全 文 ：基金项目:黑龙江省教育厅科学技术研究项目(12541925)
作者简介:董巍，女，博士，研究方向:中药药效物质基础研究，E-
mail:pingguoweiweiwei@ 126． com
高效液相色谱法测定对叶百部根蜜炙后对叶百部碱的含量
董巍1，郝修洁2，王超众2，郭丽娜1，潘虹1，林宇1，李晓明1
(1．齐齐哈尔医学院药学院，黑龙江 齐齐哈尔 161006;2．齐齐哈尔市食品药品检验检测中心，
黑龙江 齐齐哈尔 161006)
摘要:目的 采用高效液相色谱法(HPLC)测定对叶百部根蜜炙前后对叶百部碱的含量。方法 采用反相高效液相色谱法
(ＲP-HPLC) ，使用迪马 Diamonsil C18(250 mm ×4． 6 mm，5 μm)色谱柱，以乙腈-0． 2%氨水流动相，流速 1． 0 mL·min
－1，柱温
35 ℃，检测波长 254 nm，进样量 20 μL。结果 对叶百部碱线性范围为 31． 25 ～ 500． 0 mg·L －1，r = 0． 999 5，平均加样回收率
(n = 9)为 99． 88%，ＲSD为 0． 26%。不同产地对叶百部根中对叶百部碱含量差异较大，其中河北对叶百部根中对叶百部碱含
量较高为 1514． 80 μg·g －1，广西产对叶百部碱含量较低为 197． 40 μg·g －1。蜜炙后河北、广西产对叶百部根中对叶百部碱含
量分别为 919． 60、129． 76 μg·g －1。结论 该文建立的含量测定方法符合要求。对叶百部根经蜜炙后对叶百部碱的含量下
降，表明蜜炙对叶百部根中生物碱类成分的含量产生了一定影响。
关键词:百部 /化学;蜜炙;色谱法，高压液相
doi:10． 3969 / j． issn． 1009 － 6469． 2016． 08． 017
Changes of tuberostemonine in root of Stemona tuberosa
before and after stir-frying with honey by HPLC
DONG Wei1，HAO Xiujie2，WANG Chaozhong2，et al
(1． College of Pharmacy，Qiqihar Medical University，Qiqihar，Heilongjiang 161006，China;
2． Qiqihaer Institute for Food and Drug Control，Qiqihar，Heilongjiang 161006，China)
Abstract:Objective To establish an HPLC method for the determination of tuberostemonine in root of Stemona tuberosa Lour． during
stir-frying with honey．Methods HPLC and Diamonsil-C18 column (250 mm ×4． 6 mm，5 μm)were adopted，with acetonitrile-0． 2%
ammonia as the mobile phase at the flow rate of 1． 0 mL·min －1 ． The column temperature was set at 35 ℃，and the UV detection wave-
length was 254 nm． Sample quantity was 20 μL． Ｒesults Tuberostemonine showed a good linear relationship within the range of 31． 25
～ 500． 0 mg·L －1(r = 0． 999 5) ，with the average recovery of 99． 88% (n = 9) ，ＲSD being 0． 26% ． Tuberostemonine contents of Ste-
mona tuberosa Lour． in different areas had great difference． The content of Stemona tuberosa Lour． purchased from Hebei was the high-
est，1514． 80 μg·g －1，and the lowest was purchased from Guangxi，197． 40 μg·g －1 ． After stir-frying with honey，the content of tu-
berostemonine were decreased to 919． 60，129． 76 μg·g －1，respectively． Conclusions The method was simple and reliable，which met
the requirements． The content of tuberostemonine is decreased by stir-frying with honey，indicating that honey-processed approach had
an effect on the content of alkaloids in Stemona tuberosa Lour．
Key words:Stemona japonica /chemistry;Honey processing;Chromatography，high pressure liquid
百部为百部科植物直立百部 Stemona sessilifolia
(Miq．)Miq．、蔓生百部 Stemona japonica (BL．)
Miq．、对叶百部 Stemona tuberosa Lour．的干燥根 ［1］，
具有止咳、杀虫的功效。目前百部炮制工艺以蜜炙为
主［2］，百部生品有小毒，对胃的刺激性通过蜂蜜炮制
后可缓解，其蜜炙品常用于治疗久咳。现代研究表明
蜜炙百部止咳效果优于生品［3］，但是蜜炙后该作用增
强的物质基础尚不明确，相关研究已报道百部中生物
碱类成分的含量测定方法，但百部通过蜂蜜炮制前后
发挥镇咳作用主要成分的含量差异尚未见报道［4 － 7］。
百部的不同品种中以对叶百部镇咳效果最
好［8］，因此本研究以对叶百部为研究对象。百部属
生物碱主要发挥镇咳、止咳作用［9 － 10］，其中对叶百
部碱是具有代表性的活性成分［11］，本研究采用
HPLC方法建立对叶百部根中对叶百部碱的含量测
定方法，通过该方法比较蜜炙前后对叶百部根中对
叶百部碱的含量差异，分析蜜炙对百部生物碱类成
分含量的影响，为生、炙对叶百部饮片的质量评价
·3841·安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2016 Aug，20(8)
及对叶百部临床应用提供实验依据。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 Waters 2695 型高效液相色谱仪，Wa-
ters 2996 DAD 检测器(美国Waters公司)。Empow-
er 工作站(美国 Waters 公司) ;FA2004N 电子天平
(上海精密科学仪器有限公司) ;AL 204 电子天平
(梅特勒-托利多仪器有限公司) ;KQ-500 DB 超声
波清洗机(昆山禾创超声仪器有限公司) ;WTL-10K
离心机(湖南湘仪有限公司) ;微量取样器(法国吉
尔森 10 ～ 100 μL，100 ～ 1000 μL)。
1． 2 试药 对叶百部药材购自广西省药材玉林中
药港，河北省安国市昌达中药材饮片有限公司，由
齐齐哈尔医学院郭丽娜教授鉴定为百部科植物对
叶百部 Stemona tuberosa Lour． 的干燥根;对叶百部
碱对照品(购自成都维克科技有限公司，含量 98%，
批号:6879-1-2) ;甲醇、乙腈(色谱纯，美国 Merck 公
司) ;氨水(天津市凯通化学试剂有限公司) ;乙醇
(分析纯，天津市福晨化学试剂厂) ;纯净水(杭州娃
哈哈集团有限公司) ;杨槐蜂蜜(北京百花蜂业科技
发展股份公司)。
2 方法与结果
2． 1 对照品溶液的制备 取对叶百部碱对照品适
量，精密称定，加甲醇配制成每 1 mL 含 1． 0 mg的对
照品储备液，冷藏备用。
2． 2 蜜炙对叶百部的制备 取炼蜜 25 g，加入适量沸
水稀释后，与对叶百部药材 200 g 拌匀，闷透后用文火
炒至对叶百部药材表面棕黄色时，取出，放凉备用［12］。
2． 3 供试品溶液的配制 称取对叶百部生品及蜜
炙品粉碎成粉末，取药材粉末(过 3 号筛)各 10 g，
精密称定，置于圆底烧瓶中，精密加入 75%乙醇 100
mL，称定重量，回流提取 2h，放冷，再称定重量，用
75%乙醇补足失重，摇匀。重复回流提取一次，合
并两次滤液。取滤液于 10 000 r·min －1离心 10
min，滤液过 0． 22 μm微孔滤膜，即得。
2． 4 色谱条件 色谱柱为迪马 Diamonsil-C18(250
mm ×4． 6 mm，5 μm) ;流动相为乙腈-0． 2%氨水溶
液，梯度洗脱:0 ～ 5 min，45% ～ 50% 乙腈;5 ～ 20
min，50% ～ 50% 乙腈;20 ～ 30 min，50% ～ 65%乙
腈;流速 1． 0 mL·min －1;柱温 35 ℃;检测波长 254
nm;进样量 20 μL。理论板数按对叶百部碱色谱峰
计算高于 5 000。对叶百部碱色谱峰与其他峰达到
基线分离，峰形对称，色谱峰见图 1。
2． 5 线性关系的考察 取对照品溶液，依次用甲
醇稀释成 0． 5、0． 25、0． 125、0． 062 5、0． 031 25 g·
L －1的标准品溶液，精密吸取 20 μL进样。记录色
A．对照品
B．河北生品
C．河北蜜炙品
D．广西生品
E．广西蜜炙品
图1 对照品和对叶百部样品的HPLC色谱图(1．对叶百部碱)
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谱图，测定峰面积，以对叶百部碱的峰面积对浓度
(mg·L －1)进行线性回归，得对叶百部碱的回归方
程为 Y = 5． 63 × 106X + 1． 54 × 105(r = 0． 9995)。结
果表明对叶百部碱在 31． 25 ～ 500． 0 mg·L －1范围
内线性关系良好。
2． 6 精密度试验 精密吸取 0． 125 g·L －1对照品
溶液 20 μL，按照“2． 4”项下色谱条件重复进样 6
次，记录峰面积，对叶百部碱峰面积的 ＲSD 为
0． 65%。结果表明该方法精密度良好。
2． 7 重复性试验 精密称取对叶百部生品 10 g，共
6 份，按“2． 3”项下方法制备供试品溶液，按“2． 4”
项下色谱条件进行测定，对叶百部碱含量的 ＲSD为
1． 08%。结果表明该方法重复性良好。
2． 8 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液 20
μL，分别于 0、2、4、8、12、24 h 进样测定，考察其稳
定性，结果峰面积的 ＲSD 为 0． 78%，表明供试品溶
液在 24 h内稳定。
2． 9 加样回收率试验 精密称取已测定的广西产
对叶百部生品 5． 0 g，共 9 份，平均分为 3 组，每组分
别精密加入低、中、高 3 个浓度的对叶百部碱对照
品，按“2． 3”项下方法制备样品，按“2． 4”项下色谱
条件进行测定，按外标法计算含量，结果见表 1。
表 1 加样回收率试验结果(n = 9)
加样
比例
样品含量
/mg
加入量
/mg
测得值
/mg
回收率
/%
平均回收率
/%
ＲSD
/%
0． 8 0． 987 0． 750 1． 739 100． 20
0． 985 0． 750 1． 731 99． 59
0． 985 0． 750 1． 733 99． 80
1． 0 0． 986 0． 975 1． 964 100． 30
0． 985 0． 975 1． 961 100． 10
0． 989 0． 975 1． 962 99． 80
1． 2 0． 985 1． 150 2． 133 99． 80
0． 987 1． 150 2． 133 99． 59
0． 987 1． 150 2． 134 99． 70
99． 88 0． 26
2． 10 样品含量测定 精密称取不同产地对叶百
部生品及蜜炙品 10． 0 g，平行 3 份，按“2． 3”项下方
法制备供试品溶液，采用外标法计算含量，取 3 份
平均值，结果见表 2。
表 2 对叶百部中对叶百部碱含量测定结果(n = 3)
编号 样品 含量 /μg·g － 1
1 广西生品 197． 40
2 河北生品 1514． 80
3 广西蜜炙品 129． 76
4 河北蜜炙品 919． 60
3 讨论
3． 1 药材产地的选取 本研究所用药材购自广西
省及河北省，一方面是由于广西省是对叶百部药
材的主产区;另一方面，课题组曾选取对叶百部在
全国的主要产区，如河北、安徽、广西等，以最低抑
菌浓度为指标，进行体外抗肺炎支原体细胞实验，
结果表明，河北产对叶百部抗肺炎支原体活性较
强。因此，本研究选取广西省及河北省产对叶
百部。
3． 2 提取条件的确定 分别对对叶百部样品采取
超声、加热回流方法进行提取，提取溶剂考察了
100%乙醇、75%乙醇水溶液、100%甲醇、75%甲醇
水溶液，提取用量分别考察了 20、50、100 mL 和提
取时间 30、60、100 min 等因素。结果显示，用 75%
乙醇水溶液加热回流提取，方法简便且峰形较好。
3． 3 流动相的确定 由于测定主要成分呈碱性，
在甲醇-水或乙腈-水系统系统中色谱峰峰形较差，
考察向洗脱系统中加入不同浓度氨水，最终发现以
乙腈-0． 2% 氨水溶液作为流动相峰形最佳，分离
较好。
3． 4 检测波长的确定 对对叶百部样品进行全波
长扫描(波长 190 ～ 400 nm) ，发现在 254 nm处时对
叶百部碱吸收较好，可用于含量测定，因此选择 254
nm作为本研究含量测定最终检测波长。
4 结论
本研究通过对广西、河北两个产地对叶百部饮
片中对叶百部碱成分的含量测定，发现对叶百部碱
的含量存在差异，河北产的含量较高。经过蜜炙炮
制后，广西产对叶百部中对叶百部碱含量为 129． 76
μg·g －1，较蜜炙前下降;河北产对叶百部蜜炙后对
叶百部碱含量为 919． 60 μg·g －1，较蜜炙前下降，
可见两个产地的对叶百部生品经蜜炙后对叶百部
碱含量均降低。传统认为，百部生品有小毒，经蜜
炙后可降低刺激性，本研究表明，对叶百部经蜜炙
炮制后，发挥镇咳活性的主要生物碱类成分含量降
低，蜂蜜是否发挥协同增效作用从而保证蜜炙品镇
咳活性，还需进一步药效实验证明。
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高效液相色谱法测定小儿氨酚黄那敏颗粒中
马来酸氯苯那敏含量及均匀度
曹玉明
(安徽新和成皖南药业有限公司，安徽 宣城 242000)
摘要:目的 建立小儿氨酚黄那敏颗粒中马来酸氯苯那敏含量及均匀度的检测方法。方法 采用高效液相色谱法对小儿氨
酚黄那敏颗粒中的马来酸氯苯那敏含量及均匀度进行测定。以 shimpack VP-ODS(150 mm ×4． 6 mm，5 μm)色谱柱为固定相;
甲醇-0． 01 mol·L －1辛烷磺酸钠溶液(三乙胺调节 pH值至 3． 0，63∶37)为流动相;流速为 1 mL·min －1;检测波长为 261 nm;进
样量为 10 μL。结果 马来酸氯苯那敏在 7． 928 ～ 31． 712 mg·L －1的范围与峰面积呈良好线性关系，r = 0． 999 92。样品中马
来酸氯苯那敏的平均回收率为 99． 8%(n = 9，ＲSD = 0． 83%)。用该文建立的方法对 5 个批次小儿氨酚黄那敏颗粒中的马来
酸氯苯那敏含量及均匀度进行了测定，其含量均为标示量的 90． 0% ～ 110． 0%，均匀度符合规定。结论 该方法准确可靠，可
作为小儿氨酚黄那敏颗粒中马来酸氯苯那敏含量及均匀度的测定方法。
关键词:氯苯那敏 /化学;醋氨酚;色谱法，高压液相
doi:10． 3969 / j． issn． 1009 － 6469． 2016． 08． 018
Determination of the content and uniformity of dosage units in
Pediatric Paracetamol，Artificial Cow-bezoar and
Chlorphenamine Maleate Granules by HPLC
CAO Yuming
(Anhui NHU Pharmaceutical Co．，Ltd，Xuancheng，Anhui 242000，China)
Abstract:Objective To develop a method for the chlorphenamine maleate detection in Pediatric Paracetamol，Artificial Cow-bezoar
and Chlorphenamine Maleate Granules．Methods HPLC was adopted for the quantitative and uniformity determination of chlorphena-
mine maleate． A shimpack VP-ODS column(150 mm × 4． 6 mm，5 μm)was used as the stationary phase，with a mobile phase consis-
ting of methanol and 0． 01 mol·L －1 sodium octane sulfonate solution (adjusted to pH3． 0 with triethylamine，63∶37)． The flow rate was
1 mL·min －1，the detection wavelength was 261nm and the injection volume was 10 μL． Ｒesults Considerable linear relationship was
observed when chlorphenamine maleate ranged from 7． 928 to 31． 712 mg·L －1(r = 0． 999 92)． The average recovery of chlorphena-
mine maleate was 99． 8%(n = 9，ＲSD = 0． 83%)． Five batches of Pediatric Paracetamol，Artificial Cow-bezoar and Chlorphenamine
Maleate Granules were analyzed under the established method with results ranging from 90． 0% to 110． 0% ． Conclusions The devel-
oped method is accurate and reliable，which could be used for the quality control of chlorphenamine maleate in Pediatric Paracetamol，
Artificial Cow-bezoar and Chlorphenamine Maleate Granules．
Key words:Chlorpheniramine /chemistry;Acetaminophen;Chromatography，high pessure liquid
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(收稿日期:2016-05-01，修回日期:2016-06-10)
·6841· 安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2016 Aug，20(8)