全 文 ：第 27卷 ,第 2期 光　谱　实　验　室 Vol . 2 7 , No . 2
2 0 1 0年 3月 Chinese Journal of Spectroscopy Laboratory March , 2 0 1 0
RP-HPLC测定罗勒中石吊兰素的含量
① 贵州省教育厅自然科学类科研项目 ( 2007104)
② 联系人 ,手机: ( 0) 13985286829;传真: ( 0855) 8503572; E-mail: w sy6699@ yahoo. com. cn
作者简介:王绍云 ( 1966— ) ,女 ,贵州省黎平县人 ,凯里学院副教授 ,从事天然产物提取分离及含量测定。
收稿日期: 2010-02-25;接受日期: 2010-02-28
王绍云②　曹 晖　唐文华　吴林冬
[凯里学院应用化学研究所　贵州省凯里市鸭塘镇 (经济开发区 )开元大道 3号　 556011 ]
摘　要　建立反相 -高效液相色谱法 ( RP-HPLC)测定罗勒 (Ocimum basilicum L. )中石吊兰素的含量。
用 Microsorb-MV100-5C18 ( 4. 6mm× 250mm, 5μm)色谱柱 ,甲醇∶ 1%醋酸 = 86∶ 14(V /V )为流动相 ,流速
为 0. 5m L /min,检测波长为 335nm。 石吊兰素浓度在 0. 27— 32. 4μg /m L范围内与峰面积线性关系良好
( r= 0. 9999) ,方法平均回收率大于 99% (n= 9)。 方法简单、可靠 ,可应用于罗勒植物中石吊兰素的含量测
定。
关键词　罗勒 ;石吊兰素 ;反相 -高效液相色谱法
中图分类号: O657. 7+ 2; S567　　　文献标识码: A　　　文章编号: 1004-8138( 2010) 02-0780-05
1　引言
罗勒 (Ocimum basilicum L. )为唇形科罗勒属一年生草本植物 ,又名毛罗勒、香兰、紫苏等。罗勒
原产于亚洲热带地区和非洲 ,目前 ,世界许多国家均有分布 ,我国南部各省均有栽培 ,通常作为医疗
用品和香辛调味料来种植 ,是一种食药兼用的资源植物 [1, 2 ]。罗勒味辛气温 ,具有极为珍贵的药用价
值 ,具有疏风行气、发汗解表、散瘀止痛之功效 ,用于风寒感冒、头痛、胃腹胀满、消化不良、月经不
调、跌打损伤等症的治疗 [ 3, 4]。罗勒中含有挥发油、多糖和黄酮类物质等成分 [ 3, 5— 8]。从罗勒叶中提取
黄酮类化合物能有效的清除自由基 [6 ]。 黄酮类化合物石吊兰素 ( Nevadensin)为罗勒中的主要成分
之一 [7, 8 ]。 现代药理研究表明 ,石吊兰素具有抗结核菌、抗炎、降压、清除自由基、抗肿瘤作用 [9 ]。 目
前 ,国内外对罗勒挥发油的研究比较多 ,而对其中黄酮类化合物的提取分离及含量测定的研究报道
很少。本实验首次用 RP-HPLC测定罗勒中石吊兰素的含量 ,对用于分析的样品制备方法进行了探
讨。结果表明:该方法简单、快速、准确 ,用于贵州罗勒中石吊兰素的含量测定 , 为贵州罗勒的综合
开发利用提供了科学依据。
2　实验部分
2. 1　材料与试剂
罗勒 , 2009年 5— 6月采集于贵州凯里地区。 经本院滕章怀副教授鉴定为唇形科植物罗勒
Ocimum basilicum L.的全草。石吊兰素对照品 ( 99% ,甙尔塔 ( DELT A)天然有机化合物信息中心 ) ,
甲醇为色谱纯 ,无水乙醇、冰醋酸 ( 99. 5% )、二氯甲烷、乙醚均为分析纯 ;所有溶液使用前均由
0. 45μm孔径的滤膜过滤。 实验用水为二次蒸馏水。
ProStar 210 325高效液相色谱仪 ( ProStar 210溶剂传输泵系统、 ProStar 325紫外可见检测器 ,
美国 Varian公司 )。DS 6150D型超声波清洗器 (天津东康科技有限公司 )。AR2140型电子分析天平
[奥豪斯国际贸易 (上海 )有限公司 ]。
2. 2　色谱条件
色谱柱: Microsorb-MV 100-5C18 ( 4. 6mm× 250mm , 5μm);流动相为甲醇∶ 1%醋酸 = 86∶ 14
(V /V ) ;流速: 0. 5mL /min;检测器: Prostar325紫外可见检测器 ;检测波长: 335nm;柱温: 室温 ;进样
量: 20μL。
2. 3　样品提取
取自然干燥的罗勒叶粉末 (过 60目筛 ) ,准确称取约 2g,置于 250mL具塞锥形瓶中 ,加入 70%
甲醇 75m L,室温放置 10h ,超声提取 20min,滤过。 再分 2次加入 70%甲醇 20mL,超声提取 5 min
并滤过。合并滤液 ,定量转移至 100mL容量瓶中 ,用 70%甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,再用微孔滤膜
( 0. 45μm)过滤 ,取续滤液备用。
3　结果与讨论
3. 1　样品提取条件考察
目前罗勒中石吊兰素的提取研究报道很少 [7, 8 ] ,在文献 [7, 8, 10 ]基础上 ,对罗勒中石吊兰素的
提取工艺进行了探讨。
3. 1. 1　提取溶剂的选择
比较了用甲醇 ( 50%、 70% 、 80% )、乙醇 ( 50%、 70% 、 80% )、二氯甲烷、乙醚作为溶剂进行提取
的效果分析 ,发现用 70%甲醇、 50%乙醇提取率相差不大 ,但 50%乙醇提取液过滤较困难 ,滤液总
是有很多小气泡 ,不能排除 ,给 HPLC进样分析带来困难。 而二氯甲烷和乙醚提取率低得多 ,且处
理麻烦。故选择 70%甲醇为提取溶剂。
3. 1. 2　提取方法的选择
以 70%甲醇为提取溶剂 ,分别采用超声提取、常温浸泡提取、索氏提取 3种提取方法 ,对石吊
兰素提取率进行比较 ,结果表明: 3种方法提取率无显著性差异 ,但经优化 ,先浸泡再超声辅助提
取 ,石吊兰素提取率大大提高 ,故提取方法定为先浸泡再超声辅助提取法。
3. 1. 3　提取时间的选择
采用 70%甲醇先浸泡样品 10h,再超声提取 ,分别考察了 20— 50min时提取样品中的石吊兰素
含量 ,结果 20min时提取率不及 30min, 30— 50min内样品含量基本不变 ,故选择 30min超声提取。
3. 2　检测波长的选择
将石吊兰素对照品溶液在 200— 400nm波长范围内进行紫外扫描 ,结果在 282nm和 335nm处
有较强吸收 ,其中 335nm处吸收最强 ,故选择 335nm为检测波长。
3. 3　流动相的选择
色谱方法曾试验用甲醇-1%醋酸体系、甲醇 -乙氰 -1%醋酸体系、乙氰-N , N -二甲基甲酰胺 -
0. 01mol /L草酸体系作为流动相 [10— 12 ] ,按不同比例进行了恒流洗脱的研究 ,结果发现用甲醇∶ 1%
醋酸溶液= 86∶ 14(V /V )时 ,柱效最高 ,石吊兰素与其他组分达到基线分离 ,峰形良好。 所以 ,流动
相为甲醇∶ 1%醋酸溶液= 86∶ 14;流速: 0. 5mL /min;检测波长: 335nm;柱温:室温 ;进样量: 20μL。
在此色谱条件下 ,石吊兰素与其他组分得到了很好的分离 ,色谱图见图 1。 石吊兰素的保留时间约
781第 2期 王绍云等: RP-HPLC测定罗勒中石吊兰素的含量
为 8. 7min。
图 1　对照品溶液 ( A)与罗勒样品溶液 (B ) HPLC色谱图
1—— 石吊兰素。
3. 4　校准曲线的绘制
准确称取石吊兰素对照品 5. 4mg,甲醇溶解定容至 100mL,摇匀 ,即得对照品储备液
( 54μg /mL)。准确吸取上述对照品储备液适量 ,用甲醇分别稀释成 0. 27、 0. 54、 5. 4、 10. 8、 16. 8、
21. 6、 27. 0、 32. 4μg /mL的溶液。按上述色谱条件 ,分别进样 20μL,测定峰面积。以峰面积 (y )为纵
坐标 ,质量浓度 (x )为横坐标 ,进行线性回归 ,得回归方程 y= 334897x- 38129, r= 0. 9999(n= 8)。
结果表明 ,石吊兰素在 0. 27— 32. 4μg /mL的范围内与峰面积呈良好的线性关系。
3. 5　精密度试验
取同一质量浓度的石吊兰素对照品溶液 ,重复进样 6次 ,测定峰面积 ,结果峰面积的 RSD为
0. 82% ,表明仪器的精密度良好。
3. 6　重复性试验
准确称取罗勒叶粉末 5份 ,按所确定的方法和色谱条件制备样品并进行测定 ,石吊兰素的平均
含量为 0. 08076% , RSD为 2. 5% 。表明方法重现性较好。
3. 7　稳定性试验
取新制备的供试品溶液 ,室温放置 ,分别在 0、 1、 2、 4、 8、 12、 24h进样 20μL,测定石吊兰素峰面
积 ,结果峰面积的 RSD为 2. 3% ,表明供试品溶液在 24h内稳定。
3. 8　回收率测定
分别准确称取已测含量的罗勒叶粉末 9份 ,每份约 2g ,平均分成 3组 ,各组分别加入对照品储
备液 4、 6、 8mL,按 2. 3项下方法处理后测定 ,结果见表 1。由表可见 ,石吊兰素回收率在 99. 2%—
100. 2%之间 , RSD为 1. 9%— 2. 5% 。平均回收率 (n= 9)为 99. 7% ,表明方法具有良好的准确度。
3. 9　样品含量测定
分别取 5批 ( 5— 6月采集 )罗勒 ,按 2. 3项下方法制备供试品溶液和 2. 2项色谱条件下进行测
定 ,用外标法计算样品中石吊兰素含量 ,结果见表 2。
4　结论
( 1) 罗勒叶中石吊兰素提取的最佳工艺参数为: 甲醇浓度为 70% ,室温浸泡 10h,超声提取时
间为 30min,提取温度为室温。
( 2)本文建立的测定方法简便、快速、准确 ,可作为罗勒中石吊兰素的定量分析方法。贵州罗勒
植物中石吊兰素平均含量为 0. 08076% ,为罗勒在药用领域的应用提供了理论依据。
782 光谱实验室 第 27卷
表 1　回收率测定结果 (n= 3)
样品含量
( mg)
加入量
( mg)
测得量
( mg )
回收率
(% )
平均回收率
(% )
RSD
(% )
1. 5838 0. 220 1. 7998 98. 2
1. 5991 0. 220 1. 8235 102. 0 99. 2 2. 5
1. 6070 0. 220 1. 8219 97. 4
1. 6038 0. 330 1. 9292 98. 6
1. 6280 0. 330 1. 9557 99. 3 100. 2 2. 1
1. 5998 0. 330 1. 9384 102. 6
1. 5886 0. 440 2. 0251 99. 2
1. 5924 0. 440 2. 0403 101. 8 99. 7 1. 9
1. 5893 0. 440 2. 0205 98. 0
表 2　罗勒提取物中石吊兰素含量 (n= 3)
样品序号 石吊兰素含量 (% ) RSD(% )
1 0. 07914 1. 8
2 0. 07653 2. 2
3 0. 08092 2. 6
4 0. 08436 2. 1
5 0. 08283 2. 4
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783第 2期 王绍云等: RP-HPLC测定罗勒中石吊兰素的含量
Determination of Nevadensin inOcimum Basilicum by RP-HPLC
WANG Shao-Yun　 CAO Hui　 TANG Wen-Hua　WU Lin-Dong
( Institute Applied Chemist ry of Kail i University, Guizhou ,Kaili 556000, P. R.China)
Abstract　 An RP-HPLC method was established for the determination of Nevadensin inOcimum
basilicum L. . The conditions of chromatog raphy: Microsorb-MV100-5C18 column( 4. 6mm× 250mm ,
5μm) was adopted wi th a mobile phase of methanol-1% acetic acid( 86∶ 14) ; the flow rate w as set at
0. 5mL /min, and the waveleng th of detector w as set at 335nm. The calibration curv e w as linear wi thin
the range of 0. 27— 32. 4μg /mL(r= 0. 9999) , the average recovery w as over 99% . The method has
been successfully applied to the determination of nevadensin inOcimum basilicum L. , and proves to be
simple and reliable.
Key words　Ocimum Basil icum L. ; Nevadensin; RP-HPLC
穷酸的西南联大与 3位诺贝尔奖得主
——真正意义上的世界一流大学
西南联大的历史 ,前后不过 8年半 ( 1937年 9月至 1946年 5月 )。当年的物质条件可够穷酸的: 学生宿舍
无一砖一瓦 ,全是夯黄土为墙 ,堆茅草为顶 ,窗户没有一块玻璃 ,仅有几根树枝聊以象征。 绝大多数师生经常
是食不果腹 ,衣不蔽体 ,不时还要在敌机轰炸下逃生。在校学生不超过 2000。可是当年的西南联大 ,在三不管
的地方 ,坚守大学理想 ,主张“教授是大学的灵魂” ,实行“不妄用一钱 ,不妄用一人” ,教师为爱国而教 ,学生为
救国而学 ,吃红薯干 ,点桐油灯 ,以苦为乐 ,励精图治 ,弦歌不辍 ,为人师表 ,一身正气 ,人格独立 ,不党不官 ,沉
潜专注 ,甘于寂寞。一言以蔽之 ,“五· 四”运动所倡导的“科学和民主”精神之传承与发扬光大也!因此 ,培养出
3位诺贝尔奖得主—— 杨振宁和李政道 ,另一位则是朱棣文 (其父朱汝瑾是联大助教 ,其姑朱汝华是教授——
曾昭抡的得意门生 )。
拥有一流的教授阵容 ;运行一套科学高效的学校管理制度 ;推行一种通才教育的培养目标 ;有一位深孚众
望的校长—— 这些因素奠立了西南联大堪称世界一流大学的基础。
西南联大身后的三校 (北大、清华和南开 ) ,当今在校学生总数当在 60000— 70000之间 ,相当于当年的 30
多倍 ,三校校园内高楼大厦林立 ,与当年西南联大的茅屋草舍相比 ,真是天壤之别。 所耗费的资金当在西南联
大的数百倍以上。三校的年寿 ,从 1950年算起 ,已有 59年 ,若从改革开放算起 ,亦有 30年 ,为当年西南联大寿
命的 4倍至 5倍。以人力、财力和时间来看 ,都是当年西南联大无法望其项背的。以如此优越的条件和实力 ,却
又无 1人获得诺贝尔奖 ,其故安在! ?
清华大学 1位教授在美国访问时发现 ,世界一流的哈佛大学大门 ,却是十分古旧俭朴的: 拱型的门洞是用
红砖砌的 ,中间是铁制的大门 ,门框上面是三角形的尖顶。 两边的围墙也是红砖砌的 ,中间是陈旧的铁制护
栏。但是而今中国学校的大门 ,甭说大学 ,就是一些重点中学的校门 ,也比哈佛大学的壮观。在一些国人看来 ,
似乎要成为世界一流大学、一流中学就在于校门以及办公大楼的气派和壮观! ?
我国是世界最大的发展中国家 (最大的穷国 ) ,美国是世界最大的发达国家 (最大的富国 )。 这位清华大学
教授还看到在这世界最大的富国中 ,名牌大学的办公大楼和办公家具仍是俭朴的:楼房大多是 3层的 ,上个世
纪的转盘电话和用过多年的木制家具还在使用。 而在我们这个世界最大的穷国中的某些名牌大学 ,转盘电话
和古朴的木制家具早已 (淘汰 )不见踪影! 仿佛这些“过时”的东西 ,与名牌大学的“身份”太不相称了吧!。
清华大学前校长梅贻琦说过: “大学者 ,非谓有大楼之谓也 ,有大师之谓也”。 靠浮华的“形象工程”能建成
世界一流名牌大学吗?
(本刊摘编自《随笔》杂志 2008年第 2期何兆武《关于诺贝尔奖情节》等文 )
784 光谱实验室 第 27卷