全 文 :飞天蜈蚣七不同提取物的药效学研究
杨秦雁 李 博 陕西省中医医院药剂科 (西安710002)
摘 要 目的:研究比较飞天蜈蚣七不同极性部位提取物的抗炎、镇痛、抗疲劳和耐缺氧的活性。方
法:分别采用二甲苯所致耳廓肿胀实验、角叉菜胶所致小鼠足肿胀实验、小鼠扭体法、热板
法、负重游泳实验和常压耐缺氧实验对其抗炎、镇痛、抗疲劳、和耐缺氧活性进行研究。结
果:飞天蜈蚣七提取物乙醇部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位均表现出不同程度的抗炎、镇
痛、抗疲劳作用,尤其以正丁醇部位活性最为显著,而其各部位的耐缺氧活性均不高。结论:
飞天蜈蚣七不同极性部位提取物均具有抗炎、镇痛、抗疲劳作用,其中正丁醇部位活性最强。
主题词 中药制剂 实验,动物 @飞天蜈蚣
【中图分类号】 R258.6 【文献标识码】 A doi:10.3969/j.issn.1000-7369.2016.09.073
Comparative studies on pharmacodynamics effects of different
extracts from Aralia Chinensis L
Department of Pharmacy,The Shaanxi Province Hospital of Traditional
Chinese Medicine(Xi’an 710002) Yang Qinyan Li Bo
ABSTRACT Objective:To study the anti-inflammation,analgesia,anti-fatigue and anti-hypoxia activity of the
different extracts from Aralia chinensis L.Methods:The pharmacological actions of anti-inflammation and analgesic were
observed by xylene-induced ear sweling in mice,carrageenan-induced paw sweling in mice,acetic acid-induced writhing
test and the hot-plate test in mice.Meanwhile,the anti-fatigue and anti-hypoxia effects were investigated by the load bear-
ing swimming test and the hypoxia tolerance test respectively.Results:The ethanol extraction,ethyl acetate extraction
and n-butanol extraction of Aralia chinensis L.al had anti-inflammation,analgesia and anti-fatigue effects.The n-butanol
extraction had the most significant effect.The anti-hypoxia activity of al the different extracts was weak.Conclusion:The
different extracts from Aralia chinensis L.al showed the anti-inflammation,analgesia and anti-fatigue effects.And the n-
butanol extract had stronger activity.
KEY WORDS Chinese materia medica preparation Animal experimentation @ Aralia Chinensis L.
飞天蜈蚣七为五加科植物楤木的根皮,分布于陕西、河北、
山东、浙江、江西等地,在陕西主要分布于秦岭、巴山各个山区,
主治风湿性关节炎、急慢性肝炎、跌打损伤、痈肿等[1-2]。目前
已有文献报道飞天蜈蚣七具有抗肝纤维化作用,但其它药理活
性有待进一步研究[3-4]。本研究旨在进一步对飞天蜈蚣七不同
极性部位提取物进行药理研究,探讨各部位的药理活性差异,
筛选飞天蜈蚣七的主要活性部位,为飞天蜈蚣七药材的进一步
开发利用提供参考。
1 材 料 1.1 动 物 昆明种小鼠,体重20±2g,雌
雄兼用,购于第四军医大学实验动物中心,合格证号为陕动准
字第01号。
1.2 仪 器 旋转蒸发仪(上海申胜生物技术有限公司);
AY220电子分析天平(日本岛津分析仪器公司);HH-4数显恒
温热板水浴锅(国华电器有限公司);8mm打孔器。
1.3 实验试药 飞天蜈蚣七药材采自秦巴山区、角叉菜
胶、阿司匹林肠溶片、十全大补丸、二甲苯、冰醋酸。
2 方 法 2.1 样品制备 取飞天蜈蚣七药材,粉碎,过
3号筛,用75%乙醇冷浸提取,回收溶剂,得乙醇粗提取物,即
乙醇部位;然后依次用石油醚、乙酯乙酯、正丁醇进行索氏提
取,将各部分提取液减压浓缩,回收溶剂,得到飞天蜈蚣七各极
性部位提取物,分别为石油醚部位、乙酯乙酯部位、正丁醇部
位。临用前将各提取部位密封置冰箱中冷藏,灌胃前用1%吐
温-80溶液混悬均匀。
2.2 抗炎活性考察 2.2.1 对二甲苯所致小鼠耳郭肿胀
的影响[5]:选取昆明种小鼠140只,雌雄各半,随机分成14组,
每组10只。空白对照组给予1%吐温-80溶液,阳性对照组给
予阿司匹林(0.2g/kg),给药组分别为乙醇部位组、石油醚部位
组、乙酸乙酯部位组、正丁醇部位组,给药剂量分别设高、中、低
剂量组(4、2、1g/kg生药)。口服灌胃给药,1次/d,连续给药
7d,末次给药后,于小鼠右耳涂抹0.5ml/只二甲苯致炎,左耳不
涂,1h后颈椎脱臼法处死小鼠,剪下左右两耳,用直径8mm打
孔器在相同位置打下耳片,称量,计算不同给药组的肿胀度及
肿胀抑制率。
2.2.2 对角叉菜胶所致小鼠足趾肿胀的影响:取昆明种小
鼠,分组及给药同“2.2.1”,连续灌胃给药7d,末次给药后1h,于
各小鼠右后足皮下注射1%角叉菜胶0.05ml/只,5h后于同一
位置剪下左右两足,称量,肿胀度即为右足质量减去左足质量,
并计算肿胀抑制率。
1621陕西中医2016年第37卷第9期
2.3 镇痛活性考察 2.3.1 小鼠热板镇痛试验[6]:取雌
性小鼠,水浴温度调节为(55±0.5)℃,记录小鼠足底接触热板
至出现舔后足反应的时间即为小鼠痛阈值,选取痛阈值在5~
30s小鼠140只。分组、给药方法和剂量同“2.2.1”,连续灌胃给
药7d,分别于给药前及末次给药1h后分别测定小鼠痛阈值,痛
阈值超过60s者按60s计算,并计算痛阈提高率。
2.3.2 醋酸所致小鼠扭体反应的影响:选取小鼠140只,
分组及给药同“2.2.1”,末次给药1h后,于各小鼠腹腔注射0.
6% 醋酸溶液0.2ml/10g,观察并记录注射醋酸溶液后20min内
小鼠出现扭体(伸展后肢、臀部抬高、腹部内凹、蠕行)的次数,
并计算给药组的扭体抑制率。
2.4 抗疲劳能力考察 负重游泳实验 选取昆明种小鼠,
分组、给药方法和剂量同“2.2.1”,阳性对照组给予十全大补丸
(2g/kg),末次给药1h后,开始负重游泳实验。将小鼠体重的
10%铅块绑至背部,负重游泳,放入水温30℃左右的水浴锅中
游泳,当小鼠沉入水中6s不能浮出水面时,即为体力耗竭时间。
比较给给药组的体力耗竭时间,通过计算游泳力竭时间延长率
来评估其抗疲劳能力。
2.5 耐缺氧能力考察 常压耐缺氧实验选取昆明种小鼠,
分组、给药方法和剂量同“2.2.1”,阳性对照组给予十全大补丸
(2g/kg)。末次给药1h后,将小鼠放入密闭瓶内,瓶内装有
10g钠石灰,加盖瓶塞。记录放入小鼠至小鼠因缺氧而死亡的
时间,并计算耐缺氧存活时间延长率。
2.6 统计学方法 实验数据采用SPSS 18.0统计软件进
行分析,实验结果均以珚x±s表示,组间比较t检验,以P<0.
05,表示有统计学意义。
3 结 果 3.1 抗炎活性 飞天蜈蚣七各极性部位提取
物均表现出不同强度的抗炎作用。其中以正丁醇部位作用最
为明显,其高剂量组抑制率达到了68.4%,接近于阿司匹林组
水平77.3%,低剂量组抑制率也达到35.6%;乙醇部位和乙酸
乙酯部位的抗炎作用也较为明显;石油醚部位抗炎效果不明
显。与空白对照组比较,正丁醇部位各剂量组对二甲苯所致的
耳廓肿胀均有显著的抑制作用(P<0.01),且存在一定的量效
关系。飞天蜈蚣七各极性部位对角叉菜胶致小鼠足肿胀均有
一定的抑制作用,正丁醇部位抑制作用最显著,而石油醚部位
几乎没有抗炎作用。其中当给药剂量为4g/kg时,正丁醇部位
的作用最强,达到57.3%,乙醇部位次之,为50.1%,乙酸乙酯
部位也有一定抗炎作用(37%),与空白对照组相比,显著抑制
小鼠足趾肿胀程度(P<0.05),且呈现量依赖性。见表1。
表1 对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀和角叉菜胶所致小鼠足趾肿胀的影响(n=10)
组 别 剂量(g/kg)
耳肿胀模型
耳廓肿胀度(mg) 抑制率(%)
足肿胀模型
足肿胀度 抑制率
空白对照组 - 22.5±2.5 40.3±3.6
阿司匹林组 0.2 5.1±1.3 77.3 10.3±2.4 77.3
乙醇部位 1 17.3±3.7 23.1 32.2±3.2 20.1
2 14.2±2.4 36.9 26.8±3.3 33.5
4 9.8±2.1 56.4 20.1±2.9 50.1
石油醚部位 1 20.1±1.1 10.7 36.8±2.8 8.7
2 17.6±2.7 21.8 35.6±1.3 11.7
4 17.3±3.2 23.1 35.1±2.5 12.9
乙酸乙酯部位 1 17.1±3.5 24.0 34.4±3.3 14.6
2 13.9±1.2 38.2 27.2±1.8 32.5
4 13.3±2.2 40.9 25.4±1.4 37.0
正丁醇部位 1 14.5±2.6 35.6 28.3±2.9 29.9
2 10.6±2.0 53.3 23.4±3.2 41.9
4 7.1±1.5 68.4 17.2±2.0 57.3
3.2 镇痛活性 从表2可见,热板试验表明飞天蜈蚣七不
同极性部位提取物对醋酸所致的小鼠扭体反应均有一定的抑
制作用,而正丁醇部位抑制作用最强,高剂量组扭体反应抑制
率达到60.1%,阿司匹林组为79.1%;正丁醇部位各剂量组与
空白对照组相比,扭体次数显著减小(P<0.05),且有一定的量
效关系;乙醇部位和乙酸乙酯部位对小鼠扭体也有一定的抑
制,但不如正丁醇部位,而石油醚部位作用并不明显。从表2
可见,飞天蜈蚣七正丁醇部位提取物能显著减少醋酸所致的小
鼠扭体次数,有明显的镇痛作用。正丁醇部位高剂量组对痛阈
的提高率最大,达到62.9%,接近于阳性对照组阿司匹林(66.
9%)的镇痛效果;而且乙醇部位和乙酸乙酯部位的高剂量组对
痛阈的提高率分别达到53.5%和44.2%,而石油醚部位对小鼠
痛阈没有明显影响。
2621 陕西中医2016年第37卷第9期
表2 对扭体法和热板法小鼠疼痛的影响(n=10)
组 别 剂量(g/kg)
扭体法
扭体次数 抑制率(%)
热板法
给药前痛阈值 给药后痛阈值 痛阈提高率(%)
空白对照组 - 38.3±3.7 14.4±3.3 14.3±1.4
阿司匹林组 0.2 8.0±1.1 79.1 13.6±2.7 22.7±1.8 66.9
乙醇部位 1 30.2±1.9 21.1 14.1±2.1 16.2±2.3 14.9
2 26.3±2.8 31.3 13.8±3.4 17.1±0.9 23.9
4 20.0±2.1 47.8 12.9±1.9 19.8±1.5 53.5
石油醚部位 1 35.0±1.6 8.6 13.3±1.2 15.1±2.1 13.5
2 27.4±3.1 28.5 12.8±3.1 15.5±1.3 21.1
4 25.4±1.7 33.7 13.2±2.5 16.3±1.5 23.5
乙酸乙酯部位 1 31.3±2.5 18.3 14.4±2.2 16.5±1.3 14.6
2 26.3±2.2 31.3 14.2±1.4 17.2±3.1 21.1
4 23.9±1.4 37.6 12.9±2.8 18.6±2.4 44.2
正丁醇部位 1 29.3±2.3 23.5 14.1±1.9 17.4±2.1 23.4
2 22.4±1.5 41.5 12.8±3.1 18.3±1.2 42.9
4 15.3±3.2 60.1 13.2±2.6 21.5±2.8 62.9
3.3 抗疲劳能力 由表3可知,正丁醇部位和乙酸乙酯部
位高剂量组小鼠游泳时间有一定延长,明显低于阳性对照组;
而其他给药组均没有明显延长小鼠力竭游泳时间。飞天蜈蚣
七正丁醇部位具有一定的抗疲劳作用,但抗疲劳能力不强。
3.4 耐缺氧能力 如表3所示,十全大补丸组能显著延长
小鼠存活时间(P<0.05),延长率可达到31.7%。而其它给药
组对小鼠常压耐缺氧能力均没有显著影响,正丁醇部位的延长
率能达到9.2%,存活时间延长率不高,且规律性不强。表明飞
天蜈蚣七不同极性部位提取物不能提高小鼠的耐缺氧能力。
表3 抗疲劳和耐缺氧能力考察结果(n=10)
组 别
剂量
(g/kg)
抗疲劳实验
游泳力竭时间(min) 延长率(%)
耐缺氧实验
存活时间(min) 延长率(%)
空白对照组 - 6.3±0.7 14.2±1.7
十全大补丸组 2 10.2±1.1 61.9 18.7±3.1 31.7
乙醇部位 1 6.9±0.9 9.5 15.0±2.9 5.6
2 7.3±0.5 15.8 14.8±2.5 7.7
4 7.9±0.7 25.3 15.3±2.1 2.8
石油醚部位 1 6.5±0.6 3.2 14.6±2.2 2.8
2 6.9±1.2 9.5 14.4±1.9 1.4
4 7.5±1.0 19.0 15.2±3.0 6.3
乙酸乙酯部位 1 7.1±0.5 12.7 14.4±2.9 1.4
2 7.5±1.2 19.0 15.2±1.2 7.0
4 8.1±1.4 28.6 15.5±0.8 9.2
正丁醇部位 1 7.0±1.3 11.1 15.0±1.3 5.6
2 7.6±1.5 20.6 15.5±1.1 9.2
4 8.3±1.2 31.7 15.4±2.2 8.5
4 结 论 本研究结果表明,飞天蜈蚣七不同极性部位
提取物均有一定的抗炎、镇痛和抗疲劳的疗效,其中正丁醇部
位的活性最强,接近于阳性对照组的效能,与空白对照组相比,
具有显著性差异(P<0.05),且呈现一定的剂量依赖性;而对小
鼠常压耐缺氧能力均没有显著影响,存活时间延长率不高,且
规律性不强。
飞天蜈蚣七根皮中富含的楤木皂苷 A、银莲花苷、楤木皂
苷D、竹节人参皂苷Ib等,均属于三萜皂苷类化合物,而三萜皂
苷类化合物具有抗炎、镇痛、抗肿瘤、杀菌、降胆固醇等功效。
由于正丁醇部位富含三萜皂苷成分,故推测飞天蜈蚣七正丁醇
部位的抗炎、镇痛和抗疲劳的活性与三萜皂苷成分密切相关。
此外,飞天蜈蚣七药材先经过乙醇提取,其中含有包括三萜皂
苷、胆碱、挥发油等在内的大量有机成分,因此也表现出一定的
抗炎镇痛活性,但活性不如正丁醇部位。本研究仅对飞天蜈蚣
七不同部位提取物的抗炎、镇痛和抗疲劳等的活性进行了研
究,而对正丁醇部位的化学成分并未进行详细研究,接下来本
课题组也将对飞天蜈蚣七正丁醇部位进行提取分离,从而得到
飞天蜈蚣七的三萜皂苷类化学成分,进而确定飞天蜈蚣七生物
活性的有效成分。有研究表明,当机体组织发生炎症后,组织
细胞会生成并释放多种炎症介质,比如白细胞介素-1,肿瘤坏死
3621陕西中医2016年第37卷第9期
因子,前列腺素2、组胺等,从而产生炎症反应;镇痛作用包括中
枢镇痛作用和外周镇痛作用,外周镇痛作用与炎症因子密切相
关;抗疲劳作用主要通过提高体内抗氧化酶SOD的水平,加强
机体清除自由基、抗氧化作用,从而达到抗疲劳效果。本研究
结果显示飞天蜈蚣七正丁醇部位有一定的抗炎、镇痛和抗疲劳
的疗效,而关于该部位抗炎、镇痛及抗疲劳活性的作用机理尚
需进一步深入研究。
综上所述,飞天蜈蚣七不同极性部位提取物均有一定的抗
炎、镇痛和抗疲劳的疗效,其中正丁醇部位的活性最强,乙醇部
位次之,石油醚部位活性不明显,而对小鼠常压耐缺氧能力并
没有显著影响。说明飞天蜈蚣七正丁醇部位是其活性有效部
位,而对正丁醇部位化学成分并未进行详细研究,本课题组也
将进一步对飞天蜈蚣七正丁醇部位进行提取分离,以期确定飞
天蜈蚣七生物活性的有效成分,从而深入研究其抗炎、镇痛和
抗疲劳的作用机理,为飞天蜈蚣七药材质量控制、临床合理用
药和综合开发利用提供科学依据。
参考文献
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(收稿2016-04-21;修回2016-05-30)
*陕西省社会发展科技攻关项目(2012SF2-11-3)
▲陕西户县森工医院(户县710300)
△陕西中医药大学附属医院(咸阳712000)
◇通讯作者
莪黄汤保留灌肠对人结肠癌SW480移植瘤生长及VEGF表达的影响*
侯俊明 任占良▲ 侯杰军△◇ 杨得振△ 董 明△ 魏 辉△ 贾 奇△ 任小朋△ 贾 勇△
陕西中医药大学(咸阳712000)
摘 要 目的:研究莪黄汤对人结肠癌SW480移植瘤生长及VEGF的影响。方法:选健康SPF级
BALB/c小鼠2只,雌性,年龄4~6周,体重18~22g;健康SD大鼠40只,体重200±15g。
造模后,40只SD大鼠随机分为模型组、对照组、阳性对照组、莪黄汤高剂量组、莪黄汤低剂
量组,每组10只,接种后1周开始给药治疗。四组均给予饲料、自由饮用水,分别用相应药
物干预处理2周。观察莪黄汤对人结肠癌SW480移植瘤生长及抑瘤作用的影响,运用S-P
免疫组化法分析移植瘤内血管内皮生长因子的表达。结果:莪黄汤对SW480移植瘤大鼠瘤
体生长有抑制作用,但弱于5-FU;该药等促进大鼠胸腺、脾脏的生长,提升了机体的免疫力
及抗肿瘤能力;阳性对照组与药物组对SW480移植瘤大鼠VEGF表达的影响相近;可抑制
肿瘤细胞的生长,促进肿瘤细胞的凋亡。结论:莪黄汤对SW480移植瘤细胞的生长有明显
抑制作用,减少SW480移植瘤表达VEGF,促进肿瘤细胞凋亡。
主题词 结肠肿瘤 灌肠 @莪黄汤 动物,实验
【中图分类号】 R574.62 【文献标识码】 A doi:10.3969/j.issn.1000-7369.2016.09.074
中医药抗肿瘤治疗既能扶正、增强机体免疫功能,又能杀
灭肿瘤细胞,还能活血并改善高黏高凝状态,在肿瘤治疗过程
中发挥着重要的作用[1]。本次实验通过对SW480荷瘤大鼠免
疫功能影响的研究,探讨了莪黄汤对人结肠癌移植瘤的抑瘤作
用及对VEGF表达的影响。
1 材 料 1.1 实验材料 健康SPF级BALB/c雌性
小鼠2只,鼠龄4~6周,体重20±2g;健康SD大鼠40只,体重
200±15g;以上动物均购自第四军医大学实验动物中心,其中
健康SPF级BALB/c小鼠代养在第四军医大学动物实验中心
SPF条件下的超净层流笼中;人结肠癌SW480细胞株购自第
四军医大学实验动物中心。莪黄汤组方:莪术、大黄、昆布、薏
苡仁。阳性对照药物:5-FU购自陕西中医学院附属医院。(批
准文号:国药准字 H31020593,规格0.25g/支)。实验试剂盒:
鼠抗人VEGF免疫组化试剂(产品货号:A003-3)。
2 实验方法 2.1 造模及分组灌肠 将莪黄汤生药
80g,煎汤浓缩为生药含量为4g/ml冷藏备用(陕西中医学院药
理实验中心制备),用前稀释至所需浓度。选健康 SPF级
BALB/c小鼠2只,雌性,年龄4~6周,体重18~22g;健康SD
大鼠40只,体重200±15g。在健康SPF级BALB/c小鼠背部
种植人结肠癌SW480细胞,制成实体瘤模,观察两周后成瘤率
4621 陕西中医2016年第37卷第9期