全 文 ：收稿日期:2006 - 02 - 22
陆英片中总黄酮的含量测定
汪　玢a ,张　宁a ,何　京b ,涂剑平b
(南昌大学 a. 理学院化学系;b.医学院药学系 ,南昌 330029)
摘要:目的　建立陆英的质量标准。方法　采用薄层色谱法鉴别熊果酸 ,用 UV 法测定以芦丁计总黄酮的含量。
结果　熊果酸获理想分离 ,芦丁在 30 min 内基本稳定 ,精密度 RSD=0. 64% , 重现性 RSD=0. 53%。 结论　建立
了陆英的质量标准 ,且方法稳定 、简便可行。
关键词:陆英;熊果酸;黄酮;薄层色谱法;含量;测定
中图分类号:R927. 2　　　文献标识码:A　　　文章编号:1000 - 2294(2006)04 - 0148 - 03
　　陆英片由陆英单味药组成 ,功能为疏肝健脾 、活
血化瘀 、利尿消肿。用于急性病毒性肝炎[ 1] 。原陆
英片标准为中华人民共和国卫生部标准 WS3-B-
0294-90 ,质量控制方面 ,原标准只有通则检查[ 2] ,现
建立了以熊果酸为对照的 T LC专属性鉴别 ,以芦丁
计总黄酮的含量测定方法 ,能有效地控制单味陆英
提取加工制成的片剂质量 ,通过对数批中试样品的
检验 ,结果表明本品制剂工艺稳定[ 3] ,质量可控 ,重
现性较好[ 4] 。
1　仪器 、试剂与药品
紫外分光光度计(TU-1900 ,北京普析通用仪器
有限责任公司);芦丁对照品:中国药品生物制品检
定所 ,批号:0080-9705;熊果酸对照品:中国药品生
物制品检定所 ,批号:0080-9705 ,硅胶 G , 薄层层析
用 ,青岛海洋化工有限公司;陆英片剂:由江西天施
康中药股份有限公司提供;其他试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　熊果酸薄层鉴别[ 5]
1)　供试品溶液的制备:取本品 20 片 ,研成粉
末 ,加乙醚 50 mL ,超声提取 30 m in ,滤过 ,挥干溶
剂 ,残渣加甲醇 1mL 使溶解 ,作为供试品溶液。
2)　对照品溶液的制备:取熊果酸对照品 ,用甲
醇制成 1 mg /mL 的溶液 ,作为对照品溶液。
3)　阴性对照溶液的制备:因为陆英片处方为
陆英单味药加辅料组成 ,因此阴性对照溶液仅为辅
料制备成的 ,对薄层鉴别结果不产生干扰。
4)　薄层板的制备:以 0. 3%CMC-Na 为粘合
剂的硅胶 G 板。
5)　展开剂的选择:分别以 ①氯仿-丙酮(9∶
1);②甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20∶4∶0. 5);③环己烷-
丙酮(3∶1);④环己烷-丙酮(6∶4)为展开剂 ,以
10%硫酸乙醇溶液为显色剂 ,热风吹至斑点显色。
结果①、③展开剂均比较理想 ,阴性无干扰 ,最后选
定③展开剂。
6)　薄层层析结果见图 1。2 ～ 5四批陆英片剂批
号分别为20030525、20030526、20030527、20031019。
1:熊果酸对照品;2～ 5:四批陆英片剂
图 1　陆英片剂 TLC图
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2. 2　总黄酮的含量测定[ 6]
1)　对照品溶液的制备:精密称取在120 ℃减压
干燥至恒重的芦丁对照品 20. 2 mg ,置 100 mL 量瓶
中 ,加 70%乙醇适量 ,振摇使溶解 ,并稀释至刻度 ,摇
匀 ,即得(每 1mL 含芦丁 0. 202 mg)。
2)标准曲线的制备:精密量取对照品溶液 1. 0
mL 、2. 0 mL 、4. 0 mL 、6. 0 mL 、8. 0 mL 、10. 0 mL ,分
别置于 25 mL 量瓶中 ,各加水至 10 mL ,加 5%亚硝
酸钠溶液 1. 0 mL ,混匀 ,放置 6 min ,加 10%硝酸铝
溶液 1. 0 mL ,摇匀 ,放置 6 min ,加氢氧化钠试液 10
mL ,再加水至刻度 ,摇匀 ,放置 10 min;以相应的溶
液为空白。照分光光度法(中国药典 2000年版一部
附录 VB)于 500 nm 波长处测定吸收度 ,以吸收度为
纵坐标 ,浓度为横坐标 ,绘制标准曲线 ,求得回归方程
Y=0. 10705X - 0. 00182 , r =0. 9997 ,表明芦丁含量
在 0. 008 ～ 0. 065mg /mL 范围内呈现良好的线性关
系。结果见表 1 、图 2。
3)　精密度试验:精密量取对照品溶液 ,照含量
测定项下的方法测定吸收度 ,重复测定 6次 ,结果芦
丁的 RSD%=0. 64 ,测定数据见表 2 。
4)　重现性试验:取片剂(批号:20030527)样品
6份 ,分别照含量测定项下的方法测定吸收度 ,并从
标准曲线计算总黄酮的含量。结果陆英片剂的平均
含量为 6. 51 ,RSD%=0. 7 ,测定结果见表 3。
回收率试验:分别精密称取片剂样品(批号:
20030527)粉末约 1g ,共 6份。分别精密加入芦丁对
照品适量 ,照含量测定项下的方法测定吸收度 ,从标
准曲线上读出芦丁的量 ,计算回收率。结果表明平均
回收率为 98. 55%, RSD 为 0. 41%,回收率较好 ,测
定结果见表 4。
5)　回收率试验:分别精密称取片剂样品(批号:
20030527)粉末约 1g ,共 6份。分别精密加入芦丁对
照品适量 ,照含量测定项下的方法测定吸收度 ,从标
准曲线上读出芦丁的量 ,计算回收率。结果表明平均
回收率为 98. 55%, RSD 为 0. 41%,回收率较好 ,测
定结果见表 4。
回收率=M 测得量-M 样
M 加入量 ×100%。
表 1　标准曲线测定数据
浓度(mg /m L) 吸收度
0. 008 0. 088
0. 016 0. 169
0. 032 0. 325
0. 048 0. 459
0. 065 0. 617
0. 081 0. 779
图 2　芦丁对照品标准曲线图
表 2　片剂精密度试验结果
浓度(mg /m L) 平均值 RSD(%)
0. 0297
0. 0298
0. 0301
0. 0302 0. 031 0. 64
0. 0297
0. 0300
表 3　陆英片剂重现性试验结果
样品序号 含量(mg /片) 总黄酮(mg /片) RSD(%)
1 6. 55
2 6. 46
3 6. 52 6. 51 0. 70
4 6. 50
5 6. 45
6 6. 56
表 4　陆英片剂回收率试验测定结果
序号 样品中总黄酮量(mg) 加入芦丁量(mg) 测定总黄酮量(mg) 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%)
1 16. 29 13. 03 28. 74 98. 01
2 16. 24 13. 07 28. 90 98. 59
3 16. 31 16. 41 32. 13 98. 19 98. 55 0. 41
4 16. 30 16. 27 32. 27 99. 09
5 16. 34 19. 46 35. 29 98. 57
6 16. 22 19. 41 35. 22 98. 85
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　　6)　样品中总黄酮含量(以芦丁计)的测定:按
标准正文中含量测定方法对数批陆英片进行了总黄
酮含量进行测定 , 并进行 3 次测定。结果见表 5。
结果表明总黄酮含量均>5. 48 g /片 ,因此暂规定本
品每片含总黄酮含量以芦丁(C27H 30O 16)计 ,不得少
于 5. 0 mg 。
表 5　陆英片中总黄酮含量测定结果
批号 总黄酮含量(mg /片) 平均含量(mg /片)
20030526 6. 84
20030527 6. 51
20031019 7. 11
20031020 6. 07
20031021 7. 06
20031210 5. 48 6. 48
20031215 6. 96
20031220 5. 64
20031225 6. 07
20031230 7. 03
3　讨论
本品的薄层层析鉴别均作了阴性对照实验 ,结
果表明各特征薄层斑点不受样品中其他各药的干
扰 ,专属性较强 、简明易行 ,可作为本品定性检测指
标。
对片剂(批号:20030527)中总黄酮的提取分别
采用甲醇 、乙酸乙酯 、无水乙醇三种溶剂回流提取 ,
每种溶剂分别取六次样测定 ,结果表明甲醇提取总
黄酮量平均值为 6. 51 mg /片 , 乙酸乙酯为 4. 85
mg /片 ,无水乙醇为 4. 74 mg /片 ,即甲醇提取总黄
酮量较高 ,故确定甲醇为提取溶剂 。
对片剂(批号:20030527)用超声萃取法 、索氏提
取法 、回流提取法 3种提取方法来提取总黄酮 ,每种
方法分别取六次样测定 ,结果索氏抽提提取总黄酮
量平均值为 6. 57 mg /片 , RSD(%)为 2. 73 ,超声萃
取提取总黄酮量平均值为 4. 66 mg /片 , RSD(%)为
2. 24 ,回流提取总黄酮量平均值为 6. 51 mg /袋 ,
RSD(%)为 0. 53 。表明:超声萃取法总黄酮提取量
太低 ,不宜采用 ,索氏抽提法虽然总黄酮提取量较
高 ,但重现性较差 ,且耗时长(为回流提取法耗时的
2 ～ 3 倍)、条件不易控制 ,故也不适用;回流提取法
提取总黄酮量较高 ,重现性较好 ,条件易控制 ,因此
将回流提取法作为标准正文中的提取方法 。
取片剂(批号:20030527)照含量测定项下的方
法测定吸收度 ,进行稳定性实验 ,从试验数据可以看
出 ,显色后 15 ～ 30 in内 ,吸收度基本稳定 ,因此选
择在显色后 15min进行测定 。
故本方法采用甲醇回流提取 , UV 法测定以芦
丁计总黄酮的含量准确 、快速 、重复性好 ,故可作为
本品的含量测定方法。
参考文献:
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究[ J] .中成药 , 2003 , 25(5):356- 358.
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墩果酸含量[ J] .林产化工通讯, 2003 , 37(6):12 - 14.
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坏使红细胞数减少 ,引起贫血 ,组织和脏器因供氧减
少而发生缺氧 ,并可影响其功能 ,主要表现有水肿 、
黄疸 、贫血和肝脾肿大 ,红细胞溶解产物可引起高铁
血黄素沉积 、胆汁瘀积 、胆红素增多 。黄疸深者可能
并发核黄疸 。新生儿及其母亲若检测出不规则抗
体 ,应对患儿作出相应的换血和治疗。
从 15 例不规则抗体阳性检测结果来看 ,多为
Rh糸统的单一不规则抗体引起 ,由于 D抗原的免
疫性强于 E 抗原 ,故产生抗体抗-D 的几率高于抗-
E;抗-M 为冷凝集素 ,在 37 ℃少有活性 ,一般在体
内不引起溶血反应;含有自身抗体的患者以避免输
血为最佳 ,若输血必要时 ,应给予维持足够输氧所需
的最少量红细胞。
总之 ,对患儿输血前进行不规则抗体检测 ,能有
效预防溶血输血反应的发生 ,可提高小儿输血的安
全性和有效性 。
[江西省卫生厅立项课题(20041135)]
参考文献:
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