全 文 ：花椒叶黄酮的微波提取及其抗氧化性研究
杨立琛，李荣＊，姜子涛
（天津商业大学生物技术与食品科学学院 天津市食品生物技术重点实验室，天津　３００１３４）
摘要：利用微波法提取了花椒叶黄酮，得率７．６４％。考察了乙醇浓度、料液比、微波功率、提取温度和时
间对花椒叶黄酮得率的影响，测定了花椒叶黄酮进行抗氧化性能，并与抗氧化剂 Ｖｃ做比较。结果表
明，微波提取花椒叶黄酮的最佳条件：温度７０℃、乙醇浓度６５％、料液比１∶３０、微波功率５００Ｗ、提取
时间４ｍｉｎ。花椒叶黄酮清除羟自由基和对卵黄蛋白脂质抗氧化能力比Ｖｃ强，总抗氧化活性、清除超
氧阴离子和清除ＤＰＰＨ自由基的能力比Ｖｃ弱。
关键词：花椒叶；黄酮；微波提取；抗氧化活性
中图分类号：ＴＳ２６４．３　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１０００－９９７３（２０１２）０９－００３６－０６
Ｍｉｃｒｏｗａｖｅ－ａｓｓｉｓｔｅｄ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｚａｎｔｈｏｘｙｌｕｍ
ｂｕｎｇｅａｎｕｍＬｅａｖｅｓ　ａｎｄ　Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ
ＹＡＮＧ　Ｌｉ－ｃｈｅｎ，ＬＩ　Ｒｏｎｇ＊，ＪＩＡＮＧ　Ｚｉ－ｔａｏ
（Ｔｉａｎｊｉｎ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｆｏｏｄ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，
Ｔｉａｎｊｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｏｍｍｅｒｃｅ，Ｔｉａｎｊｉｎ　３００１３４，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｚａｎｔｈｏｘｙｌｕｍ　ｂｕｎｇｅａｎｕｍｌｅａｖｅｓ　ｗｅｒｅ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｂｙ　ｍｉｃｒｏｗａｖｅ－ａｓｓｉｓｔｅｄ
ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ　ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｗａｓ　７．６４％．Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｔｈａｎｏｌ，
ｔｈｅ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ｔｏ　ｌｉｑｕｉｄ，ｍｉｃｒｏｗａｖｅ　ｐｏｗｅｒ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ａｎｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ｏｎ　ｆｌａ－
ｖｏｎｏｉｄｓ　ｙｉｅｌｄｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ｔｈｅ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｚａｎｔｈｏｘｙｌｕｍ　ｂｕｎｇｅａ－
ｎｕｍｌｅａｖｅｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　Ｖｃ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ：
６５％ｅｔｈａｎｏｌ，ｔｈｅ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ｔｏ　ｌｉｑｕｉｄ　１∶３０，ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　７０℃，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　４ｍｉｎ，ａｎｄ　ｍｉ－
ｃｒｏｗａｖｅ　ｐｏｗｅｒ　５００Ｗ．Ｔｈｅ　ｈｙｄｒｏｘｙｌ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｎｄ　ｙｏｌｋ　ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
ｗｅｒｅ　ｓｔｒｏｎｇｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈｏｓｅ　ｏｆ　Ｖｃ．Ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｂｉｌｉｔｙ，ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ａｎｉｏｎ，ａｎｄ　ＤＰＰＨ　ｓｃａｖｅｎ－
ｇｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｗｅｒｅ　ｗｅａｋｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈｏｓｅ　ｏｆ　Ｖｃ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｚａｎｔｈｏｘｙｌｕｍ　ｂｕｎｇｅａｎｕｍｌｅａｖｅｓ；ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｍｉｃｒｏｗａｖｅ－ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ
ａｃｔｉｖｉｔｙ
　　黄酮具有抑制脂质过氧化、调节免疫、抗衰老、杀
菌和抗病毒等作用，已成为目前倍受关注的天然活性
产物之一，从食源性材料中筛选出抗氧化性强的天然
抗氧化物质也是人们关注的焦点。黄酮类化合物作为
优良的抗氧化剂已广泛的应用于食品和保健品中［１］，
其提取方法主要有水提法、酶解法、有机溶剂萃取法、
超声波法、超临界萃取法和微波提取法等［２，３］，其中微
波提取法作为一种新型提取技术，具有提取时间短、提
取效率高、重现性好、污染性小等优点［４］。
花椒属植物中富含黄酮，目前已从花椒果皮中分
收稿日期：２０１２－０４－０５　　　　　　　　＊通讯作者
基金项目：天津市高校科技发展基金项目资助（２０１１０６０８）
作者简介：杨立琛（１９８９－），女，硕士研究生，研究方向为食品添加剂。
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试验研究　　２０１２年第９期
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离出１０余种黄酮类成分［５］，但关于花椒叶总黄酮的提
取研究相对较少，只有范菁华等采用超声波辅助法提
取了花椒叶总黄酮［６］，而对于花椒叶黄酮的微波提取、
抗氧化性能及清除自由基性能尚未见报道。本文应用
微波提取法提取了花椒叶黄酮，并考察了其体外抗氧
化和清除自由基的性能，为花椒叶在食品、保健品等领
域的进一步应用奠定了理论基础。
１　材料与仪器
１．１　材料与试剂
花椒叶　２０１１年采自山西省运城市，洗净后烘干
备用；ＤＰＰＨ　美国Ｓｉｇｍａ公司；无水乙醇、石油醚、抗
坏血酸（Ｖｃ）、结晶紫、磷酸钠、钼酸铵、邻苯三酚、硫酸
亚铁和三羟甲基氨基甲烷（Ｔｒｉｓ）　等均为分析纯；芦
丁标准溶液　用３０％的乙醇溶液超声溶解为浓度为
０．１ｍｇ／ｍＬ的标准溶液；样品储备液　将花椒叶黄酮
用３０％的乙醇溶液溶解配制成浓度为１．０ｍｇ／ｍＬ的
花椒叶黄酮储备液，将 Ｖｃ用蒸馏水溶解配制成浓度
为１．０ｍｇ／ｍＬ的Ｖｃ储备液。
１．２　仪器
Ｕ－３９００紫外可见分光光度计　日本日立公司；
９７０ＣＲＴ荧光分光光度计　上海精密科学仪器有限
公司；ＭＡＳ－Ⅰ型微波快速制样系统　上海新仪微波
化学科技有限公司；ＺＫ－８２Ａ型真空干燥箱　上海市
实验仪器厂；ＬＧＪ－１０型冷冻干燥机　北京松源华兴科
技发展有限公司；ＦＡ１１０４Ｎ电子天平　上海精密科学
仪器有限公司；ＫＱ２２００Ｂ型超声波清洗机　昆山市超
声仪器有限公司；８０－１离心机　上海手术器械厂；电
热恒温水浴锅　北京市长风仪器仪表公司。
２　实验方法
２．１　花椒叶黄酮的微波提取工艺
称取２．０ｇ花椒叶粉末，以６５％乙醇溶液为溶剂，
放入微波玻璃反应器中，选择微波功率为５００Ｗ，按
１∶３０的料液比在６０℃下用微波萃取仪萃取４ｍｉｎ，
待提取液稍冷后进行过滤，滤液经石油醚萃取以除去
脂溶性杂质，弃掉石油醚层，即得花椒黄酮的提取液。
试验以黄酮得率为指标，通过单因素试验来确定
乙醇浓度、微波功率、料液比、提取时间和温度等因素
的试验范围，以得到微波辅助提取花椒黄酮的最佳工
艺参数。
２．２　标准曲线的制作
按照文献［７］的方法绘制芦丁标准工作曲线，芦丁
浓度ｃ与吸光度 Ａ 关系曲线的回归方程式：Ａ＝
１３．１９４ｃ－０．００１２，相关系数Ｒ２＝０．９９８５。
２．３　黄酮得率的测定
采用 ＮａＮＯ２－Ａｌ（ＮＯ３）３ 比色法测量黄酮得率。
取黄酮提取液３．０ｍＬ于１０ｍＬ比色管中，按方法２．１
进行显色，以试剂空白作对照测吸光度，根据标准曲线
计算提取液中黄酮含量，并计算黄酮得率。
２．４　总抗氧化活性的测定———磷钼络合物法［８］
将样品储备液适当稀释得到浓度分别为０．１，
０．１５，０．２，０．２５和０．３ｍｇ／ｍＬ的花椒叶黄酮溶液和
Ｖｃ溶液为样品液。在一系列１０ｍＬ比色管中分别加
入４．０ｍＬ磷钼试剂液（终浓度为０．６ｍｏｌ／Ｌ浓硫酸、
２８ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸钠和４ｍｍｏｌ／Ｌ钼酸铵）和０．４ｍＬ样
品液，迅速摇匀后将比色管放置于９５℃水浴中恒温
９０ｍｉｎ，在６９５ｎｍ波长下分别测量不同样品液的吸光
度值Ａ。平行测定三次，取平均值。
２．５　清除超氧阴离子自由基的测定———邻苯三酚自
氧化法［９］
以样品储备液经适当稀释得到的浓度分别为０．１，
０．３，０．５和１．０ｍｇ／ｍＬ的花椒叶黄酮溶液和Ｖｃ溶液
为样品液。
２．５．１　光谱条件的选择
对含有邻苯三酚的Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲溶液（ｐＨ　８．２）进
行荧光扫描。向石英比色皿中加入２．２ｍＬ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓
冲溶液、０．１ｍＬ水和０．３ｍＬ邻苯三酚（３．０ｍｍｏｌ／Ｌ），固
定Ｅｍ＝５０９ｎｍ，Ｅｘ＝２５０～５００ｎｍ为光谱条件，从加入邻
苯三酚开始计时，每隔２ｍｉｎ扫描，得到邻苯三酚的激发
光谱；重新取液，固定Ｅｘ＝４４４ｎｍ，Ｅｍ＝４５０～７００ｎｍ，按
同样方法进行扫描，得到邻苯三酚的发射光谱。
２．５．２　邻苯三酚自氧化速率的测定
向石英比色皿中加入２．２ｍＬ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲溶液、
０．１ｍＬ样品液和０．３ｍＬ邻苯三酚（３．０ｍｍｏｌ／Ｌ），混匀后
在Ｅｍ＝５０９ｎｍ、Ｅｘ＝４４４ｎｍ波长下进行测定，在３～
７ｍｉｎ的范围内每分钟测定一次，以时间为横坐标、荧光强
度为纵坐标作图，曲线的斜率即为邻苯三酚自氧化的速
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率Ｖｓ，以０．１ｍＬ水代替样品液可得到不加Ｏ２－·抑制剂
前邻苯三酚的自氧化速率Ｖ０。平行测定三次，取平均值
并按下式计算样品液对Ｏ２－·的抑制率：
抑制率（％）＝Ｖ０－ＶＳＶ０ ×１００
。 （１）
２．６　清除羟自由基能力的测定———结晶紫法［１０］
由样品储备液稀释配制浓度为０．０５ｍｇ／ｍＬ的花
椒叶黄酮溶液和Ｖｃ溶液为样品液。在一系列１０ｍＬ
比色管中分别加入０．５ｍＬ结晶紫（０．４ｍｍｏｌ／Ｌ）、
０．７ｍＬ　ＦｅＳＯ４ 溶液（１０．０ｍｍｏｌ／Ｌ）和０．７ｍＬ　Ｈ２Ｏ２
溶液（５．０ｍｍｏｌ／Ｌ），用磷酸氢二钾－柠檬酸缓冲溶液
（ｐＨ　４．０）定容至１０ｍＬ，摇匀后放置３０ ｍｉｎ，在
５８０ｎｍ处测其吸光度 Ａ０，同时测定不加 Ｈ２Ｏ２ 时
５８０ｎｍ处的吸光度 Ａｂ，则羟自由基的产生量可以用
ΔＡ＝Ａｂ－Ａ０ 来表征。
样品液对羟自由基清除率的测定：在上述反应体
系中加 Ｈ２Ｏ２ 之前分别加入０．１，０．２，０．３，０．４和
０．５ｍＬ样品液，测定吸光度Ａｘ。平行测定三次，取平
均值并按下式计算样品液对羟自由基的清除率：
清除率（％）＝Ａｘ－Ａ０Ａｂ－Ａ０×１００
。 （２）
２．７　清除ＤＰＰＨ能力的测定［１１］
将样品储备液适当稀释得到浓度分别为０．０２，
０．０４，０．０６，０．０８，０．１０ｍｇ／ｍＬ的花椒叶黄酮溶液和
Ｖｃ溶液为样品液。向一系列１０ｍＬ比色管中加入
３．５ｍＬ　１．０×１０－４　ｍｏｌ／Ｌ的ＤＰＰＨ 溶液和０．５ｍＬ
样品液，摇匀后避光反应３０ｍｉｎ，以空白溶液为参比，
测定５１７ｎｍ下的吸光度Ａ，同样方法测定３．５ｍＬ无
水乙醇和０．５ｍＬ样品液混合后在５１７ｎｍ下的吸光
度Ａ０，再测定３．５ｍＬ　ＤＰＰＨ和０．５ｍＬ无水乙醇混
合后在５１７ｎｍ下的吸光度Ａ１，平行测定三次，取平均
值并按下式计算样品液对ＤＰＰＨ自由基的清除率：
清除率（％）＝１－Ａ－Ａ０Ａ１ ×１００
。 （３）
２．８　Ｆｅ２＋诱发卵黄脂蛋白过不饱和脂肪酸（ＰＵＦＡ）
过氧化体系中抗氧化活性的测定［１２］
将样品储备液经适当稀释后得到的浓度分别为
０．１，０．２，０．３ｍｇ／ｍＬ的花椒叶黄酮溶液和Ｖｃ溶液为
样品液。用ｐＨ　７．５浓度为０．１ｍｏｌ／Ｌ的磷酸盐缓冲
液（ＰＢ）配制１∶２５的卵黄悬液。取０．２ｍＬ的卵黄悬
液、０．２ｍＬ　２５．０ｍｍｏｌ／Ｌ　ＦｅＳＯ４ 溶液和０．２ｍＬ的样
品液于一 系 列 １０ ｍＬ 离 心 管 中，用 ＰＢ 补 充 至
２．０ｍＬ，３７℃下培养１２ｈ，取出后加入０．５ｍＬ　２０％
的三氯乙酸溶液（ＴＣＡ），静置１０ｍｉｎ后以３５００ｒ／ｍｉｎ
的转速离心１０ｍｉｎ，取２．０ｍＬ上清液于１０ｍＬ比色
管中，再加入 １．０ ｍＬ　０．８％ 硫代巴比妥酸溶液
（ＴＢＡ），沸水浴１５ｍｉｎ，冷却后，于５３２ｎｍ波长下测
定吸光度值Ａｘ，对照管不加样品液，其它试剂同前，记
吸光度为Ａ０，平行三次，取平均值，则样品液对卵黄脂
蛋白脂质过氧化的抑制率按下式计算：
抑制率（％）＝Ａ０－ＡｘＡ０ ×１００
。 （４）
３　结果及分析
３．１　花椒叶黄酮微波提取条件的优化
３．１．１　提取温度、料液比及提取液乙醇浓度的确定
按２．２方法进行提取，固定其他条件，分别测定在
不同料液比、提取温度和乙醇浓度下的花椒叶黄酮得
率，结果见图１。
图１　料液比、提取温度、乙醇浓度对花椒叶黄酮得率的影响
Ｆｉｇ．１Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ａｎｄ
ｔｈｅ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ｔｏ　ｌｉｑｕｉｄ　ｏｎ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
　　由图１可知，料液比的增加有利于物料中黄酮类
物质的溶出，但料液比过大的时候，会影响到物料对微
波能的吸收，导致黄酮得率下降，故选择提取花椒叶黄
酮的料液比为１∶３０。随着温度的升高，花椒叶黄酮
得率逐渐增加，这是因为黄酮类化合物在乙醇中的溶
解度随温度的升高而变大，但温度过高反而会破坏黄
酮的分子结构而导致花椒叶黄酮得率降低，故选择花
椒叶黄酮的提取温度为７０℃。花椒叶黄酮得率会随
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试验研究　　２０１２年第９期
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着乙醇浓度的增大而升高，但乙醇浓度达到一定时，黄
酮得率会逐渐降低。这是因为乙醇浓度的增大会提高
黄酮类化合物的溶解度，但高浓度的乙醇反而会使细
胞内蛋白质凝固，导致黄酮不易溶出［１３］。故选择提取
花椒叶黄酮的乙醇浓度为６５％。
３．１．２　微波功率及提取时间的确定
固定乙醇浓度、提取温度和料液比，选择不同的微
波功率及时间，按２．２方法进行提取，结果见图２。
图２　微波功率与提取时间对黄酮得率的影响
Ｆｉｇ．２Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｉｃｒｏｗａｖｅ　ｐｏｗｅｒ　ａｎｄ
ｅｘｔｒａｃｔ　ｔｉｍｅ　ｏｎ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
　　由图２可知，微波功率的增大会使花椒叶黄酮吸
收的微波能增多，从而使其更易进入到介电常数较小
的乙醇溶剂当中，即黄酮得率升高。而当微波功率一
定时，黄酮得率会随着作用时间的增加而增大，当提取
时间为４ｍｉｎ时达到最高，之后提取时间增加，黄酮得
率反而下降，这可能是因为微波的强热效应长时间作
用对黄酮有分解作用，因此选择提取花椒叶黄酮的条
件为微波功率５００Ｗ下提取４ｍｉｎ。
３．２　总抗氧化活性
图３　样品液的总抗氧化活性
Ｆｉｇ．３Ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｓａｍｐｌｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ
用磷钼络合物法测定花椒叶黄酮的抗氧化活性，
按照方法２．４进行测定，结果见图３。
　　由图３可知，样品液的吸光度随浓度的增加也逐
渐升高，说明样品液的抗氧化活性跟浓度成正比关系，
花椒叶黄酮的总抗氧化活性比Ｖｃ弱。
３．３　清除超氧阴离子自由基的能力
按照方法２．５．１，扫描邻苯三酚自氧化随时间变
化的激发光谱和发射光谱，结果见图４。
图４　邻苯三酚的激发光谱（ａ）和发射光谱（ｂ）
Ｆｉｇ．４Ｔｈｅ　ｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ（ａ）ａｎｄ　ｅｍｉｓｓｉｏｎ（ｂ）ｓｐｅｃｔｒａ　ｏｆ　ｐｙｒｏｇａｌｏｌ
注：曲线１～７的反应时间分别为２，４，６，８，１０，１２和
１４ｍｉｎ。
　　由图４可知，邻苯三酚自氧化产物的荧光强度随
时间而逐渐增大，且２～１０ｍｉｎ内呈良好的线性关系，
邻苯三酚自氧化的最佳激发波长和发射波长分别为
４４４ｎｍ和５０９ｎｍ。按照方法２．５．２进行测定，得到
样品液对邻苯三酚自氧化速率的影响，结果见图５。
图５　花椒叶黄酮（ａ）和Ｖｃ（ｂ）的荧光动力学
Ｆｉｇ．５Ｔｈｅ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｋｉｎｅｔｉｃｓ　ｃｕｒｖｅｓ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｏｆ
Ｚａｎｔｈｏｘｙｌｕｍ　ｂｕｎｇｅａｎｕｍｌｅａｖｅｓ（ａ）ａｎｄ　Ｖｃ（ｂ）Ｆｉｎａｌ
注：曲线曲线１～５的样品液终浓度分别为０，０．３８５×
１０－２，１．１５×１０－２，１．９２×１０－２和３．８４×１０－２　ｍｇ／ｍＬ。
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　　由图５可知，样品液的浓度越大，曲线的斜率即邻
苯三酚自氧化的速率 Ｖｓ越小，说明样品液对邻苯三
酚自氧化的抑制作用越强。拟合动力学曲线得到曲线
斜率，并按公式（１）计算得到样品液在不同浓度下对超
氧阴离子自由基的抑制率，结果见表１。
表１　样品液对超氧阴离子自由基的抑制率
Ｔａｂｌｅ　１Ｔｈｅ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ
ａｎｉｏｎ　ｒａｄｉｃａｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ
样品 样品液终浓度（１０－２　ｍｇ／ｍＬ） 对超氧阴离子自由基的抑制率（％）
花椒
叶黄酮
０．３８５　 ７．９４
１．１５　 １０．４９
１．９２　 ３０．２５
３．８４　 ６８．０１
Ｖｃ
０．３８５　 ７．０９
１．１５　 ３１．４６
１．９２　 ５６．４０
３．８４　 ８８．０７
　　由表１可知，样品液对超氧阴离子自由基的抑制
作用随浓度的增加而增大，花椒叶黄酮对超氧阴离子
自由基的清除能力不如Ｖｃ强。
３．４　清除羟自由基的能力
按照方法２．６测定花椒叶黄酮清除羟自由基的能
力，羟自由基的清除率用公式（２）计算，结果见图６。
图６　不同浓度样品液对羟自由基清除率
Ｆｉｇ．６Ｔｈｅ　ｈｙｄｒｏｘｙｌ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｏｆ　ｓａｍｐｌｅ
ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
　　由图６可知，样品液对羟自由基的清除率随浓度
的升高而变大，同浓度下花椒叶黄酮对羟自由基的清
除能力远远大于Ｖｃ。
３．５　清除ＤＰＰＨ自由基的能力
根据方法２．７测定花椒叶黄酮清除ＤＰＰＨ 自由
基的能力，按照公式（３）计算样品液对ＤＰＰＨ 自由基
的抑制率，结果见图７。
图７　不同浓度样品液对ＤＰＰＨ自由基的清除率
Ｆｉｇ．７Ｔｈｅ　ＤＰＰＨ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｏｆ
ｓａｍｐｌｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
　　由图７可知，样品液对ＤＰＰＨ自由基的清除率随
浓度的增加而增加，当浓度增大至一定时，清除率趋于
稳定，在同等浓度下，花椒叶黄酮对ＤＰＰＨ 自由基的
清除能力次于Ｖｃ。
３．６　对卵黄脂蛋白脂质过氧化的抑制率
按照方法２．８进行测定，样品液对卵黄脂蛋白脂
质过氧化的抑制率按公式（４）计算，结果见图８。
图８　样品液对Ｆｅ２＋诱发卵黄脂蛋白过氧化的抑制作用
Ｆｉｇ．８Ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｙｏｌｋ　ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ
ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓａｍｐｌｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ
　　由图８可知，花椒叶黄酮和 Ｖｃ对卵黄脂蛋白的
氧化均有抑制作用，随浓度的升高抑制作用增强，在相
同浓度下，花椒叶黄酮的抑制作用高于Ｖｃ。
４　结论
微波辅助提取花椒叶总黄酮的最佳条件是：乙醇
浓度６５％，温度７０℃，料液比为１∶３０，功率５００Ｗ，
时间４ｍｉｎ，在此条件下花椒叶总黄酮得率为７．６４％。
通过考察花椒叶黄酮的总抗氧化活性、清除超氧阴离
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试验研究　　２０１２年第９期
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子自由基能力、清除羟自由基能力、清除ＤＰＰＨ 自由
基能力和对卵黄脂蛋白脂质抗氧化能力，并与合成抗
氧化剂Ｖｃ比较，结果表明花椒叶黄酮是一种很好的
天然抗氧化剂，尤其是在清除羟自由基和对卵黄脂蛋
白脂质抗氧化方面远远优于合成抗氧化剂，可望作为
一种无毒副作用的天然抗氧化剂在食品工业中应用。
参考文献：
［１］延玺，刘会青，邹永青，等．黄酮类化合物生理活性及合成研
究进展［Ｊ］．有机化学，２００８，２８（９）：１５３４－１５４４．
［２］Ｄｕａｎ　Ｌ　Ｊ，Ｃａｒｒｉｅｒ　Ｄ，Ｃｌａｕｓｅｎ　Ｅ　Ｃ．Ｓｉｌｙｍａｒｉｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
ｆｒｏｍ　ｍｉｌｋ　ｔｈｉｓｔｌｅ　ｕｓｉｎｇ　ｈｏｔｗａｔｅｒ［Ｊ］．Ａｐｐｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏｔｅｃｈ－
ｎｏｌ，２００４，１１４（１－３）：５５９－５６８．
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ａｎｄ　ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ｆｒｏｍ　Ｅｕｏｎｙｍｕｓ　ａｌａｔｕｓ（Ｔｈｕｎｂ．）Ｓｉｅｂ［Ｊ］．Ｕｌ－
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（上接第３５页）
表５　花椒精油对菌种生长状况的影响
精油浓度 啤酒酵母 米曲霉 大肠杆菌 黑曲霉 枯草杆菌 金黄色葡萄球菌
０．８％ 不生长 不生长 不生长 不生长 不生长 不生长
０．７％ 不生长 不生长 不生长 不生长 不生长 生长
０．６％ 不生长 不生长 不生长 不生长 生长 生长
０．５％ 不生长 不生长 不生长 生长 生长 生长
０．４％ 不生长 不生长 不生长 生长 生长 生长
０．３％ 生长 生长 生长 生长 生长 生长
　　花椒精油抑菌效果比较见表６。
表６　花椒精油抑菌效果比较
浓度 高效 良效 低效 无效 有效率（％）
０．７％（Ｖ／Ｖ） 啤酵米曲大肠黑曲枯草 金黄 １００
０．６％（Ｖ／Ｖ） 啤酵米曲大肠黑曲枯草 金黄 ８３．３
０．５％（Ｖ／Ｖ） 啤酵米曲大肠 黑曲枯草 金黄 ６６．７
０．４％（Ｖ／Ｖ） 啤酵米曲大肠 黑曲 金黄枯草 ６６．７
０．３％（Ｖ／Ｖ） 啤酵 米曲大肠黑曲 金黄 ６６．７
　　花椒精油对以上菌种具有抑制作用：对菌种的
ＭＩＣ范围为０．８％（Ｖ／Ｖ）～０．３％（Ｖ／Ｖ），其中０．７％
（Ｖ／Ｖ）浓度对六种菌种抑制有效率为１００％，０．６％
（Ｖ／Ｖ）对六种菌种抑制有效率为８３．３％，０．３％浓度
对六种菌种抑制有效率为６６．７％。
４　结论
本实验对微波辅助提取花椒精油进行了研究，发
现微波提取花椒精油的最佳工艺为料液比１∶１０，
６００Ｗ，提取温度５０ ℃，时间２ｍｉｎ，精油的得率为
１８．５６％，与溶剂法相比，精油得率提高了９．９６％。
花椒精油对菌种的 ＭＩＣ范围为０．８％（Ｖ／Ｖ）～０．
３％ （Ｖ／Ｖ），其中０．７％（Ｖ／Ｖ）浓度对六种菌种抑制有效
率为１００％，０．６％（Ｖ／Ｖ）对六种菌种抑制有效率为８３．
３％，０．３％浓度对六种菌种抑制有效率为６６．７％。
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２０１２年第９期
总第３７卷
　　　　　　　　　　　　　　　中 国 调 味 品
ＣＨＩＮＡ　ＣＯＮＤＩＭＥＮＴ 试验研究