全 文 ：第 1 9 卷 第 1 期
1 9 9 2年
上 海 医 科 大 学 学 报 V o l . 1 9 , N o . 1
A C T A A C A D B M I A E M E D I C工N A E 吕H A N e H A I 1 9 92
掌叶半夏总蛋白的提取 、 化学分析和
对小鼠 S一180 瘤株的抑制作用
孙光星` 丁声领` , 钱瑶君
(上海医科大学基础医学部化学教研室 )
提要 从中草药掌叶半夏 (八、 il a 娜da 沁。协 S曲 。 t均中提取分离出的总蛋白成分 , 经化
学分析证实 , 总蛋白中不含磷 , 不含脂蛋白 , 含有糖成分 ; 经聚丙烯酞胺凝胶电泳 ( P A G E ) 分
析 , 总蛋白中含有十余种蛋白质 , 蛋白质含量 96 . 1% 。 动物实验显示 , 掌叶半夏总蛋白 1% 生
理盐水液每天给每只小鼠腹腔注射 0 . 1二 1, 对小鼠 S一1 80 瘤株的抑制率为 50 . 1% ~ 67 . 0% ,
平均为 58 . 3% 。 经病理切片观察 , 实验组和对照组 8 一180 瘤块细胞在细胞坏死数、 核分裂数
和细胞变性数三个指标上均有显著性差别 。 结果表明 , 掌叶半夏总蛋白对小鼠 8一 18 0 癌细胞
生长具有明显抑制作用 。
关键词 掌叶半夏 ; 蛋白质 ; 小鼠肉瘤一 1 8。 ; 抑瘤作用
掌叶半夏在临床上具有治疗子宫颈癌的作用山 。 为了寻找其有效成分 , 1 9 75 年从其
中分离出户谷留醇 , 临床用月一谷街醇治疗子宫颈癌的有效率为 75多〔 一 ’ 。 蛋白质是一类
最重要的生物活性物质 , 掌叶半夏的蛋白质成分是否具有抑瘤活性呢 ? 为此 , 我们从掌叶
半夏中提取分离出蛋白质成分 (称为总蛋白 ) , 对其进行化学分析 , 并观察了总蛋白对小鼠
肉瘤 S一1 8 0 的抑制作用。
材 料 与 方 法
动物与肿瘤 昆明种小白鼠 , 雄性 , 体重 1 8~ 2 2 9 , 本校动物部提供 ;携带肉瘤 S一1 80
小白鼠由中科院药物所提供 。
原料和试剂 新鲜掌叶半夏购自河南许 昌地 区 ; 牛血清白蛋白为中科院生化所产品 ;
铂酸按 、 -a 茶酚 、 丙酮为国产分析纯 ; 丙烯酞胺为临海化学厂产品 , 经氯仿重结晶 ; 甲叉双
丙烯酞胺为广州化学试剂厂产品 , 经丙酮重结晶 ; 苏丹黑由 E . M e or k 公司进 口 ; 考马斯
亮蓝 G招50 、 R 一2 50 为美国进 口分装。
掌叶半夏总蛋 白的提取和分离 将洗净去皮的新鲜掌叶半夏加生理盐水匀浆 , 将匀
浆用 3 0 0州m i n 离心 20 o in , 将上清液冷至 4OC , 加入 2 倍体积 4℃ 丙酮 , 沉淀用 0 . 9界
N a o l 溶解 ,溶液在 40 0 下对蒸馏水透析 48 h , 沉淀离心除去。 上清液冰冻真空干燥 , 一 2 0 0
保存。
总蛋白的含 t 测定和组成分析
蛋白质含量侧定 考马斯亮蓝一斗2 50 染色法。 标准蛋白为牛血清白蛋白。 样品液为
. 研究生 , 现在徐州医学院化学教研室 “ 导师
上 海 医 科 大 学 学 报 1 9卷
勺 -~ ~ ~ -~ ~ ~ ~ ~ ~ - - - -
16 0 补g 总蛋白/ ml生理盐水 。
含磷量的刚定 钥酸按染色法 。
含糖成分的鉴定 莫利西试剂法。
非脂蛋白的鉴定 苏丹黑染色法 。
电泳分析 不连续系统 P A e E法 。 电泳图谱经岛津双波长薄层层析扫描仪 0 5- 1 90
作出扫描曲线。 波长 R一 7加 n` , I 一 58 o n m 。
掌叶半夏总蛋白对小鼠肉瘤 Swe 180 的抑制作用
小 鼠肉瘤 S一80 模型的建立 小鼠 8 0 只 , 随机分为对照组和实验组 , 每组 1 0 只 。 将
携带 S一80 小鼠解剖取瘤 , 选择生长良好、 无坏死 、 无液化的瘤组织 , 切成 o . 6 m m “ 大小 ,
用接种注射针头注入小鼠腋下 。 接种前称重 。
给药方法 接种后第二天给药 , 实验组每只小鼠腹腔注射 1多掌叶半夏总蛋白生理
盐水液 0 . l m l/ d , 给药 13 ~ 15 d 。 对照组每只小鼠腹腔注射生理盐水 o . l m l/ d 。
抑瘤效果及统计学处理 于最后一次给药次日解剖取瘤称瘤重和体重 , 计算抑制率。
组间比较采用成组 云检验 。
实验组和对照组 8 - 18 0 组织病理切 片的制备和观察 将肉瘤 S一18 0 用 10 % 甲醛 洛
液 固定 , 1 0 0多 乙醇脱水 , 石蜡包埋 , 切片机切片 , 厚 5 灿m , H E 染色 。 在光镜下观察细胞
坏死数 、 核分裂数和细胞变性数三个指标 , 观察结果用非参数统计两样本等级和检验法进
行两组差别显著性检验。
结 果
掌叶半夏总蛋白的提取和化学分析
1
. 从 1 00 9 掌叶半夏中得 1 0 9 总蛋白 , 产率为 1多。
2
. 总蛋 白中蛋 自质含量为 1石3 . 8/ 1 6 0 . 0 ~ 9 6 . 1 % (表 1) 。
表 ! 蛋白质浓度与吸光度 A 的关系
标准蛋白质溶液
浓度 (尽g / m l)
人
1 0 0
0
.
7 1 3
5 o
0
.
3 7 1 0
.
1 9 7
1 2 5
0
。
0 8 8
6 2
.
5
0
。
0 5 1
3 1
.
25
0
.
0 2生
样品液
1 5 3
.
8
0
.
1 1 7
回归方程 O伽g/ nI l) ~ 1幻 3 · g A 一 9 . 7 6 , ~ 。 . , , 9 5
3
. 含磷量的测定 : 空白管 A 6 。 ~ 0 时 , 样品管 A 660 ~ o , 样品中无磷存在 。
4
. 含糖成分的鉴定 : 在莫利西试验中水层和浓 H多O ` 层交界处有紫红色环出现 , 表
明有糖存在。
6
. 非脂蛋 白鉴定 : 染色结果样品点无蓝色出现 , 即样品不是脂蛋白。
6
. 由 P A G E 图谱及扫描曲线 (附图 )可以看出总蛋白中含有多种蛋 白质。
总蛋白对小鼠肉瘤 S魂80 的抑制作用
1
. 掌叶半夏总蛋白对小鼠肉瘤 S一18 0 具有明显的抑制作用 , 抑制塞为 58 . 3 % 〔表 幻 ,
1期 掌叶半夏总蛋白的提取化学分析和对小鼠 S s e扛犯 瘤株的抑制作用 19
附图 掌叶半夏总蛋白 P A G E 图谱及扫描曲线
表 2 掌叶半夏总蛋白对小鼠肉瘤S一旧O 的抑制作用
次数 组别 平体盆 . 士S D 才舫招 ,士 S D 抑制率 (% ) P 值
貂触0374125如爵簧墨
鑫簧羞
o1 / 8
1 0 / 8
.
9士 1 . 9
.
3士 1 . 3
0
。
7 8士 0 .
2
.如士 0 . < 0
。
0 1
。
8士 2 . 1
.
0士 2 . 9
1
.
1 0士 O 。
2
。
2 2士 1 . < O
。
02
18肚邵邢
实验组对照组
.
9士 3 . 1
. 盛士 1 . 4
0
。
6 3士 0 .
1
.
6 3士 0 ,
6 7
.
8
5 0
。
6
6 1
.
8
5 3
.
6
< O
。
01
实验组
对照组
1 0 / 10
1 0 / 1 0
.
5士 1 . 1
.
6士 1 . 2
0
.
7 1生 0 .
1
.
5 3士 0 . < 0 01
表 3 两组小鼠肉瘤 S一 旧O 切片观察结果
实验组 对照组
片号 细胞坏死二 核分裂。 . 细胞变性. 细胞坏死。 核分裂。 . 细胞变性。
+
+
+十+十
.十+:+ù,+ .:
+
+ +
十
+
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十十
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十 + +
+ + +
+ + +
+ 十
…+:+十ù:+ .
++十
125盛067。U10妞
注 : 与对照组相比 . 尸< 0 . 05 . 份尸 < O二 .1 坏死标准: 视野中细胞坏死比例喜记为 + + + ;
口
_
1
、
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、 ,
又了记刀 `
+ 书二者间为+ + . 坏死严重说明细胞生长速度快。 核分裂标准 : 倍高视野中核分裂数 > 10 个记为 + + 十 ;
记为 + ;二者间为 + + . 细二 , 性标准 ,视 , 中细 , 变性数 >香记为 十 + + ;
形态上有肿胀 、 空泡形成者都属于细胞变性 , 记十号者则只显示细胞肿胀 。 )
<毒记为 + ;仕 二者间为 + + 。
< 5个
(细
2
. 两组小鼠肉瘤切片观察结果显示 , 掌叶半夏总蛋 白对小鼠肉瘤 S一 18 0 细胞的生长
具有明显的抑制作用 (表影 。
上 海 医 科 大 学 学 报 卷
讨 论
掌叶半夏作为中草药在《本草纲 目》 中早有记载。 民间除用于治疗毒蛇咬伤及无名肿
毒外 , 也作为半夏使用 。 自 19 70 年经临床和动物实验发现其抗子宫颈癌作用后 , 这一古老
的中药又获得了新的价值 。 为了进一步寻找其有效成分 , 我们从其中分离出蛋白质成分 ,
经动物实验和对肿瘤细胞的病理切片观察 , 发现对小 鼠 S一180 具有明显的抑制作用 , 实
验结果比较稳定 , 4 次实验抑瘤率均大于 50 外。 经化学分析表明 , 此总蛋 白不是核蛋 白 ,
也不是脂蛋白。 在制备过程中经充分透析 , 因此总蛋 白中不含小分子物质 , 实验证实其中
有糖存在 , 所 以此总蛋 白中应含有糖蛋白成分 。 后经制备性 P A G E 对总蛋白的分离纯化
获得一糖蛋白单体的事实证实了这一推想 , 这方面的工作将另文发表 。在实验 中我们观察
到实验组与对照组小鼠体重并无明显差别 , 其他方面也未见明显不同 , 推想其抑瘤机理与
一般抗癌化疗药物可能不 同。 另外 , 从掌叶半夏的同属植物三叶半夏中分离出的半夏蛋
白 , 具有抗早孕 、 凝集和促进细胞分裂等作用 , 陶宗晋等曾对其进行了较深入的研究哆、
本文病理切片观察部分是在本校病理学教研室徐元鼎教授的热情指导和帮助下完成的 , 特此致谢 。
参 考 文 献
1 上海第一医学院妇产科医院、 化学教研组 : 掌叶半夏治疗子宫颈癌的研究 。 上海 医学 几, 78 上 1 3
2 李超荆等 : 掌叶半夏抗子宫颈癌成分的研究 : 1 . 月谷苗醇分离、 鉴定及疗效观察 。 上海 第一 医 学院学报 1 9 81 . 网 :
朔王
3 陶宗晋等 : 半夏蛋白的分离、 结晶、 生物活力和一些化学性质。 生物 化学与生物 物理学报 1 9 81 1 3 ( 1) ; 7
(收稿日期 : 1 9 90 年 1 2 月 1 5 日 ;修回日期 : 1 9 9 1年盛月 2 日 )
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