医科大学药学系。联
系电话:13552149027，E-mail:weiweibingbing@ yahoo. cn
The effect of total flavone extract of Elsholtzia blanda on nonspecific Im-
munity and humoral Immunity in normal mice
ZHU Hong-gang1，CHEN Cong-yin1，LOU Hong-gang2* (1. The First Peoples Hospital of Wuyi，Wuyi
321200，China;2. The Second Affiliated Hospital of Zhejiang University College of Medicine，Hangzhou
310009，China)
ABSTRACT:OBJECTIVE To study the effect of total flavone extract of Elsholtzia blanda (TFEEB)on nonspe-
cific immunity and humoral immunity in normal mice. METHODS The effect of TFEEB on nonspecific immunity
and humoral immunity in normal mice was observed by carbon clearance，quantitative hemolysis test，respective-
ly. RESUTLS The clearance index (k)and values of phagocytic index (α)were markedly elevated in high dose
group (200mg·kg －1)by carbon clearance test (P ＜ 0. 05). In quantitative hemolysis，compared with model group，
the value of OD in high，middle and low (200，150，100mg·kg －1)group all obviously increased (P ＜ 0. 05)
. Meanwhile，the thymus and spleen indices were also increased (P ＜ 0. 05). CONCLUSION TFEEB showed sig-
nificant immunomodulatory effects on normal mice through nonspecific immunity and humoral immunity.
KEY WORDS:Total flavone extract of Elsholtzia blanda (TFEEB) ;Immunoloregulation;Nonspecific immunity;Humoral immunity
黄酮类化合物广泛存在于植物的叶、皮、根和果实中，属于植物在
长期自然选择过程中产生的一些次级代谢产物，可以分为 10 多个类
别，如黄酮、黄烷醇、异黄酮等，现已发现约 4000 余种黄酮类化合
物〔1〕。对于黄酮类化合物的研究始于上世纪 30 年代，其药理作用研
究主要包括降血脂作用，清除自由基、抗氧化作用，抗炎作用，调节免
疫功能作用，镇痛作用和抗肿瘤作用等方面。近十几年来，黄酮类化
合物对免疫功能的影响研究开始引起重视，一些黄酮类化合物对免疫
反应涉及的 T、B淋巴细胞、NK 细胞、肥大细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中
性粒细胞、嗜酸性粒细胞和血小板的调控作用已经被广泛证实〔2〕。
鸡肝散为双子叶植物药，唇形科香薷属植物四方蒿〔Elsholtzia blanda
(Benth. )Benth. 〕的全草，又名四方蒿、滇香薷、四棱蒿等。其叶、花
或全草均可入药，我国西南部的哈尼族、拉祜族等少数民族主要用于
治疗感冒、痢疾、肝炎、急慢性肾盂肾炎等病症〔3〕。鸡肝散化学成分复
杂多样，提取分离后，主要含挥发油、黄酮类成分等。其中，鸡肝散总黄
酮(total flavone extract of Elsholtzia blanda，TFEEB)已经证实对大鼠急性
心肌缺血〔4〕、实验性心律失常〔5〕和冠脉结扎诱发胸痹证〔6〕等都具有一
定的保护作用。关于 TFEEB的免疫调节作用还未见有报道，本文通过
巨噬细胞吞噬功能实验和血清溶血素实验研究 TFEEB 对非特异性免
疫和体液免疫的影响，旨在进一步提升鸡肝散的药用价值。
1 仪器与试药
1. 1 试药 TFEEB由浙江大学药学院提供，采用水提醇沉法提取总
黄酮〔7〕:鸡肝散经中国科学院昆明植物研究所鉴定，腊叶标本由云南
昆明金殿制药有限公司提供，药材经打粉，过 24 目筛。精密称取鸡肝
散粗粉，加水提取，用石灰乳调 pH 值，水提液再用 6mol·L －1 NaOH
溶液调至中性，离心、滤过、浓缩后得水提液，加 95%乙醇使溶液至相
应的乙醇体积分数，放置 24h，抽滤得醇溶液，浓缩并抽干，得浅黄色
粉末。以芦丁作为对照品测定总黄酮，TFEEB 含量为 92. 5%，临用前
加 0. 5%羧甲基纤维素(CMC)溶液研磨成所需浓度的混悬液。
1. 2 实验动物 Balb /c雄性小鼠，体重 18 ～ 22g，北京维通利华实验
动物公司〔动物合格证:SCXK-(京)2006-0009〕。KM 种小鼠，雌雄各
半，体重 18 ～ 22g，由浙江中医学院实验动物中心提供，合格证号:医
动字第 220010015 号。动物于实验前在动物房环境中适应 3d。
2 方法
2. 1 TFEEB对巨噬细胞吞噬功能的影响 Balb /c 雄性小鼠，随机分
为正常组、TFEEB高、中、低剂量组(200、150、100mg·kg －1) ，每组 10
只。灌胃给药，1 日 1 次，连续 14d，正常组给予相应体积的生理氯化
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海峡药学 2013 年 第 25 卷 第 5 期
钠溶液。在试验第十四天，每鼠尾静脉注入用生理盐水稀释 3 ～ 4 倍
的印度墨汁，按每 10g体重 0. 1mL计算，待墨汁注入，立即计时。2min
(T1)和 10min(T2)后分别从眼眶后取血 50μL，加到 4mL 0. 1% NaH-
CO3 溶液中，以正常小鼠血加入 NaHCO3 作空白对照，721 分光光度
计在 600nm波长处测吸光度值(A)值。按公式计算碳廓清指数 k 和
吞噬指数 α〔8〕。
2. 2 TFEEB对血清溶血素的影响 取 KM小鼠，雌雄各半，随机分为
正常对照组、模型组、TFEEB 高、中、低剂量组(200、150、100mg·
kg －1) ，每组 10 只。正常对照组和模型组每天灌胃给予生理盐水按
20mL·kg －1，其余各组给予等容量不同浓度 TFEEB，连续 10d。给药
第十一天，除正常对照组外，用 5%鸡红细胞的生理盐水混悬液对每
只小鼠腹腔注射 0. 2mL进行免疫。免疫后继续给药 7d，末次注射 1h
后，于眼球后静脉丛取血，分离血清，取血清 50μL 用生理盐水稀释
100 倍。取稀释血清 1. 0mL 与 5% 鸡红细胞的生理盐水混悬液
0. 5mL、10%补体 0. 5mL混合(补体以 2 只豚鼠血清混合，用生理盐水
配制成 10%) ，在 37℃水浴中保温 30min后，0℃冰浴中 30min，中止反
应。离心，取上清液于 540nm 测定光密度(OD)值。以光密度(OD)
值作为血清溶血素抗体含量的指标，OD 值高，表示血清溶血素抗体
含量高，溶解破坏的红细胞多;反之，OD值低表示血清溶血素抗体含
量低〔9〕。
2. 3 脏器指数测定 在完成“2. 2”中眼眶取血后，每组选取 5 只小
鼠称重后脱臼处死，完整取出脾脏和胸腺，去尽筋膜，用滤纸吸干脏器
表面血污，称重，计算脾脏 /体重比值和胸腺 /体重比值。
2. 4 统计学处理 采用 SPSS 10. 0 软件对数据进行统计学描述和分
析，结果以 x ± s表示，采用单因素方差分析(One-way ANOVA)进行多
组间均数比较。
3 实验结果
3. 1 TFEEB对小鼠吞噬功能的影响 与空白对照组比较，TFEEB 高
剂量组的碳阔清指数(k)和吞噬系数(α)有显著增加(P ＜ 0. 05) ，说
明 TFEEB可以提高正常小鼠的巨噬细胞吞噬功能(见表 1)。
表 1 鸡肝散总黄酮对正常小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响 (x ± s，n
= 10)
组别 剂量(mg·kg －1)碳阔清指数(k) 吞噬指数(α)
正常组 － 0. 022 ± 0. 006 4. 54 ± 0. 45
鸡肝散总黄酮 200 0. 033 ± 0. 008* 5. 16 ± 0. 58*
150 0. 025 ± 0. 005 4. 68 ± 0. 59
100 0. 020 ± 0. 004 4. 58 ± 0. 44
注:与正常组比较，* P ＜ 0. 05
3. 2 TFEEB对小鼠血清溶血素水平的影响 小鼠经鸡红细胞免疫
后，可使血清抗体增多，即模型组光密度值较正常组高(P ＜ 0. 05) ，说
明造模是成功的。TFEEB高、中、低剂量组光密度值均大于模型组(P
＜ 0. 05) ，说明 TFEEB有增强体液免疫功能的作用(见表 2)。
表 2 鸡肝散总黄酮对正常小鼠血清溶血素的影响 (x ± s，n = 10)
组别 剂量(mg·kg －1) 光密度(OD)
正常组 － 0. 134 ± 0. 008
模型组 － 0. 288 ± 0. 123▲
鸡肝散总黄酮 200 0. 567 ± 0. 259*
150 0. 598 ± 0. 327*
100 0. 584 ± 0. 261*
注:与正常对照组比较，▲P ＜ 0. 05;与模型对照组比较:* P ＜ 0. 05
3. 3 TFEEB对小鼠免疫器官的影响 与模型组比较，TFEEB 高、中
剂量组小鼠脾指数和胸腺指数均有显著升高(P ＜ 0. 05) ，说明 TFEEB
能促进小鼠胸腺、脾脏等免疫器官重量的增加，提示有免疫功能增强
的作用(见表 3)。
表 3 散总黄酮对小鼠脾指数和胸腺指数 (x ± s，n = 5)
组别 剂量(mg·kg －1) 脾指数 胸腺指数
正常组 － 0. 307 ± 0. 08 0. 267 ± 0. 08
模型组 － 0. 349 ± 0. 04 0. 272 ± 0. 07
鸡肝散总黄酮 200 0. 393 ± 0. 05* 0. 353 ± 0. 09*
150 0. 386 ± 0. 06* 0. 342 ± 0. 07*
100 0. 353 ± 0. 06 0. 294 ± 0. 12
与模型对照组比较:* P ＜ 0. 05
4 讨论
我国香薷资源丰富，分布广泛，除正品海州香薷外，我国有香薷属
植物 33种，鸡肝散即为其中之一。研究发现，挥发油和黄酮是香薷属
植物药理作用的物质基础。早在上世纪 90 年代，我国学者就发现香薷
油具有增强特异性和非特异性免疫应答、提高机体防御机制的作
用〔10〕。香薷油能使脾脏重量增加，增强小鼠脾脏抗体形成细胞合成和
分泌抗体的能力，对抗体免疫的反应阶段和效应阶段均有促进作用。
本研究采用 Balb /c纯种小鼠作为研究对象，测定 TFEEB 对其吞
噬功能的影响。结果显示，TFEEB 高剂量组可显著提高小鼠碳粒阔
清指数 k和吞噬指数 α(P ＜ 0. 05) ，说明 TFEEB可以增强正常小鼠非
特异性免疫功能。溶血素实际上就是 IgM，是初次免疫反应的抗体。
溶血素能间接反应抗体生成的多少，而抗体是血清杀灭病原体的重要
活性物质，是体液免疫的标志。正常细胞受鸡红细胞免疫后，即可产
生抗鸡红细胞抗体(溶血素) ，测定其上清液的 OD 值，可间接判断血
清中抗体形成的数量，OD 值越大，说明产生抗体量越多。高、中、低
剂量组 OD值均大于模型组，表明 TFEEB 能明显促进鸡红细胞致敏
小鼠溶血素的生成。
动物的脏器指数是其重要的生物学特性指标之一，脏器指数的相
对大小，从一定程度上可说明其功能的强弱。本试验中，TFEEB 高、
中剂量组小鼠脾指数和胸腺指数均有显著升高(P ＜ 0. 05)。作为重
要的免疫器官，胸腺与脾脏的重量增加，提示免疫功能的增强。
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Strait Pharmaceutical Journal Vol 25 No. 5 2013