全 文 ：.分析检侧唯` :素
白苏中齐墩果酸和熊果酸的 R尸一日尸 LC分离和检测
邹盛勤 1, 许华” , 陈武 1
1
. 江西省天然药物活性成分研究重点实验室 , 宜春学院生物工程研究所 (宜春 3 360 0 )
2
. 宜春学院物理科学与工程技术学院 (宜春 336 0 0)
摘 要 采用超声法提取 白苏中的齐墩果酸和熊果酸 , 用反相高效液相 色谱法分离和测定其含量 。 色谱
柱为K or m a s i z e l s柱 (4 . 6 m m x 2 5 0 m m , 5 林 m ) , 甲醇一 0 . 2 %磷酸溶液 (8 8 : 12 , V / V )为流动相进行等梯度
洗脱 , 流速o . s mL / im n
, 光电二极管阵列检测器 , 检测波长21 0 n m , 柱温28 ℃ 。 齐墩果酸在 (0 . 91 6一 8 . 24 4)
林 g , 熊果酸在 (0 . 83 2一7 . 48 8) 卜 g范围内具有良好线性关系 , 相关系数分别为 0 . 9 9 9和 0 . 9 9 8 , 平均回收率
分别为97 . 2% (R s D 为 2 . 07 %) 和% . 9% (R sD 为 2 . 30 %) 。 选定的色谱条件可精确检测 白苏中齐墩果酸和熊果酸
的含量 。
关键词 白苏 ; 超声提取 ; 齐墩果酸 ; 熊果酸 ; 光电二极管阵列检测器 ; 反相高效液相 色谱
S e Pa ar t jo n a n d D e t e rm jn a t jo n o f O le a n ( ) lic A e id a n d U r s o lie A e id in P e r i l al
户“ t es c e n s (L . ) B r it o r l b y R P一 H P LC
Z O U S h e n g一q i n l
,
x u 卜一u a Z , e 日三N w u l
1
.
K e y L ab o r at o yr o f Ji a n g x i P r o v i n e e fo r R e s e ar e h o n A e ti v e In gr e d i e n t s in N a tu r a l M e d i e in e s
,
B i o e n g i n e e ir gn
R e s e ar e h hi s tiut
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e hun 3 3 60 00 ) 2
,
p妙 s i e a l S e i e n e e an d eT e h n o l o g y C o l le g e , Y i c h u n
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e l lun 3 3 60 0 0 )
A b s tar ct O l
e an o l i c a e id an d ur s o li e ac i d i n eP ir al 户“ tes c e n s ( L . ) B ir t o n w a s e x tr a e t e d b y u l tr a s o n i c e x tr a e ti o n
an d d e t emrt
n e d b y 即 - 11PL C w it h Ph o to d i o d e a r ay de t e e t o r . T h e m e ht o d w a s a PP l ie d w i t h a Kr o m a s i l C 一8 e o lu mn
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,
t h e e o l t l l l l n t e m P e ar t u r e
w a s 2 8℃ . U n d e r ht e s e e o n d it i o n s , ht e e a lib r at i o n evur e o f o l e an o li e a e id w a s l in e ar w iht in ht e r an g e fr o m 0
.
9 1 6
林9 to 8 . 24 4 林9 w it h 下0 . 9 9 9 9 a n d ht e va e r a g e r e e o v e yr w a s 9 7 . 2% w iht R S D = 2 . 0 7% ; t h e e a l i b r at i o n evur e o f
ur s o li e a e i d w a s l i n e ar w i t h i n t h e r an g e fr o m 0
.
83 2 林9 t o 7 . 4 88 林9 w i ht =r 0 . 9 9 9 8 a n d ht e a v e ar g e er c o ve yr w a s
9 6
.
9% w i t h R SD = 2 30%
.
Th e m e t h o d 15 fe a s i b l e fo r d e t :` mr i
n at i o n o f o l e an o li e a e id an d ur s o l i e a e i d i n P e r i l la
,加袱est e e n s ( L . ) B ir t o n .
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ar ay d
e te e t o r ; R r
一
H PL C
白苏尸 e r i l l a fr u r e s c e n s 准 ) B r i t t o n v a r c r i明 a
`hT o n b , d。 。二 n 。伪唇形花科紫苏属一年生草本植
物 , 别名南苏 、 白紫苏 、 苏麻 、 山紫苏 , 是长江中下
游地区田间 、 路边常见的野生植物 l[ , 含有丰富的生
物活性成分 , 开发潜力巨大2[,3 】。 试验采用高效液相色
谱分离白苏中的齐墩果酸和熊果酸 , 并进行定性鉴别
和定量分析 , 以期为白苏的化学成分研究和开发利用
提供依据 。
, 材料与方法
1
.
1 材料
齐墩果酸和熊果酸对照品 : 中国药品生物制品鉴
定所 (批号 : 1 10 7 0 9一 20() 304 , 110 74 2一 2 0() 3 l 4 , 供含
量测定用 ) ; 白苏 : 2 0 07 年9月采自江西宜春 , 经鉴
定为唇形科紫苏属植物白苏的地上部分 ; 甲醇 : 色谱
纯 , 上海陆忠试剂厂 ; 乙醇 : 分析纯 , 江西洪都生物
化学有限公司 ; 其余试剂为分析纯 。
1
.
2 试验仪器
W at er s高效液相色谱仪 , 配有 5巧泵 、 2 9 9 6光电
二级管矩阵检测器 、 柱温箱和 E m oP w e r中文色谱工
作站 ; s K 25 l o H P超声清洗器 , 上海科导超声仪器公
司 : e P 2 2 5 D分析天平 (十万分之一 ) , 德 国S a r t o r i u s
公司 。
1
.
3 试验方法
1
.
3
.
1 标准液的配制
准确称取齐墩果酸对照品.4 58 m g和熊果酸对照品
4
.
16 m g
,
5 m L甲醇溶解后定容至 10 m L作为对照品混
合溶液 。
1
.
.3 2 样品溶液的制备
7 2
· 《食品工业 》20 08 年第 4 期 基全一项 目 : 国家 “ 8 63 ” 计划重点资助项 目 ( 2 0 0 2 A A 2 z 3 21 7)
. 分析检洲 唯` : 素
朋姻叨比吠姗呱
白苏样品干燥后粉碎 , 过 2 0 目筛 。 精密称取 3
g
, 置于具塞三角烧瓶中 , 加人 95 % 乙醇 40 m L , 超
声提取 90 m in , 过滤 , 滤渣用乙醇洗涤 2次 , 合并滤
液至 5 0 m L容量瓶中 , 乙醇定容 。 滤液用微孔滤膜
( .0 45 林 m ) 过滤后备用 。
1
.
.3 3 色谱条件
色谱柱为 K r o m a s i一C , s柱 ( 2 5 0 m m x 4 · 6 m m ,
5 林 m , 带保护柱 ) ; w a t e r s 2 9 9 6光电二极管阵列
检测器 ; 柱温 2 8℃ ; 流动相为甲醇一 0 . 2 %磷酸溶液
(8 8
: 12
,
V邝 ) ; 检测波长 2 10 n m ; 流速 0 . 5 m L/ m i n 。
2 结果与讨论
2
.
1 齐墩果酸和熊果酸检测波长的确定
采用 P A D检测器在 ( 1 9 0 ~ 6 0 0) n m波长范围内扫
描 , 对照品中齐墩果酸和熊果酸在流动相中的最大
吸收波长均为 2 02 . 2 n m , 且紫外吸收光谱一致 ( 图
1 )
。 但由于流动相在低波长处有较强的末端吸收 ,
为减少干扰 , 提取不同波长的色谱进行比较 , 选择
Z 10 lun 为检测波长 , 其信噪比高 , 可在消除流动相干
扰时保证基线平稳和检测的灵敏度 。
纯度角线位于自动阂值线下方 (图 3 ) , 表明齐墩果
酸和熊果酸峰色谱峰均为单一组分吸收峰 , 无其它成
分的干扰 , 与色谱峰顶点 、 起始点和终止点光谱归一
化叠加后结果相吻合4[,5] 。
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齐墩果酸
熊果酸
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图 , 对照品 《 A ) 中齐墩果酸 、 熊果酸的紫外光谱图
.2 2 定性分析
在选定的高效液相色谱条件下 , 对齐墩果酸和
熊果酸对照品溶液及白苏样品溶液进行色谱分析 ,
得到两种物质的色谱图 ( 图2 ) , 齐墩果酸和熊果酸
峰分离度为 1 . 8 , 对称因子均为 1 . 03 , 理论板数分别
为 13 5 21 和 14 1 17 。 色图谱中各物质的保留时间 、 紫
外光谱和峰纯度数据作为待测样品定性分析的依据 。
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产 . . . . . .叫户 . ~ . . , . . . . . . 甲. . - 叫 曰. . . . . . . . ~ 曰 ,】口 SD I D口 1知 刀刀 名 D 】
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1一齐墩果酸 2一熊果酸
图 2 对照品 《A ) 和白苏 《B ) 的H P LC色谱图
.2 3 峰纯度的考察
对照品和样品中齐墩果酸和熊果酸色谱峰在色谱
柱中的保留时间一致 。 色谱峰纯度分析表明 , 对照品
溶液中齐墩果酸和熊果酸峰的纯度角值均小于阑值 ,
图3 对照品中齐墩果酸 ( A ) 和熊果酸 ( B ) 峰纯度
分析 ( 2 1 0 n m )
.2 4 线性关系考察
以 0 . 4 5 8 m g zm L的齐墩果 酸和 0 . 4 1 6 m g /m L的熊
果酸的对 照品混合溶液为样品 , 分别进样 2 林 L 、
6 林 L 、 一。 林 L 、 1 4 卜 L 、 一s 卜 L , 平行 3次 , 考察齐
墩果酸和熊果酸线性关系及其线性范围 。 以进样量
( 林 g ) 对峰面积 ( 卜 .V s ) 平均值进行线性拟合 , 得
齐墩果酸线性回归方程为 y = 5 . 6 0 x 10 , x + 3 . 3 5 x 1 0` ,
相关系数 r 二 0 . 9 9 9 ;9 熊果 酸线性 回归方程为
y = 7
.
3 5 x 10 , x + 4
.
15 x 10
4 , 相关系数=r o . 9 9 9 8 ; 表明当
齐墩果酸进样量在 .(0 9 16一 8 . 2 4 4) 林 g , 熊果进样量酸
在 (0 . 8 3 2 ~ 7 . 4 8 8) 卜 g之间时 , 进样量与峰面积呈 良好
的线性关系 。
.2 5 精密度试验
精密吸取齐墩果酸和熊果酸的对照品混合溶液
10 林 L进样分析 , 重复 5次 , 测得齐墩果酸峰面积的
相对标准偏差 ( R S D ) 为 .0 9% , 熊果酸 R SD为 .0 8 %
(
n = 5 )
。 表明进样方法和仪器精密度良好 。
.2 5 重现性试验
精密称取同一批 白苏样品 5份 , 制备样品溶液 ,
精密吸取 10 林 L进样分析 , 外标法计算含量 , 熊果酸
含量的 R S D为 1 . 2% ( n 二5 ) , 齐墩果酸含量的 R SD为
1
.
5% (
n 二5 )
, 方法重现性良好 。
.2 6 加样回收率试验
准确称取 已知齐墩果酸和熊果酸含量的白苏样
品 5份 , 分别加人齐墩果酸和熊果酸对照品混合溶液
适量 , 配制加标样品溶液 。 进样测定齐墩果酸和熊
果酸的含量 , 计算回收率 。 齐墩果酸和熊果酸的平
均加样回收率分别为 9 7 . 2% , (R s D = 2 . 0 7 % )和 9 6 . 9% ,
(R SD = 2
.
3 0% )
。
《食品工业 》 20 08 年第 4 期
. 分析检洲唯` :素
液相色谱一质谱测定称猴桃中赤霉素和脱落酸的含量
王骏 , 张卉 , 胡梅 , 张喜琦 , 祝建华
山东省产品质量监督检验研究院 ( 济南 25 01 0 )
摘 要 建立 用 H P L C / M S测定称猴桃中赤霉素和脱落酸残留量的方法 。 用 甲醇 一氨水溶液提取试样
中的赤霉素和脱落酸 , 经固相萃取净化 , 以反相液相色谱分 离 、 质谱检测器测定 。 赤霉素和脱落酸的
最低检测限均为 4 . 0 协 g / k ;g 赤霉素回收率92 . 5% 一 1 01 . 4% , 相对标准偏差 1 . 68 % 一3 . 79 % ; 脱落酸回收率
94
.
3%一 9
.
6%
, 相对标准偏差 2 , 14% ~ 4 . 15% 。
关键词 赤霉素 ; 脱落酸 ; 称猴桃 ; 液相色谱一质谱
D e t e rm in a t io n o f G ib b e re llie A e id a n d A t ) s e is ie A c id C o n t e n t s in K iw if r u it b y
H P LC /卜八S
W a n g J u n
,
Z h a n g Hu i
,
Hu M e i
,
;乙h a n g X i一 q i , Z h u J ia n一 h u a
Sh an d o n g Por v in e i a l In s t iut t e o f Por du
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A b s t r a e t A m e t h o d fo
r th e d e t e rm i n a t i o n o f g ib b e r e l li e a e id a n d a b s e i s i e a e i d e o n t e n t s i n k iw i fur i t
s w a s
e s t ab li sh e d b y H PL C从 5 . hT e s am P l e w a s e x tr a e te d w i t h m e ht a n o l an d a n l l l l o n i a w a t e r a s e x tr a e ti o n s o l v e n t s ,
ht e n e l e an
e d uP w iht
s o l i d一h a s e e x tr a e t i o n , a ft e r s e Par a te d b y r e v e r s e d一 P h a s e liq u i d e h r o m a t o g r aP h y, d e t e e t e d
w iht a m a s s d e te e ot .r B o ht d e t e e t ab l e lim i ts o f g i b b e r e l li (: a e i d an d ab s c i s i e a e id w e r e 4
.
0 林g k/ g , T h e r e e o v e ir e s
o f g ib b e r e l l i e a c id w e r e 9 2
.
5%一 10 1
.
4%
,
w iht ht e R SD (
,
f 1
.
6 8%一 3 . 7 9% ; ht e r e e o v e r i e s o f ab s e i s i e a c i d w e r e
9 4
.
3% 一9 9
.
6%
,
w iht th e RS D o f Z
.
14%一4
.
15%
.
K e yw
o dr s g i b b
e er l l ie a e id ; a b s e i s ie a e id ; ik w i fur i t
; H P L CM/ S
赤霉素 ( G A3 ) 和脱落酸 ( A B A ) 是植物体内两
种重要激素 , 调节植物体的生长 、 成熟和衰老 。 准确
测定这两种植物激素的含量 , 研究其变化规律 , 对于
探索果品成熟及贮藏保鲜机理具有重要意义 。 狐猴桃
又称奇异果 , 是一种营养价值极高的水果 , 被称为
“ 水果之王 ” , 深受人民喜爱 。 称猴桃的催熟和保鲜
技术一直是人们不断研究的课题 。 植物组织中G A 3和
AB A含量甚微 , 测定困难 , 国内有放射免疫法 l[] 、 气
.2 7 样品测定
准确吸取前处理后的白苏样品溶液 10 卜 L注人高
效液相色谱仪 , 平行 3次 , 测定齐墩果酸和熊果酸峰
面积 , 按外标法计算样品中熊果酸与齐墩果酸的含
量 , 结果见表 1。 结果表明 , 白苏中含有五环三菇酸
类化合物齐墩果酸和熊果酸 , 所有样品中熊果酸的含
量均明显高于齐墩果酸的含量 。
表 1 白苏中齐墩果酸和熊果酸含量测定结果 / m g g/
编号 ~ 弄墩茱破 -— - - 熊栗破 一 - 一1 1 . 10 3 3 7
2 1 3 1 3名4
3 1
.
16 3
.
1 2
3 小结
采用超声法提取白苏中的齐墩果酸和熊果酸 , 用
反相高效液相色谱法分离和测定其含量 , 方法简单 ,
分离效果好 , 回收率高 , 检测时间较短 。 在选定的色
谱条件下 , H P L C与光电二极管阵列检测器联用 , 可
直接对白苏中齐墩果酸和熊果酸进行定性鉴别 , 并精
确的检测白苏中齐墩果酸和熊果酸的含量 。
参考文献
[] 刘小琴 ,万福珠 ,郑世玲 .紫苏 、 白苏的抑菌实验田 .天然
产物研究与开发 , 2 00 , 12 (:1) 42 一 45 .
?[] 王松涛 . 苏麻对急性肝损伤 的药理作用研究及活性成
分初步分离田1.成都 :四川大学 , 2 00 5 .
【31 M卿 ik N . , H i d e at k a K . , M叮 u im 0 . K . , e t 习 . E s s e n t i al
e ·1 va ir
a it o n o f c u lit va te d a n d w il d p
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户人S仃」. B i o e h e im e al Sy s t e m a t i c s a n d E e o l o gy , 2 00 6 , (3 4 ) : 2 5一
3 7
.
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联用检测 不 同产地荆莽中乌索酸和齐墩果酸口] . 光谱实验
室 , 2 00 7 , 24 (5 ) : 97 2一 97 5 .
!5 ] X u d o n g Y u
a n , H w e e 一 L in g K o h , W a i一 K e u n g C h u i
.
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e d ie al A n习y s is , 20 0 5 , (3 9 ) : 69 7一 70 4
.
《食品工业 》20 08 年第 4 期