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人工栽培黄花石蒜最适遮光度和最佳采收加工方法的研究



全 文 :收稿日期:2014-03-13
基金项目:长沙市科技局重点项目(k1113001-31);国家中医药管理局“药用植物学”重点学科(国中医药发[2009]30 号);湖南省“中药
学”重点学科建设项目资助(湘教通[2011]76 号)
作者简介:周日宝(1962-),男,教授,研究方向:中药资源与质量;Tel:0731-88458233,E-mail:13973134355 @ 139. com。
人工栽培黄花石蒜最适遮光度和最佳采收加工方法的研究
周日宝,王 姣,李风娟,刘湘丹,王朝晖,刘笑蓉
(湖南中医药大学药学院,湖南 长沙 410208)
摘要 目的:确定人工栽培黄花石蒜最适遮光度及最佳采收加工方法。方法:采用 HPLC 法对不同遮光处理
的和不同采收加工方法的人工栽培的黄花石蒜花中加兰他敏含量进行比较分析,从而确定其最适遮光度和最佳采
收加工方法。结果:不同遮光处理的人工种植黄花石蒜花中加兰他敏含量分别为:20%遮光 0. 110%,40%遮光
0. 138%,60%遮光 0. 144%,80%遮光 0. 122%;不同采收期的分别为:花蕾期 0. 104%,始开期 0. 117%,盛开期
0. 128%,枯萎期 0. 139%;不同加工方法处理的分别为:晒干 0. 086%、烘干 0. 115%、阴干 0. 118%。结论:生产上
人工种植黄花石蒜花期以 60%遮光度为最适;盛花期及其后的枯萎期是人工种植的最佳采收期,以烘干方法干燥
为最佳。
关键词 黄花石蒜;最适遮光度;最佳采收加工方法
中图分类号:R282. 2 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2014)11-1929-03
DOI:10. 13863 / j. issn1001-4454. 2014. 11. 005
黄花石蒜 Lycoris aurea(LHer. )Herb. ,又名忽
地笑,为石蒜科石蒜属草本植物〔1〕,其鳞茎外包有
暗褐色膜质鳞被,叶扁长线形,似大蒜,因而得其名。
其味辛、甘,性温,有毒,具有消肿、杀虫作用〔2〕。黄
花石蒜中含有多种生物碱,如石蒜碱、加兰他敏、力
可拉碱等〔3,4〕,其中加兰他敏(Galanthamine)是一种
可逆性胆碱酯酶抑制剂,易透过血脑屏障,产生较强
的中枢作用。临床用药形式为氢溴酸加兰他敏
(Galanthamine Hydrobromide),可广泛用于阿尔茨海
默氏症(Alzheimers disease,AD)、重症肌无力、儿童
脑性麻痹症、多发性神经炎及由于神经系统疾病或
外伤所引起的感觉运动障碍等症治疗。由于该药对
于轻、中度 AD 的治疗具有很好的疗效,且无肝毒
性,随着目前 AD的治疗朝着预防疾病的方向发展,
该药有可能成为 AD治疗的首选药物〔5-8〕。
黄花石蒜鳞茎是药厂目前提取加兰他敏等生物
碱的主要原料,因长期采挖,野生资源濒临枯竭;同
时,产地山丘也被挖得千疮百孔,造成水士流失,环
境破坏严重。虽然有不少化学方法合成加兰他敏的
报道,但都未能实现工业化生产。
黄花石蒜主要分布在湖南、广西、广东、贵州等
地。本课题组在研究中发现黄花石蒜不同部位加兰
他敏的含量存在显著的差异,花中加兰他敏的含量
远远高于地下鳞茎〔9,10〕。一株黄花石蒜的花中加兰
他敏的总量为鳞茎的 2 倍多。故以往单纯从石蒜鳞
茎中提取加兰他敏并不合理,可从黄花石蒜的花中
提取加兰他敏。收获黄花石蒜花作为提取加兰他敏
的药材原料,每年都可以采收花,可长期性收益,采
收花的劳动强度小,劳务费用比重小,投入少,生产
成本低,经济效益、社会效益、生态效益远远优于传
统的采挖地下鳞茎的方法。为此本课题组开展了以
收获花作为加兰他敏的原料药材的黄花石蒜的野生
变家种和规范化种植研究。以期为黄花石蒜规模化
种植提供科学依据,确保药材的内在品质,最终实现
黄花石蒜产业化、GAP 规范化人工栽培,达到彻底
解决加兰他敏原料药材供应问题。现就人工栽培黄
花石蒜的最佳遮光度、最佳采收加工方法的试验研
究结果报道如下。
1 材料与方法
1. 1 田间试验 2011 年 9 月将鳞茎栽种于湖南中
医药大学药植园,种植行株距 20 cm × 25 cm,栽植
深度 8 ~ 10 cm,中耕除草 3 次 /年,施肥 4 次 /年,施
有机肥 3 000 kg和复合肥 100 kg /667 m2。
遮光度试验:采用黑色遮阴网,小区面积 24
m2,分别遮光 20%、40%、60%和 80%,随机排列,设
置 3 个重复。2013 年 7 月盛花期采收。烘干,备
用。
采收期试验:从 2013 年 7 月起分别采收花蕾
期、始开期、盛开期和枯萎期的花。烘干,备用。
最佳产地加工方法试验:采收盛开期的花,分别
采用阴干、60 ℃快速烘干和晒干三种干燥方法。干
燥后备用。
1. 2 药材和试药 将各组干燥后的黄化石蒜花粉
碎,过 60 目筛,备用。
·9291·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 37 卷第 11 期 2014 年 11 月
加兰他敏对照品(南京泽朗医药科技开发有限
公司,质量分数为 99%);95%乙醇、氨水、0. 01 mol /
L盐酸、甲醇、磷酸为分析纯,重蒸馏水,其他试剂均
为分析纯。
1. 3 仪器 Agilent 1260LC 高效液相色谱仪,含二
元泵、柱温箱、手动进样器、紫外检测器,ZORBAX
Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm × 4. 6 mm,5 μm)
(安捷伦科技有限公司);十万分之一电子天平(上
海恒平科学仪器有限公司);KQ-500DE 超声波清洗
器(昆山市超声仪器有限公司);SHB-Ⅲ型循环水式
多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司);101-3AB
型电热鼓风干燥器、植物粉碎机、DK-98-1 型电热恒
温水浴锅(天津市泰斯特仪器有限公司)。
2 方法与结果
2. 1 溶液的制备
2. 1. 1 对照品溶液的制备:精密称取加兰他敏对
照品 0. 00498 g,置于 10 mL 量瓶中,用甲醇溶解并
定容至刻度,即得浓度为 0. 498 mg /mL 的对照品贮
备液。
2. 1. 2 样品溶液的制备〔9〕:取黄花石蒜花样品粉
末约 5 g,加 95%乙醇 50 mL,水浴加热回流 1 h,提
取 2 次,过滤。滤液水浴挥干,残渣加 0. 1 mol /L 盐
酸 25 mL 溶解,过滤。滤液加氨水调 pH 9. 0,然后
以氯仿萃取 3 次,每次 25 mL,合并氯仿液,水浴挥
干,残渣加甲醇溶解,定容至 10 mL,然后再取 1 mL,
用甲醇定容至 5 mL,经 0. 45μm 微孔滤膜过滤后作
为供试品溶液。
2. 2 色谱条件 色谱柱:Agilent Eclipse XDB-C18
(250 mm ×4. 6 mm,5 μm);流动相:0. 02%磷酸-甲
醇(92∶ 8);柱温:30 ℃;流速:1. 0 mL /min;检测波
长:238 nm;进样量:10 μL。所用流动相均在 0. 45
μm微孔滤膜过滤、用 KQ-500DE超声波清洗器超声
30 min后使用。
2. 3 线性关系考察 精密量取 0. 498 mg /mL 的对
照品溶液 0. 25、0. 50、0. 75、1. 00、1. 25、1. 50 mL至 5
mL量瓶中,用甲醇定容至刻度,摇匀,分别得到
0. 025、0. 050、0. 075、0. 100、0. 125、0. 150 mg /mL 标
准品溶液。经 0. 45 μm 微孔滤膜过滤后,分别精密
量取 10 μL注入液相色谱仪,记录峰面积,以进样浓
度为横坐标、峰面积为纵坐标,得其线性回归方程
为:Y = 3. 3711X - 8. 988(r = 0. 9999),结果表明在
25 ~ 150 μg /mL范围内加兰他敏对照品溶液的峰面
积与浓度线性关系良好。色谱图见图 1。
2. 4 方法学考察
2. 4. 1 精密度试验:精密吸取0. 075 mg /mL对照
图 1 黄花石蒜花中加兰他敏 HPLC图
A. 加兰他敏对照品 B. 烘干的黄花石蒜花样品 C. 60%
遮光的黄花石蒜花样品
品溶液 10 μL,连续进样 6 次,记录峰面积,计算得
加兰他敏的 RSD 为 0. 68%(n = 6),表明实验仪器
的精密度良好。
2. 4. 2 稳定性试验:精密吸取 0. 025 mg /mL 对照
品溶液,分别于制备后 2、4、6、8、12、24 h 进样 10
μL,测定并记录峰面积,计算得加兰他敏的 RSD 为
1. 2%(n = 6),表明样品溶液中加兰他敏在 24 h 内
稳定。
2. 4. 3 重复性试验:取同一批黄花石蒜花样品粉
末,按“2. 1. 2”项下方法平行制备 6 份样品溶液,分
别精密吸取 10 μL并进样,记录峰面积,计算得加兰
他敏的 RSD值为 1. 72%(n = 6),表明本方法的重
复性好。
2. 4. 4 回收率试验:取已知加兰他敏含量的黄花
石蒜花样品粉末(含量约为 0. 135%)0. 25 g,共 6
份,分别加入 0. 035 mg /mL 的加兰他敏对照品溶液
1 mL,按“2. 1. 2”项下方法提取制备样品溶液,定容
至 10 mL,无需稀释,并分别进行测定,记录峰面积,
结果见表 1。
2. 5 样品测定 分别取各组样品溶液 10 μL,按
“2. 2”项色谱条件进行测定。
2. 5. 1 不同遮光处理的黄花石蒜花中加兰他敏含
量:分别为:20%遮光 0. 110%,40%遮光 0. 138%,
60%遮光 0. 144%,80%遮光 0. 122%(见图 2);并
且,60%遮光 > 40%遮光 > 80%遮光 > 20%遮光。
2. 5. 2 不同采收期人工种植黄花石蒜花中加兰他
敏含量:分别为:花蕾期 0. 104%,始开期 0. 117%,
盛开期 0. 128%,枯萎期 0. 139%(见图 3);并且,枯
萎期 >盛开期 >始开期 >花蕾期。
·0391· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 37 卷第 11 期 2014 年 11 月
表 1 加样回收率测定结果
样品中含量 /μg 加入量 /μg 测得量 /μg 回收率 /% 平均回收率 /% RSD /%
34. 75 35. 00 68. 1450 95. 41 101. 26 4. 99
69. 2036 98. 44
71. 6908 105. 55
72. 5410 107. 97
70. 5618 102. 32
68. 5813 96. 66
图 2 不同遮光度对黄花石蒜花中加兰他敏含量的影响
图 3 不同采收期黄花石蒜花中加兰他敏的含量
2. 5. 3 不同加工方法处理的黄花石蒜花中加兰他
敏含量:分别为:晒干 0. 086%,烘干 0. 115%,阴干
0. 118%(见图 4);并且,阴干 >烘干 >晒干。
图 4 不同干燥方法对黄花石蒜花中加兰他敏含量的影响
3 讨论
3. 1 最适遮光度研究 黄花石蒜喜阴,喜湿润,常
野生于山间水沟旁的林下阴湿处。遮光程度对石蒜
的营养生长没有显著的影响,但影响其生殖生长和
花的品质。栽培黄花石蒜在营养生长绿株期应以不
遮光或弱度遮光为好,开花期 7 ~ 9 月,最好有遮阴
设施,与野生黄花石蒜的生态习性相一致。从人工
栽培的不同遮光处理的结果(图 2)可以看出,60%
遮光度为黄花石蒜栽培花期最适遮光度。因此生产
上花期选择 50 ~ 60%的遮光为好。
3. 2 最佳采收期 从人工种植黄花石蒜花中加兰
他敏含量动态变化的规律(图 3)可以看出,随着开
花时间的延伸,花中加兰他敏含量不断积累,到花的
枯萎期达到最高峰。此时花的重量也达到最大值,
盛花期及其后的枯萎期是人工种植的最佳采收期。
3. 3 最佳产地加工方法 从不同产地加工方法处
理下的结果(图 4)可以看出,黄花石蒜花中加兰他
敏含量阴干 >烘干 >晒干,从实验结果上看应选择
节省能源和生产成本的阴干方法作为最佳产地加工
方法,但是由于刚采收的花含水量高,一般达 70%
左右,如果不及时干燥,容易发热变黑色,所以要及
时处理,严防霉烂变质,而阴干消耗时间长,易导致
霉烂变质。阴干和烘干对黄花石蒜花中加兰他敏含
量的影响差异不显著,因此生产上宜选择烘干作为
黄花石蒜最佳产地加工方法。
参 考 文 献
[1]中国科学院中国植物志编委会 . 中国植物志[M]. 第
16(1)卷 . 北京:科学出版社,1985:20.
[2]鲍海鸥,陈波 . 药用石蒜属植物资源的开发利用Ⅲ
[J].中国野生植物资源,2002,22(4):31-32.
[3]贾献慧,周铜水,郑颖,等 . 石蒜科植物生物碱成分的药
理学研究[J].中医药学刊,2001,19(6):573.
[4]王晓燕,黄敏仁,韩正敏,等 . 石蒜属植物忽地笑中化学
成分的 GC-MS分析[J].中草药,2007,38(2):188-217.
[5] Murray A,Raskind M. Update On Alzheimer drugs(galan-
thamine) [J]. Neurologiat,2003,9(5) :235-240.
[6]朱奇,李振涛,纪宇 . 加兰他敏治疗阿尔茨海默病作用
机制的研究进展[J].天津药学,2005,17(3):38-40.
[7]洪霞,张振馨,王鲁宁,加兰他敏治疗轻中度阿尔茨海
默病的随机双盲对照研究[J].中华神经科杂志,2006,
39(6):379-382.
[8]王聪,石心红,屠锡德,等 . 加兰他敏治疗阿尔茨海默症
的研究进展[J].药学与临床研究,2008,(2) :45-48.
[9]聂媛媛,用海翔,彭菲,等 . HPLC 法测定黄花石蒜不同
部位的加兰他敏含量[J].湖南中医药大学学报,2009,
29(5):51-53.
[10]李子璇,江海,曹小勇,等 . 石蒜植株中加兰他敏的分
布与含量测定[J].江苏农业科学,2009,(3) :290-292.
·1391·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 37 卷第 11 期 2014 年 11 月