全 文 ： 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2009, 44(1): 69~73 · 69 ·


鸡肝散提取物在大鼠体内的吸收和分布
应景艳 1,2, 王锦磊 1, 姚彤炜 1*
(1. 浙江大学药学院, 浙江 杭州 310058; 2. 宁波市鄞州第二医院, 浙江 宁波 315100)
摘要: 采用 RP-HPLC 法, 分别于 SD 大鼠灌胃给予鸡肝散提取物后 0.17、0.5、1、2、4 和 6 h, 测定大鼠胃
肠道组织中游离以及总的木犀草素的含量, 以及血浆、心、肝、肺、肾中总的木犀草素的含量。结果表明, 鸡肝
散提取物中主要成分木犀草素苷在肠道中迅速水解成木犀草素而被吸收, 在胃肠道组织中主要以苷元木犀草素
形式存在。木犀草素经吸收后快速分布至各组织, 其中代谢比较旺盛的肝、肾组织中木犀草素的含量高于心、
肺组织中; 肾、心、肺组织中的木犀草素含量均为 1 h 时达最大, 这与血药浓度达峰时间相似; 而在肝组织中, 药
物分布迅速, 0.17 h 已达高峰; 在其他组织中因检测灵敏度问题而未被检出。建立的大鼠生物样本中木犀草素的
含量测定方法具有灵敏、准确、专属性强等特点, 可用于鸡肝散药效成分木犀草素的体内药动学研究。
关键词: 高效液相色谱; 鸡肝散; 木犀草素; 吸收; 分布
中图分类号: R969 文献标识码: A 文章编号: 0513-4870(2009)01-0069-05
Absorption and distribution of extracts of Elsholtzia blanda in rats
YING Jing-yan1,2, WANG Jin-lei1, YAO Tong-wei1*
(1. College of Pharmaceutical Sciences, Zhejiang University, Hangzhou 310058, China;
2. Yinzhou No.2 Hospital, Ningbo 315100, China)

Abstract: The study is aimed to establish a RP-HPLC method for determination of luteolin from the extracts of
Elsholtzia blanda (EEB) in rats’ biological specimen. A RP-HPLC method was established for determination of
free and total luteolin in SD rats’ plasma and gastrointestinal tract and total luteolin in SD rats’ heart, liver, lung and
kidney at 0.17, 0.5, 1, 2, 4 and 6 h after administration of EEB to 24 male SD rats (4 rats per one time spot).
Luteolin glycoside was hydrolyzed to aglycone luteolin in intestinal tract, and then luteolin was absorbed. The
main form of luteolin existed in gastrointestinal tract after administration of EEB is aglycone. The content of
luteolin in liver and kidney were higher than that in heart and lung. The content of luteolin in kidney, heart and
lung were showed max at 1 h. Its peak time was similar to that in blood. However, in liver, the drug was
distributed quickly, and showed max at 0.17 h. And because of the sensitivity of the method, luteolin was not be
detected in other tissues. The method is sensitive, specific, accurate, and is appropriate for determination of
luteolin in vivo.
Key words: HPLC; Elsholtzia blanda; luteolin; absorption; distribution

鸡肝散为双子叶植物药, 唇形科香薷属植物四方蒿
[Elsholtzia blanda (Benth.) Benth.]的全草, 又名四方
蒿、滇香薷、四棱蒿等。其叶、花或全草均可入药, 用
于治疗感冒、痢疾、肝炎、急慢性肾盂肾炎等病症。
鸡肝散化学成分复杂多样, 提取分离后, 根据理化性

收稿日期: 2008-07-10.
基金项目: 浙江省科技厅重大科技攻关资助项目(2005C13026); 浙江
省科技厅基金资助项目(2004C33009).
*通讯作者 Tel: 86-571-88208406, E-mail: yaotw@zju.edu.cn
质和光谱分析 , 确定这些化合物为木犀草素、
木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-5-O-β-D-葡
萄糖苷、5-羟基-7,8-二甲氧基黄酮和 5-羟基-6,7-二甲
氧基黄酮等[1～3]。
经研究[4,5]表明鸡肝散总黄酮对实验性心肌缺血
具有良好的保护作用, 除了对胸痹症有明显的改善[6]
外, 还显示良好的抗缺血性心律失常的功能[7]。
鸡肝散提取物中黄酮类化合物的药理活性显著,
但是对于提取物中药效成分的药物吸收和分布研究
DOI:10.16438/j.0513-4870.2009.01.007
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则未见报道。本文建立了大鼠组织中鸡肝散活性成
分——木犀草素的含量测定方法, 研究了木犀草素
在胃肠道的吸收及其在重要组织的分布情况, 有助
于阐明其体内的作用机制。

材料与方法
仪器与试药 Agilent 1100 高效液相色谱仪(包
括 G1311A 脱气器、G1311A 四元泵、G1329A 自动
进样器、G1330B 自动进样温控器、G1316A 柱温箱、
G1314A VWD 检测器、G1315B 二极管阵列检测器、
HP ChemStations 数据处理软件, 安捷伦科技有限公
司); Diamonsil™ C18 色谱柱(200 mm × 4.6 mm, 5 μm,
迪马公司); TGL-16C 台式离心机(上海安亭科学仪器
厂); AL104 电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公
司); KQ-250DB 型数控超声清洗器(昆山市超声仪器
有限公司); 高速匀浆器。
动物 健康雄性 SD 大鼠, 体重 180 g 左右(浙江
医学科学院提供, SCXK(浙)2003-0001)。鸡肝散提取
物(浙江大学药学院中药与天然药物化学研究室提
供 ); 木犀草素对照品 (中国药品生物制品检定所 ,
111520- 200201); 甲醇、乙腈为色谱纯; 色谱用水为
超纯水; 盐酸、肝素钠、磷酸二氢钾、羧甲基纤维素
钠等均为分析纯试剂。
色谱条件 测定游离的木犀草素的色谱条件
采用 Diamonsil™ C18 色谱柱(200 mm × 4.6 mm, 5
μm)。流动相为乙腈- pH 2.0, 0.01 mol·L−1 磷酸二氢钾
溶液梯度洗脱: 0～10 min, 乙腈 20%～25%; 10～15
min, 乙腈 25%～30%; 15～25 min, 乙腈 30%～40%;
25～30 min, 乙腈 40 % 。流速为 1.0 mL·min−1, 检测
波长为 350 nm, 柱温为 25 ℃, 进样量为 20 μL。
测定总的木犀草素的色谱条件 流动相: 乙腈-
pH 2.0, 0.01 mol·L−1 磷酸二氢钾溶液等度洗脱
(35∶65), 其余同 “测定游离的木犀草素的色谱
条件”。
溶液配制 取木犀草素 10 mg, 精密称定, 置于
10 mL 量瓶中, 加甲醇溶解, 稀释到刻度, 摇匀, 即
得浓度为 1 mg·mL−1 的储备液。
称取 CMC-Na 0.5 g, 溶于沸水 100 mL 中, 配成
0.5%的溶液。精密称取鸡肝散提取物适量 , 加入
5% CMC-Na 溶液 , 涡旋混匀 , 制成浓度为 20
mg·mL−1 鸡肝散提取物混悬液 , 大鼠灌胃剂量 180
mg·kg−1。
给药方案与样品采集 SD 雄性大鼠 24 只, 禁食
过夜后 , 灌胃给予 180 mg·kg−1 鸡肝散提取物
CMC-Na 混悬液。分别于给药 0.17, 0.5, 1, 2, 4 和 6 h
后尾静脉取血 (0.3 mL), 将各时间点的血液置于涂
有肝素的 doff 管中, 4 000 r·min−1 离心 5 min, 取上清
液, 于 −24 ℃储存。此外, 分别于上述时间点快速取
血后, 迅速处死大鼠, 取出胃、十二指肠、空肠、回
肠、盲肠、结肠、心、肝、肺及肾组织置于生理盐水
中(胃肠段剪开, 洗去内容物), 用滤纸吸干表面水分
后, 分别称量各组织湿重, 加入 5 倍量生理盐水匀浆,
制成组织匀浆液, −24 ℃保存备用。同法另取大鼠 1
只制备空白样品。
样品的处理 测定游离的木犀草素浓度的样品
分别取待测样品 100 μL, 置于 7 mL 离心管中, 加入
10%三氯乙酸 50 μL 沉淀蛋白, 涡旋。再精密加入乙
酸乙酯 2 mL 提取溶液, 涡旋 3 min 后, 10 000 r·min−1
离心 10 min, 精密吸取上清液 1 mL, 真空下抽干溶
剂 , 用甲醇 -0.01 mol·L−1 磷酸二氢钾溶液 (pH 2.0)
(1∶1, v/v) 200 μL 复溶, 13 000 r·min−1 离心 10 min,
取 20 μL 用于测定。
测定总的木犀草素浓度的样品 分别取待测样
品 100 μL, 置于 7 mL 离心管中, 加入 8 mol·L−1 盐酸
200 μL, 置于 80 ℃水浴加热 2 h 进行酸水解, 取出冷
却后, 加入 10%三氯乙酸 50 μL 沉淀蛋白, 涡旋。其
余的样品处理同上。
方法的回收率及精密度 采用高、中、低浓度,
考察了水解后血浆、胃和十二指肠中木犀草素的回
收率和精密度。配制低、中、高(0.91、9.09 和 36.36
μg·mL−1) 3 个浓度的上述质控样品各 5 份, 按“样品
的处理”和“色谱条件”项处理, 得木犀草素峰面积
与同样量木犀草素对照品溶液直接进样所得峰面积
进行比较, 计算提取回收率。平行测定 5 份, 记录木
犀草素的峰面积, 所得信号值代入标准曲线的回归
方程, 求得测定浓度, 与理论值比较, 计算方法回收
率。平行测定 5 份, 连续测定 3 d, 计算日内、日间精
密度。

结果
1 方法的专属性
大鼠空白血浆与血浆样品分别用“样品的处理”
项下方法处理后进样, 所得到的色谱图进行比较, 结
果表明其中内源性物质不干扰木犀草素测定, 见图 1。
其中, 图 A, B, C 是未经过酸水解的血浆色谱图, 图
D, E, F 为经过酸水解的血浆色谱图。
2 血浆中木犀草素的线性范围和检测灵敏度
取大鼠空白血浆及空白胃、肠段匀浆 100 μL, 加


应景艳等: 鸡肝散提取物在大鼠体内的吸收和分布 · 71 ·



Figure 1 HPLC of the plasma sample. A, B, C: Obtained after treated with method “free luteolin”; D, E, F: Obtained after
treated with method “total luteolin”. A, D: Blank plasma; B, E: Blank plasma spiked with luteolin (4.54 μg·mL−1); C, F: Plasma
sample after oral administration for 0.17 h. 1: Luteolin; 2: Luteolin monoglucuronide

Table 1 Regression equation and linear range of luteolin in rats’ biological specimen
Free luteolin Total luteolin Biological
specimen Regression equation r Regression equation r
Linear range
/μg·mL−1
Blood A=21.51C+0.08 0.999 A=19.72C+0.51 1.000 0.45−45.45
Stomach A=28.68C−0.28 0.997 A=21.21C+0.94 1.000 0.45−45.45
Duodenum A=25.13C−0.79 0.995 A=20.56C+0.32 0.999 0.45−45.45
Jejunum A=31.48C−0.29 0.999 A=21.92C+1.74 1.000 0.45−45.45
Ileum A=30.38C+0.32 1.000 A=22.63C+1.83 1.000 0.45−45.45
Cecum A=31.70C−1.85 0.998 A=21.91C+1.50 0.996 0.45−45.45
Colon A=36.65C−1.47 0.999 A=24.33C+1.93 0.990 0.45−45.45
Cardia − − A=12.45C+6.96 0.993 0.45−4.54
Liver − − A=18.17C+2.13 1.000 0.45−4.54
Lung − − A=17.38C+2.97 1.000 0.45−4.54
Kidney − − A=17.21C+4.25 0.996 0.45−4.54
−: Biological specimen without determination

入 1 mg·mL−1 木草素犀甲醇溶液 10 μL, 配成浓度为
0.45, 4.54, 9.09, 18.18 和 45.45 μg·mL−1 的系列对照品
溶液, 按“样品的处理”和“色谱条件”项处理、测
定。以样品中木犀草素对照品浓度 (C) 对相应的峰面
积 (A) 进行线性回归, 采用加权最小二乘法, 得回归
方程及线性范围, 见表 1。各生物样品中木犀草素在
0.45～45.45 μg·mL−1 内均有良好的线性关系 , (r >
0.99)。十二指肠样品中木犀草素的定量限为 0.45
μg·mL−1 (S/N = 10, RSD = 5.71%, n = 5)。
3 方法的回收率及精密度
木犀草素的提取回收率为 74%～83%, 方法回收
率 93%～113%。日内及日间精密度 2%～10%, 见表 2。
4 血浆及胃肠道样品测定
图 2 为血浆及胃肠道样品中的游离的木犀草素和
总的木犀草素的浓度时间变化图。总的和游离的木犀
草素在胃肠道中的变化趋势为: 胃和十二指肠中木

Table 2 Recovery and precision of luteolin in rats’ blood,
stomach and duodenum (n = 3, x ± s)
RSD/% Concentration
/μg·mL−1
Method
recovery/%
Extract
recovery/% Intra-day Inter-day
Blood 0.91 93.7±7.33 75.41±3.37 9.30 3.37
9.09 95.1±1.52 74.96±3.68 2.34 4.91
36.36 110.8±4.13 80.66±3.42 5.59 4.25
Stomach 0.91 110.2±5.79 75.34±6.58 8.00 8.74
9.09 102.39±4.00 76.44±1.82 5.36 2.39
36.36 93.82±6.21 79.92±7.11 8.65 8.89
Duodenum 0.91 112.0±9.10 81.47±5.70 2.56 6.99
9.09 105.2±5.65 77.88±3.12 4.63 4.00
36.36 98.60±9.85 82.41±6.73 3.17 8.17


· 72 · 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2009, 44(1): 69~73

犀草素浓度均在 0.17 h 时达到最大, 随后逐渐变小;
空肠在 0.5 h时含量达到最大; 回肠则在 2 h时达到最
大; 盲肠及结肠在所测的时间点内木犀草素含量均
很低, 且未出现最大值。肠道中以游离的木犀草素为
主。水解后, 小肠中木犀草素增加了, 但增加量不多。
而在血浆中, 总的木犀草素的达峰时间为 1 h, 这与
作者前期的研究结果一致[8]。另外血浆中游离的木犀
草素的达峰时间则为 0.17 h。
5 体内分布
取大鼠血浆、胃肠道以及心、肝、肺、肾样品进
行测定, 总的木犀草素含量如图 3 所示。
由图 3 可见, 木犀草素在肝、肾、心、肺中均有
分布, 其中在肝、肾中有较高浓度, 这与民间将鸡肝
散用于治疗肝炎和肾炎是相符合的。


Figure 2 The change of the concentration of total luteolin and free luteolin in rats’ blood and gastrointestinal tract (n = 4). −◆−
Total luteolin; −▲− Free luteolin


Figure 3 The change of the concentration of luteolin in rats’ tissues after oral administration of EEB (n = 4)
应景艳等: 鸡肝散提取物在大鼠体内的吸收和分布 · 73 ·


木犀草素在肠道迅速被吸收。由药-时曲线的达
峰时间可见木犀草素在胃、十二指肠达峰时间最早,
之后是空肠和回肠。而在所测的时间点内, 木犀草素
在盲肠和结肠中并未达到最大值。随着时间的推移,
木犀草素从胃排入结肠, 6 h 后排出体外。肝, 肾这种
代谢比较旺盛的组织中木犀草素的含量较心、肺中
高。大鼠血浆中木犀草素含量在 1 h 时达到最大值。
肾、心、肺中的木犀草素含量均在 1 h 时达峰, 这与血
药浓度达峰时间相似。在肝中, 药物分布迅速, 0.17 h
已达高峰。在心、肝、肺、肾中, 药物消除较快, 于
4 h 基本达到平衡。总的看来, 木犀草素在给药后较
短时间内就达到最大浓度, 在各器官的分布速度快。

讨论
采用 Chen 等[9]报道的血浆样品的提取方法建立
了反相高效液相色谱法测定 SD 大鼠血浆、胃肠道、
心、肝、肺、肾中木犀草素含量的测定方法。通过方
法学论证, 表明建立的方法灵敏、准确、专属性强。
本实验通过比较给药后大鼠胃肠道(去除内容物)
中总的木犀草素及游离的木犀草素, 发现胃肠道中
主要是以游离的木犀草素存在。可能的原因有两个。
其一, 这与前期研究[10]ICR小鼠胃肠道实验显示样品
苷及苷元变化情况的结果一致, 表明胃并不是木犀
草素苷水解的主要场所, 给药后鸡肝散提取物快速
从胃排入小肠, 并在小肠内迅速将木犀草素苷水解
成苷元, 苷元在吸收进入小肠细胞过程中发生结合
反应, 生成大量的代谢产物。未吸收的木犀草素及其
结合物排入大肠后, 在肠道菌酶的作用下, 将木犀草
素苷水解成苷元。 由于木犀草素苷在小肠内的迅速
水解, 导致苷元的含量占了主导部分,因此吸收进入
肠道的主要为木犀草素。其二, 有研究显示, 苷并不
是肠道吸收的主要形式。文献[11,12]报道黄酮类化合物
的苷和苷元在体内的药理活性和吸收情况有差别 ,
通常认为黄酮苷在体内不被吸收或吸收较差, 只有苷
元才可以被吸收, 研究表明人体吸收大豆异黄酮苷元
的量和速度都比苷更迅速。
实验说明给药后, EEB 从胃排入肠道, 在小肠中
迅速水解而被吸收, 小肠是主要的吸收部位。在 6 h
后, EEB 才被逐渐排出体外。
预实验中, 发现在本实验的条件下无法检测到
脑、睾丸、脾及肌肉中的木犀草素, 因此, 选择心、
肝、肺、肾这些含量较高的组织进行比较。

References
[1] Lu JS, Shen T, Guo Z, et al. The chemical constituents
of Elsholtzia blanda [J]. Acta Bot Sin (植物学报),
2001, 43: 545-550.
[2] Zhang WL, Du J, Zhou YM, et al. The separation and
identification of flavonoid glycoside from Elsholtzia
blanda [J]. China J Chin Mater Med (中国中药杂志),
1999, 24: 96-98.
[3] Cheng HY, Zhou CX, Lou YJ, et al. The study on
chemieal constituents of Elsholtzia blanda [J]. China J
Chin Mater Med (中国中药杂志), 2005, 30: 1589-1591.
[4] Lou HG, He QJ, Wu HH, et al. The protective effect of
total flavone extract of Elsholtzia blanda on
experimental myocardial ischemia in rats [J]. Chin J
Mod Appl Pharm (中国现代应用药学杂志), 2004, 8:
265-268.
[5] Ling HY, Lou YJ, Lou HG, et al. Protective effect of
total flavones from Elsholtzia blanda (TFEB) on
myocardial ischemia induced by coronary occlusion in
canines [J]. J Ethnopharmacol, 2004, 94: 101-107
[6] Lou HG, He QJ, Wu HM, et al. The study on total
flavone from Elsholtzia blanda on anti-thoracic
obstruction [J]. J Chin Med Mater (中药材), 2003, 26:
878-881.
[7] Lou HG, He QJ, Wu HM, et al. The study on total
flavone from Elsholtzia blanda on arrhythmia in rats [J].
Pharmacol Clin Chin Mater Med (中药药理与临床),
2004, 20: 14-16.
[8] Ying JY, Ma JL, Xia ZL, et al. Pharmacokinetics of
luteolin from Elsholtzia blanda extracts in rats [J].
Acta Pharm Sin (药学学报), 2008, 43: 523-527.
[9] Chen T, Li LP, Lu XY, et al. Absorption and excretion
of luteolin and apigenin in rats after oral administration
of Chrysanthemum morifolium extract [J]. J Agric Food
Chem, 2007, 55: 273-277
[10] Ma JL,Yao TW. Studies on absorption and metabolism
of the extracts of Elsholtzia blanda (Benth.) Benth. and
the quality control of the preparations (鸡肝散提取物在
体内外的吸收代谢及其制剂的质量控制方法研究)
[D]. Hangzhou: Zhejiang University, 2006.
[11] Izumi T, Piskula MK, Osawa S, et al. Soy isoflavone
aglucons are absorbed faster and in higher amounts than
their glucosides in humans [J]. J Nutr, 2000, 130:
1695-1699.
[12] Zheng Y, Lee S, Verbruggen M, et al. The apparent
absorptions of isoflavone glucosides and aglucons are
similar in women and are increased by rapid gut transit
time and low fecal isoflavone degradation [J]. J Nutr,
2004, 134: 2534-2539.