全 文 ：药物分析杂志 C h in J Pha m rAa n l2 0 06, 2 6 ( 1 1 ) 一 1 6 17 一
反相高效液相色谱法测定吊石芭苔中石吊兰素的含量
. 王绍云 ` , “ ,周光明’ * , 黄成 ’ , 王莉 ’ , 高智席 ’
( 1
. 凯里学院应用化学研究所 ,贵州 凯里 5 56 0 0 ; 2 . 西南大学化学化工学院 ,重庆 4 007巧 )
摘要 目的 :建立反相高效液相色谱法测定药用植物吊石曹苔 ( xsL 如no 姗 aP 陇沙二 M二 m . ) 中石吊兰素的含量 。 方法 :用
H y p
e sr il C ,: ( 4
·
6 m m x 300 m m
,
5 协m )色谱柱 , 以甲醇 一 l % 醋酸 ( 85 : 1 5 )为流动相 , 柱温 2 5 ℃ , 335 n m 波长处以外标法测
定 。 结果 : 石吊兰素在 0 . 05 一 50 . 0 协g · m L : ’线性关系良好 ( ; = 0 . 9 998 ) , 检测限 ( s/ N = 3) 为 0 . 0 26 林g · m L 一 ’ ,平均回收率大
于 9 % 。 结论 : 方法简单 、可靠 , 可用于药用植物吊石芭苔中石吊兰素的测定 。
关键词 : 吊石芭苔 ;石 吊兰素 ;反相高效液相色谱法
中图分类号 : Rg l7 文献标识码 : A . 文章编号 : 02 54 一 17 93 ( 20 6 11 一 16 1 7 一 03
R P
w A N G s h
a o 一 y u n ] , 2
一 H P L C d e t e r m i n a it o n o f n e v s d e n s in i n
切s i o n o t u s P a u e沁ur s M a ix m . ’
Z H O U G u a n g 一 m in g Z ” , H U A N G C h e n g Z , W A N G L i Z , G A o z h i 一 x i
( 1
.
In s t i t u t e
o
f A pp l i e d Ch e ha s t叮 , K a i l i C o lle ge , K a i li , G u ihz o u 55 6() 0(} , Ch i n a ;
2
.
S e h o o l Of Ch e m i s t ly a n d Ch e m i e al E n邵 n e e ir n g , So u t h w e s t Un i v e r s i t y , Ch o n g q i n g 4 0() 7 l 5
,
Ch in a )
A b st r a e t O bj e e t i v e : A n H P LC m e th o d w a s e s t ab l i s h e d fo r ht e d e t e rm i
n at i o n o f n e v a d e n s i n in ysL i
o no t us 尹a uc 诉。 -
二 M ax i m . M e ht o d s : Th e e o n d i ti o n s o f e h ro m at o脚p h y : H y p e r s i l C . : e o l u m n ( 4 . 6 m m x 3 0 0 m m , 5 林m ) w a s a -
d o p t e d w i th a m o b il e p h a s e o f m e th a n o l 一 1% a e e t i e a e id ( 8 5 : 15 )
,
th e e o l u m n te m p e r a t u er w a s e o n t or l le d a t 2 5 ℃
a n d t h e w a v e l e n gt h
o f d e t e e t o r w a s s e t a t 3 3 5 n m : e x te rn
a l s t a n d a r d m e th o d w a s q u a n t i t a t i v e a n al y s i s m e t h o d
.
R e
·
s u l st : T h e l i n e a r r a n g e w as 0
.
0 5 一 5 0
.
0 卜g · m L 一 ’ ( r = 0
.
9 9 9 8 )
,
T h e d e et e t i o n l im i t w a s 0
.
0 2 6 林g · m L 一 ’
( S / N
= 3 )
,
t h e a v e r a g e er e o v e叮 w a s o v e r 9 9% . C o n c l u s i o n : Th e m e t h o d h a s b e e n s u e e e s s fu l l y a p p l i e d t o th e d e -
te
mr i
n a ti o n o f n e v a d e n s i n i n ysL i
o n o t o P a u e毋。 、 M ax im . , a n d p r o v e s t o b e s im P l e a n d er l iab l e .
K e y w o r ds
: 匀3 i o n o t。 尸a uc 尹o usr M ax i m . ; n e v a d e n s i n ; R P 一 H P L C
吊石苞苔 ,别名有石更豆 、岩泽兰 、石吊兰 、岩更
豆 (贵州 ) 、条枝草 (浙江 )等 , 为苦芭苔科植物 吊石
首苔 勿 s如nD ous p a uc 尹。 usr M ax im . 的干燥全草 , 附生
在岩石壁或树干上 , 为常绿小灌木 。 本品广泛分布
于我 国南方 [ ’ 浏 , 在贵州系苗族习用药材仁’ 川 , 具有
祛风除湿 、 化痰止咳 、 祛癖通经的功能 , 主要用于治
疗结核病 、 支气管炎 ,疗效显著 ,且无毒副作用 。 石
吊兰素 ( en va d en is n , 别名为岩豆素 )为吊石苗苔的
主要成分之一 [ ’ , , , ` 〕 , 现代药理研究认为 , 石吊兰素
具有 良好的止咳 、 抗炎等功效「’ ] ,并对多种动物产
生降压作用 [` 〕 。 近年来 , 国内外对野生药用植物吊
石首苔的化学成分的研究报道很少仁“ , 5 , 6〕 。 本实验
首次用 R P 一 H P LC 测定野生药用植物吊石芭苔中
石吊兰素的含量 , 对用于分析的样品制备方法进行
了探讨 。 结果表明 :该方法简单 、 快速 、灵敏 ,用于贵
州野生药用植物吊石芭苔中石吊兰素的含量测定 ,
夏季 收 割 的 吊石 首 苔 中 石 吊 兰 素 含 量 高 达
0
.
9 0 5 6% (叶 ) , 0 . 3 0 14 % (茎 ) , 为贵州野生药用植
物吊石首苔的开发利用提供了科学依据 。
1 仪器与试药
L C 一 6 A 高效液相色谱仪 、 岛津 S P D 一 6 AV 紫
外检测器 , u ZO01 型 紫外分光光度计 ( iH tac hi , 日
本 ) , K Q 一 50 型超声波清洗器 ( 昆山市超声仪器有
限公司 ) , T G L 一 1 6G 型离心机 (上海安亭科学仪器
厂制造 ) , A B 204 一 N 型 电子天平 (上海梅特勒 一 托
利多仪器有限公司 ) 。
, 重庆市自然科学基金 ( CS T C 一 2 0以 BB 70 87 ) , 黔东南民族师范高等专科学校 (校科 2 0 505 号 )资助项目
* * 通讯作者 T e l : ( 0 2 3 ) 6 8 3 30 7 18 ; E 一 m a i l : g m z h o u @ swn u . e d u . e n
DOI : 10. 16155 /j . 0254 -1793. 2006. 11. 007
16 1 8一 药物分析杂志h Cin JP h n a rAn al 2 006
,
2 6 ( 1 1 )
.一
石吊兰素对照品 由 D elt a 天然有机化合物信息
中心提供 ,高效液 相色谱法测得其纯度为 9 . 0% 。
甲醇 、无水乙醇 、 9 . 5% 冰醋酸均为分析纯 ,水为二
次蒸馏水 ,所有溶液使用前均由 0 . 45 林m 孔径的滤
膜过滤 。 吊石首苔药材 , 采 自贵州省黔东南苗族侗
族自治州雷公山 ,经西南大学生命科学学院邓红平
副教授鉴 定 为苦首苔科植物吊石首苔 乙” ion ot 。
aP cu 尹or us M ax im . 的全草 。
2 色谱条件
色谱柱 : 大连伯瑞色谱中心 H y p er isl C . 8柱 ( .4 6
m m x 30 0 m m
,
5 林m ) ;流动相为 甲醇 一 l % 醋酸 ( 8 5
: 15 ) ;流速 : 0 . 5 m L · m i n 一 ’ ; 检测 器 : s P D 一 6 A v 紫
外检测器 ;检测波长 3 35 n m ;柱温 : 25 ℃ ;进样量 : 20
林 L 。
3 溶液的制备
3
.
1 对照 品溶液 准确称取石吊兰素对照品 5 . 0
m g
, 甲醇溶解并定容至 or o m L , 摇匀 。 准确吸取对
照品母液 10 0 , 2 0 0 , 3 0 0 , 4 0 0 , 5 0 0 林L , 加甲醇稀释至
10 0 0 林 L ,摇匀 ,备用 。
3
.
2 供试品溶液 取吊石芭苔叶 (或茎 )干燥粉碎
(过 6 0 目筛 ) ,称取 0 10 0 0 9 置具塞三角烧瓶中 ,加
人 5 0% 乙醇 15 m L , 室 温放置 10 h , 超声提取 2 0
m in
,滤过 。 再分 2 次加入 50 % 乙醇 2 m L 超声提取
5 m i n 并滤过 。 合并滤液 ,定容至 2 0 m L ,离心 ( 2 0 0 0
r
·
m s。 一 ’ ) 10 m i n
,取上清液 , 备用 。
4 检测波长的确定
以甲醇作为空 白 , 在 U2 0 01 型紫外分光光度计
上测定含有 一 定量石吊兰 素的 甲醇溶液 , 发现在
2 8 2 n m 和 3 3 5 n m 处有较强吸收 , 其中 3 3 5 n m 处吸
收最强 ,这 同在 S P D 一 6 A V 紫外 一 可见分光光度检
测器上停留扫描得到 的结果一致 。 经验证在 3 35
n m 处读数精密度高 、 稳定性好 ,故选择 3 35 n m 为检
测波长 。 在选定的色谱条件下 , 石吊兰素的平均保
留时间为 10 . 2 m i n 。
5 流动相 的组成和流速对分离效果的影响
流动相的极性对石吊兰素的分离有一定影响 。
当流动相的极性较强时 , 出峰时间过慢 ,峰的扩展严
重 。 为找到分离石吊兰素流动相 的最佳组成 ,实验
比较了甲醇 一 水 、 乙睛 一 水 、 甲醇 一 醋酸 一 水 、 乙睛
一 醋酸 一 水等不同比例洗脱体系 ,结果发现甲醇与
1% 醋酸的比例在 8 5 : 巧 一 8 3 : 17 时 , 石吊兰素的峰
形最好 ,且可保证与提取液中相邻组分实现基线分
离 。 为缩短分析时间 ,提高灵敏度 ,本实验选择流动
相为甲醇 一 1% 醋酸 ( 85 : 巧 ) , 流速为 0 . 5 m L ·
m in
一 ’ 。 对照品与样品色谱图见图
1
1 1 ] ! !
0 4 8 1 2 1 6
A
0 4 8 1 2 t / m i n
图 1 对照品 ( A )与吊石芭苔样品 ( )B H P LC 色谱图
F ig 1 HP LC e h or m a t o gr a n l s o f er fe er n e e s ub
s t a n e e
( A )
a n d s a m p l e ( B )
1
. 石吊兰素 ( n e v a de n s i n ) 2 . 杂质 ( i m p u ir t y )
6 线性关系考察
按照上述色谱条件 ,分别取稀释后的对照品溶
液进行分析 , 结果石 吊兰素浓 度在 0 . 05 一 50 , 0 林g
·
m L
一 `范围 内与峰面积呈 良好的线性关系 。 检测
限 ( s / N = 3) 为 0 . 026 林g · m L 一 ’ 。 回归方程为 :
y 二 2 . 4 1 5 x l o 4 x 一 2
.
9 16 x 10 , : = 0
.
9 9 9 5 (
n = 5 )
7 稳定性试验
取新制备的供试品溶液 ,分别在 。 , 4 , 8 , 1 2 , 24 h
进样 20 卜 L 测定 ,吊石芭苔叶 、 茎中石吊兰素的含量
分别为 9 . 0 5 6 , 3 . 0 14 m g · g 一 ’ ; R s D 分别为 1 . 6% ,
1
.
8%
。 表明供试品溶液在 24 h 内稳定 。
8 方法重复性
取同一供试品 吊石直苔叶 、 茎粉末各 3 份 ,按所
确定的方法和色谱条件制备样品并进行测定 , 吊石
首苔叶 、茎中石 吊兰素的提取率分别为 0 . 9 056 % ,
0
.
301 4% ; R SD 分别为 1 . 2% , 1 . 6% 。 表明方法重
现性较好 。
9 回收率测定
分别精密称取已知含量的吊石芭苔叶 、 茎粉末
0
.
1 0 0 0 9
,各 3 份 ,加人一定量的对照品 ,按 “ 3 . 2 ” 项
下方法处理后测定 ,结果见表 1 。 由表 1 可见 , 石吊
兰素 回 收 率在 9 . 2% 一 102 . 1% 之 间 , R S D 为
1
.
5% 一 2
.
1%
, 表明 R P 一 H P L C 方法进行石吊兰素
的含量分析 ,准确度较高 。
1 0 样品测定
按上述样品制备方法和测定条件 , 测定 5 批 ( 5
一 6 月采集 )样品叶和茎中石吊兰素含量 ,结果 ( n =
3 ) 分 别 为 0 . 8 9 8 8% , 0 . 906 7 % , 0 . 9 0 5 6% ,
0
.
9 1 0 3%
,
0
.
9 0 6 2% 和 0 . 3 0 0 6% , 0 . 3 0 1 1% ,
0
.
3 0 14%
,
0
.
3 0 5 2%
,
0
.
2 9 9 0%
。
药物分析杂志 C h in J p h ram A n a l Z o 0 6
,
2 6 ( 1 1 ) 一 16 1 9 一
表 1 回收率测定结果 ( n 二 3)
T a b 1 R e c o v e仃 est t
样品
(
s
am p l
e
)
加人量
(
a dd de )
/ m g
测得量
( d
e t e e t e d )
/ m g
平均回收率
(
a v e r a召e er e o v e yr )
/ %
R S D
/ %
住21011295住L12aIZ1220刃住L12。.叶 ( le 盯 )
10
.
8
10
.
1
1
.
5
1
.
7
茎 ( s te m ) 10 . 9
9 9
.
2
1 02
.
1
2
.
1
1
.
9
乙醇浓度 ,其次是提取时间 (浸泡时间和超声提取
时间 ) ,影响最小的 因素是温度 。 故最佳条件为 乙
醇浓度 50 % ,室温浸泡时间 10 h , 超声提取时间 30
m i n
,提取温度 2 5 ℃ 。
本法操作简便 、 快速 、 准确 , 可作为石吊兰素的
定量分析方法 ,贵州野生药用植物吊石首苔中石吊
兰素含量很高 ,具有很好的开发价值 。
致谢 :贵州省黔东南州生物研究所廖正中副教授 、 贵州
黔东南民族师专生物系李性苑讲师对本研究工作的支持 。
1 1 讨论
以 5 0% 的乙醇为提取溶剂 , 分别采用超声提
取 、 常温浸泡提取 、索氏提取 3 种提取方法 ,对石吊
兰素提取率进行比较 ,结果表明 : 3 种方法提取率无
显著性差异 ,但经优化 , 先浸泡再超声辅助提取 ,石
吊兰素提取率大大提高 , 故提取方法定为先浸泡再
超声辅助提取法 。
以吊石首苔叶的粉末为供试品 , 比较甲醇 、 乙醇
几种浓度和水作为提取液的提取效果 ,实验证明 , 乙
醇的提取效果最好 。
为考察先浸泡再超声辅助提取的最佳条件 ,经
实验 ,确定以乙醇浓度 、 浸泡时间 、 超声提取时间及
温度为因素 , 以石吊兰素提取率为指标 , 设计如表 2
所示的正交实验 。
表 2 因素水平表
T a b 2 F a c t o r a n d le v e l o f th e o rt h o g o n al et s t
因素 ( af c o[ )r
水平 乙醇浓度 浸泡时间 超声时间 提取温度
( l
e v e l ) (
。
on
c e以田 6on ( nor it
o
d
e s s
) (
s u p e o o n i e ) (
e x t
acr
t i o n
Of
e t h咖 l ) / % / 卜 / m i n ti m e ) / ℃
1 4 0 0 10 2 0
2 5 0 5 2 5 30
3 6 0 10 4 0 4 0
4 7 0 24 5 5 5 0
正交实验的结果对石吊兰素的提取率进行方差
分析 ,结果表明 : 影响石吊兰素提取率的最大因素是
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(本文于 2 0 5 年 10 月 8 日收到 )