全 文 ：［收稿日期］ 20140422(005)
［基金项目］ 国家自然科学基金项目(81173520)
［第一作者］ 季新宇，在读硕士，从事中药(复方)有效物质基础研究，Tel:010-84738629，E-mail:jixinyu0323@ 163. com
［通讯作者］ * 刘斌，博士，教授，从事中药(复方)有效物质基础研究，Tel:010-84738629，E-mail:liubinyn67@ 163. com
四妙勇安汤当药苷、马钱苷提取率的拆方分析
季新宇，王翀，刘斌*
( 北京中医药大学中药学院，北京 100102)
［摘要］ 目的:研究四妙勇安汤不同配伍组合对当药苷、马钱苷提取率的影响。方法:将四妙勇安汤拆方后，采用 HPLC
法，SunFireTM C18色谱柱(4. 6 mm × 150 mm，5 μm)，流动相 0. 1%磷酸水-乙腈梯度洗脱，流速 1. 0 mL·min
－1，检测波长 250 nm，
柱温 35 ℃，分析当药苷、马钱苷含量并计算其提取率。结果:测定了原方及拆方后共 8 组样品中当药苷、马钱苷的含量并计算
相应提取率，当药苷、马钱苷的回归方程分别为 Y = 1 179 101. 85X － 28 583. 08 (r = 0. 999 2)和 Y = 1 353 095. 24X － 4 113. 75
(r = 0. 999 1);线性范围分别为 0. 191 2 ～ 1. 338 4，0. 026 4 ～ 0. 184 8 μg;平均加样回收率分别为 101. 19% (ＲSD 2. 83%)，
102. 59% (ＲSD 2. 30%)。结论:与单味金银花相比，其他拆方组当药苷和马钱苷提取率均有不同程度的提高，全方合煎后 2
种成分的提取率最高，进而佐证了配伍的优越性和科学性。
［关键词］ 四妙勇安汤;拆方;配伍;当药苷;马钱苷;提取率
［中图分类号］ Ｒ284． 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2014)17-0102-04
［doi］ 10． 13422 / j． cnki． syfjx． 2014170102
Decomposition Analysis on Sweroside and Loganin Extraction Ｒate Changes
in Simiao Yongan Tang
JI Xin-yu，WANG Chong，LIU Bin*
(School of Chinese Medicine，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100102，China)
［Abstract］ Objective:This study was carried out to investigate the influence of different compatibility
combinations of Simiao Yongan tang on the extraction efficiency of sweroside and loganin． Method:The extraction
rates of sweroside and loganin were determined by HPLC，using a SunFireTM C18 analytical column (4. 6 mm ×150
mm，5 μm) in prescription dismantling of Simiao Yongan tang． The mobile phase was composed of aqueous
phosphoric acid (0. 1%)and acetonitrile using a gradient elution． Analytes were performed at 35 ℃ with a flow
rate of 1. 0 mL·min －1 and a UV detection at 250 nm． Ｒesult:The sweroside and loganin in eight groups from the
original prescription and dismantlementwere detected and analyzed． The regression equations for sweroside and
loganin were Y = 1 179 101. 85X － 28 583. 08 (r = 0. 999 2)and Y = 1 353 095. 24X － 4 113. 75 (r = 0. 999 1)，
respectively． The liner ranges were 0. 191 2-1. 338 4 μg for sweroside and 0. 026 4-0. 184 8 μg for loganin． The
average recoveries of sweroside and loganin were 101. 19% (ＲSD 2. 83%)and 102. 59% (ＲSD 2. 30%) ，
respectively． Conclusion:Compared with single Lonicerae Japonicae Flos，the extraction rates of sweroside and
loganin were improved in other compatibilities of Simiao Yongan tang． The whole prescription was superior to the
other groups，which indicated that compatibility was preponderant and reasonable．
［Key words］ Simiao Yongan tang; prescription dismantlement; compatibility; sweroside; loganin;
extraction rate
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第 20 卷第 17 期
2014 年 9 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 17
Sep．，2014
中药复方是中医临床用药的主要形式。复方各
单味药之间常相互影响，或协同发挥疗效，或拮抗降
低毒副作用，其疗效多优于各单味药疗效的简单加
和［1］。四妙勇安汤源自《验方新编》卷二，由金银
花、玄参、当归和甘草组成，具有清热解毒、活血止痛
的功效，为临床治疗脱疽的有效方剂［2］，现常用于
治疗栓闭塞性脉管炎［3］、动脉粥样硬化［4］和糖尿病
足坏疽［5］等。方中君药金银花具有清热解毒、抗菌
消炎的功效，其主要有效成分绿原酸、异绿原酸等有
机酸类化合物具有清热解毒作用［6］，当药苷、马钱
苷等环烯醚萜类化合物有较强的抗炎、抗病毒、抗氧
化作用［7］。刁玉林等［8］通过对四妙勇安汤进行拆
方分析，发现甘草与金银花、玄参、当归配伍均能明
显降低甘草酸的提取率，张恩惠等已研究了四妙勇
安汤拆方后哈巴苷提取率的变化［9］，发现拆方均降
低其提取率，而全方煎煮能提高其提取率。本文继
续研究四妙勇安汤不同拆方中金银花中当药苷和马
钱苷提取率的差异，为四妙勇安汤的制备工艺优化
和进一步开发利用提供依据。
1 材料
Waters高效液相色谱仪(1525 型二元高压梯度
泵系统，2998 型 PDA 检测器，2414 型柱温控制系
统，2707 型自动进样系统，美国 Waters 公司)，
Sartorious BT 25S型 1 /10 万电子分析天平(北京赛
多利斯仪器有限公司)，KQ-500DE 型超声波清洗器
(昆山超声仪器有限公司)。当药苷(批号 111742-
200501)和马钱苷(批号 111640-200604)对照品均
购自中国食品药品检定研究院。乙腈(Merck 公司，
色谱纯)，屈臣氏重蒸水(液相用水)，其他为分析
纯。金银花(产地河南，批号 081225)、玄参(产地浙
江，批号 081218)、当归(产地甘肃，批号 090112)、
甘草(产地内蒙古，批号 090112)均购自(2009 年 5
月)河北光明饮片有限公司，经北京中医药大学刘
春生教授鉴定金银花为忍冬科植物忍冬 Lonicera
japonica Thunb．的干燥花蕾;玄参为玄参科植物玄
参 Scrophularia ningpoensis Hemsl．的干燥根;当归为
伞形科植物当归 Angelica sinensis(Oliv．)Diels．的干
燥根;甘草为豆科植物甘草 Glycyrrhiza uralensis
Fisch．的干燥成熟子根及根茎。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 SunFire TM C18色谱柱(4. 6 mm ×
150 mm，5 μm)，流速 1. 0 mL·min －1，检测波长 240
nm，柱温 35 ℃，流动相 0. 1%磷酸水溶液-乙腈梯度
洗脱(95∶ 5 ～ 90∶ 10)(50 min)。
2. 2 样品制备 按四妙勇安汤处方单味药比例
(金银花-玄参-当归-甘草 3∶ 3∶ 2∶ 1)，按表 1 所示，称
取各组饮片，分别加水 12 倍量，浸泡 1 h，回流提取
1 h，趁热过滤，药渣加水 10 倍量回流提取45 min，
合并 2 次提取液，回收溶剂至 0. 5 g·mL －1，加入
95%乙醇，调节乙醇质量分数为 70%，静置过夜，离
心，取上清液减压回收溶剂，残留物减压干燥得干
膏，称重，计算干膏得率(表 1)，备用。
表 1 不同拆方样品及干膏得率
样品 饮片配伍 干膏得率 /%
1 金银花 15 g，玄参 15 g，当归 10 g，甘草 5 g 55. 56
2 金银花 15 g，玄参 15 g，当归 10 g 42. 50
3 金银花 15 g，玄参 15 g，甘草 5 g 45. 71
4 金银花 15 g，当归 10 g，甘草 5 g 48. 33
5 金银花 15 g，玄参 15 g 26. 67
6 金银花 15 g，当归 10 g 52. 00
7 金银花 15 g，甘草 5 g 27. 50
8 金银花 15 g 12. 34
2. 3 对照品溶液制备 分别精密称取当药苷和马
钱苷对照品适量，分别加 50% 甲醇溶解，制成每
1 mL含当药苷 0. 095 6 mg、马钱苷 0. 013 2 mg 的对
照品溶液。
2. 4 供试品溶液制备 取每个样品干膏约 100 mg，
精密称定，置 5 mL 量瓶中，加 50% 甲醇超声
(100 kHz，30 min)溶解，放冷，加 50%甲醇稀释至
刻度，摇匀，用 0. 45 μm微孔滤膜滤过，备用。
2. 5 阴性样品溶液制备 按四妙勇安汤组方 4 味
药的剂量比例，称取玄参、当归和甘草适量，按照
2. 2 和 2. 4 项下方法，制备金银花阴性样品溶液。
2. 6 空白试验 采用 2. 1 项下色谱条件，分别精密
吸取当药苷和马钱苷对照品溶液、供试品溶液(1 号
样品)、金银花阴性样品溶液各 20 μL，分别进样。
在对照品溶液和供试品溶液色谱图相应位置上，有
相同保留时间的色谱峰，而阴性样品溶液色谱图相
应位置无色谱峰(图 1)。
2. 7 线性关系考察 精密吸取对照品溶液(每
1 mL含当药苷 0. 095 6 mg、马钱苷 0. 013 2 mg)各
2，4，6，8，10，12，14 μL 注入液相色谱仪，测定色谱
峰峰面积。以对照品进样量(X)为横坐标，色谱峰
峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线，得当药苷、马
钱苷回归方程分别为:Y = 1 179 101. 85X －
28 583. 08，r = 0. 999 2(n = 7);Y = 1 353 095. 24X －
4 113. 75，r = 0. 999 1(n = 7) ，表明当药苷、马钱苷进
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季新宇，等:四妙勇安汤当药苷、马钱苷提取率的拆方分析
A．对照品;B．阴性;C．供试品;1. 当药苷;2. 马钱苷
图 1 对照品、阴性样品及供试品 HPLC
样量分别在 0. 191 2 ～ 1. 338 4，0. 026 4 ～ 0. 184 8 μg
线性关系良好。
2. 8 精密度试验 称取 1 号样品 100 mg，精密称
定，按 2. 4 项下方法处理，精密吸取 20 μL，连续进
样 6 次，测定当药苷、马钱苷色谱峰峰面积，计算
ＲSD值分别为 0. 89%，2. 62%，表明精密度良好。
2. 9 重复性试验 取同一 1 号样品 6 份，每份约
100 mg，精密称定，按 2. 4 项下方法制备供试品溶
液，精密吸取 20 μL，测定色谱峰峰面积，计算含量。
计算当药苷、马钱苷的平均质量分数分别为
0. 237%(ＲSD 2. 87%)，0. 021%(ＲSD 2. 91%) ，表
明该方法重复性良好。
2. 10 稳定性考察 称取 1 号样品 100 mg，精密称
定，按 2. 4 项下制备，精密吸取 20 μL，分别于制备
后 0，2，4，6，8，10，12 h进样，测定当药苷、马钱苷色
谱峰峰面积，计算 ＲSD 分别为 0. 81%，2. 85%。表
明供试品溶液在 12 h内基本稳定。
2. 11 加样回收率试验 称取已知含量的 1 号样品
(当药苷、马钱苷的平均质量分数分别为0. 237 2%，
0. 021 32%)6 份，每份约 50 mg，精密称定，分别置
5 mL量瓶中，精密加入当药苷对照品溶液(0. 095 6
g·L －1)1. 25 mL，马钱苷对照品溶液(0. 013 2
g·L －1)0. 8 mL，按 2. 4 项下方法制得供试品溶液，
分别精密吸取 20 μL，注入液相色谱仪，测定各色谱
峰峰面积，计算当药苷、马钱苷含量和回收率。当药
苷平均回收率为 101. 19%，ＲSD 2. 83%;马钱苷平
均回收率为 102. 59%，ＲSD 2. 30%。见表 2 ～ 3。
表 2 当药苷加样回收率测定
称样量
/mg
样品中量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
ＲSD
/%
50. 63 0. 120 1 0. 241 0 101. 18
49. 62 0. 117 7 0. 242 3 104. 30
50. 40 0. 119 5 0. 240 5 101. 23
101. 19 2. 83
49. 82 0. 118 2 0. 242 8 104. 29
50. 19 0. 119 1 0. 237 5 99. 14
50. 53 0. 119 9 0. 235 8 96. 99
注:加入量均为 0. 119 5 mg。
表 3 马钱苷加样回收率测定
称样量
/mg
样品中量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
ＲSD
/%
50. 63 0. 010 79 0. 021 07 97. 35
49. 62 0. 010 58 0. 021 66 104. 96
50. 40 0. 010 75 0. 021 75 104. 17
102. 95 3. 00
49. 82 0. 010 62 0. 021 58 103. 73
50. 19 0. 010 70 0. 021 85 105. 55
50. 53 0. 010 77 0. 021 54 101. 93
注:加入量均为0. 010 56 mg。
2. 12 样品含量测定 分别取 3 批 1 ～ 8 号样品各
3 份，每份约 100 mg，精密称定，置 5 mL 量瓶中，按
2. 4 项下方法制备供试品溶液。分别精密吸取供试
品溶液 20 μL，当药苷和马钱苷对照品溶液 10 μL
注入液相色谱仪，测定色谱峰面积，按外标一点法计
算当药苷、马钱苷含量和提取率，见表 4。
表 4 不同拆方样品含量测定 %
当药苷 马钱苷
质量分数 提取率 质量分数 提取率
0. 24 102. 77 0. 021 106. 75
0. 29 86. 14 0. 016 54. 84
0. 32 87. 77 0. 029 91. 65
0. 34 85. 75 0. 013 36. 31
0. 41 56. 44 0. 019 30. 60
0. 39 87. 90 0. 022 56. 51
0. 50 47. 79 0. 021 22. 81
0. 68 23. 47 0. 033 13. 26
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第 20 卷第 17 期
2014 年 9 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 17
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3 讨论
由表 4 可知，当药苷和马钱苷提取率均在全方
中最高，单味金银花中最低，说明配伍可增大 2 种成
分的提取率。从 2 种成分提取率变化整体趋势看，
配伍药味越多，2 种成分提取率越高，说明复方各成
分间的相互作用对当药苷和马钱苷提取率均产生正
影响。但相同配伍药味组中，2 种成分提取率的提
高程度不同，随着配伍药味增多，当药苷提取率的提
高程度大于或近似于马钱苷。当归、玄参、甘草对提
高两成分提取率的贡献度不同，其顺序为当归 ＞玄
参 ＞甘草，其中当归和金银花合煎，可使当药苷和马
钱苷的提取率分别增加至 87. 90%和 56. 51%，提示
臣药当归对君药金银花的协同增效作用强于佐、使
药。玄参、甘草合用可使 2 种成分提取率有同等程
度的提高，体现了佐使药对君药的协同、调和作
用［10］。同时发现，四妙勇安汤全方合煎时，当药苷
和马钱苷的提取率超过 100%，推测可能是由于 4
味药合煎过程中，存在着不同成分间的相互转化，如
玄参或金银花中的其他环烯醚萜苷类成分转化成了
当药苷和马钱苷，致使两成分含量增加，表现为提取
率大幅提升，其确切原因尚有待进一步研究。
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［责任编辑 邹晓翠
檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
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