全 文 ：收稿日期:2008-03-12
作者简介:王玉亮(1978-), 男 , 山西人 , 硕士学位 , 助理研
究员 ,主要从事天然产物的活性成分研究。
E-mail:wangyuliangxj@126.com
＊通讯作者:张磊 , E-mail:starzhanglei@gmail.com
水龙骨中总黄酮的含量分析
王玉亮1 ,高 贺 3 ,王慕华 1 ,冯小路1 ,张 磊 2＊
(1.上海交通大学 农业与生物学院 ,上海 200030;2.第二军医大学 药学院生药教研室 , 上海 200433;
3.吉林农业大学 中药材学院 , 吉林 长春 130118)
摘 要 目的:对水龙骨中总黄酮含量进行测定 , 为水龙骨质量评价提供依据。方法:芦丁 -UV方法进行测定。
结果:总黄酮在 0.001 68 ～ 0.067 2 mg/mL范围有良好的线性关系(r=0.999 1), 加样回收率为 98.23%, RSD=
3.52%。结论:该法样品处理简单 、迅速 ,可以做为水龙骨中总黄酮的含量测定方法。
关键词 水龙骨;总黄酮;紫外分光光度法
中图分类号:R931.71 文献标识码:A 文章编号:1006-9690(2009)01-0062-02
DeterminationofTotalFlavonoidsinPolypodiodesniponica
WangYuliang1 , GaoHe1 , WangMuhua1 , FengXiaolu1 , ZhangLei2
(1.SchoolofAgriculturalandBiology, ShanghaiJiaotongUniversity, Shanghai200030, China;2.De-
partmentofPharmacognosy, SchoolofPharmacy, SecondMilitaryMedicalUniversity, Shanghai200433,
China;3.SchoolofChinesemateriamedica, Jilinagricultureuniversity, Changchun130118, China)
Abstract Objective TodeterminethequantityoftotalflavonoidsinPolypodiodesniponica, andto
provideexperimentalevidentforitsqualitycontrol.Methods UVmethodwasusedfortheidentification
anddeterminationoftotalflavonoids.Results Thestandardcurvesoftotalflavonoidswerelinearinthe
rangeof0.001 68 ～ 0.067 2 mg/ml, r=0.9991.Theaveragerecoverieswas98.23%, RSD=3.52%.
Conclusion Withitssensitivity, reproducibilityaswelasthesimplicityofsamplepreparation, this
methodisfeasiblefordeterminationoftotalflavonoidsinPolypodiodesniponica.
Keywords Polypodiodesniponica;totalflavonoids;UVmethod
水龙骨为水龙骨科植物水龙骨 Polypodiodes
niponica(Met.)Ching的干燥根茎 ,性味苦 、凉 ,功
用清热利湿 、活血通络 。水龙骨始载于 《本草纲目
拾遗》,称为草石蚕 , 《植物名实图考 》名水龙骨 [ 1] ,
《全国中草药汇编 》名石蚕 、石豇豆等 ,具有较长的
用药历史[ 1] 。近年来 ,在浙江地区将水龙骨用于乙
型肝炎的医疗 ,具有较好的疗效。我们研究表明其
含有较多的黄酮类成分。本文首次采用芦丁比色法
对其所含黄酮类成分进行定量分析 ,以期为其深入
开发利用提供依据 。
1 仪器 、试剂 、材料
1.1 仪器
UV-2100型双光束紫外可见分光光度计(北
京北分瑞利分析仪器有限公司)
1.2 试剂试药
芦丁对照品:上海融禾医药科技有限公司 ,批
号:070426
NaNO2 、Al(NO3)3 、NaOH、乙醇等试剂均为 AR
级 ,国药集团上海试剂有限公司产品
1.3 实验材料
2005年 10月 2007年 9月采集于各产地 ,并经第
二军医大学药学院生药学教研室张汉明教授鉴定。
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第 28卷第 1期
2009年 2月 中 国 野 生 植 物 资 源ChineseWildPlantResources Vol.28 No.1Feb.2009
2 方法与结果
2.1 对照品液的制备
精密称取芦丁对照品 2.80 mg,置于 25 mL容
量瓶中 , 70%乙醇溶解 ]定容 ,浓度为 0.112mg/mL。
2.2 标准曲线
精确吸取上述对照品液 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0
mL,分别置 10mL容量瓶中 ,分别加水至 5mL,各加
5% NaNO2溶液 0.4 mL,摇匀放置 6 min。加 10%
硝酸铝溶液 0.4mL,摇匀放置 6min。再加入 4.3%
NaOH溶液 4 mL,摇匀 , 并加水至刻度 。放置 15
min,置比色皿中 ,在 500 nm波长处测定吸光度 , 以
吸光度(A)为纵坐标 ,浓度(C)为横坐标 ,绘制标准
曲线。回归方程:A=7.891 0C-0.009, r=0.999 4,
线性范围 0.011 ～ 0.056mg/mL。
2.3 样品液制备
2.3.1 提取方法的考察 分别精密称取同批样品
3份 ,各 500 mg,精密加入甲醇 15 mL,准确称重 ,分
别以热回流(80℃, 30 min)、超声(功率 600W,频率
60 kHz, 30 min)、振摇(每 5 min振摇 1次 , 30 min)
方法提取 ,放冷 ,以甲醇补足重量 ,摇匀 ,微孔滤膜过
滤 ,取续滤液 1 mL,以甲醇稀释至 10 mL,按 2.2节
法测定超声法吸光度值最高 ,表明超声方法提取完
全 ,且操作简便 ,故选用超声方法作为提取方法 。
2.3.2 提取时间的选择 取同批样品 3份 ,每份
100mg,精密称定 ,精密加入甲醇 3 mL,密封 ,超声
处理(功率 600 W,频率 60 kHz)10、 30、60 min,取
出 ,放冷 ,加甲醇补足重量 ,摇匀 , 0.45μm微孔滤膜
滤过 ,取续滤液 ,按 2.2法测定 ,吸光度值分别为
0.130、0.176和 0.180 ,超声 30 min与 60 min提取
结果接近 ,为缩短实验时间 ,故选择提取 30 min。
2.4 精密度试验
精密吸取同批稀释后样品液 1.00mL,共 6份 ,
分别置于 10mL容量瓶中 ,按 2.2法测定 ,结果见表
3。结果表明方法精密度良好。
2.5 加样回收率试验
精密同批样品 6份 , 100 mg/份 ,准确加入标准
品 ,按选定的方法制备样品 ,进行测定 ,计算回收率 ,
结果见表 4。结果表明方法加样回收率良好 。
表 1 精密度试验
No. A 平均吸光度 RSD/%
1 0.190 0.176 1.16
2 0.185
3 0.162
4 0.183
5 0.171
6 0.165
表 2 加样回收率试验
No. 样品量折算含量 /mg
加样量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
1 6.29 6.20 12.61 101.94
2 6.30 6.20 12.30 96.77
3 6.40 6.20 12.20 93.55
4 6.30 6.20 12.50 100.00
5 6.29 6.20 12.60 101.77
6 6.29 6.20 12.20 95.32
98.23 3.52
2.6 稳定性试验
精密吸取同批稀释后样品液 1.00 mL,置 10 mL
容量瓶中 ,按 2.2节方法 ,利用仪器提供的时间扫描
功能 ,分别在 0、15、30、45 min测定吸光度 ,结果见
表 5,表明样品在 45 min内稳定 。
表 3 稳定性试验
时间 /min 0 15 30 45 平均值 RSD/%
A 0.175 0.178 0.172 0.165 0.173 3.23
2.7 样品含量测定
将收集的衢州 、磐安 、舟山 、富阳 、建德和开化 6
地的样品按 2.3节方法制备 ,分别精密吸取各样品
液 1.00 mL,分别置 10mL容量瓶中 ,按 2.2节方法
测定 ,测得结果分别为 6.29、6.05、5.14、5.02、6.54
和 5.95%,以建德地区的含量最高。
3 讨 论
水龙骨是浙江 、江西地区常用中草药 [ 2-3] ,具有
较好的抗乙型肝炎的效果。本文实验结果表明不同
来源的水龙骨药材黄酮类成分含量均较高 ,具有较
好的开发潜力 。目前 ,国外对水龙骨研究较多 ,涉及
多方面的药理活性 ,并且已申请了多个专利 [ 4] 。国
内对其的研究还很不深入。因此应 (下转第 66页)
—63—
第 1期 王玉亮 ,等:水龙骨中总黄酮的含量分析
4), 115.2 (C-5), 128.3(C-6), 56.0 (7 -
OCH3)。以上光谱数据与文献 [ 4] 报道的 5, 4-二
羟基 -7-甲氧基二氢黄酮基本一致 。
化合物 IV:黄色粉末 , m.p.>300℃,盐酸 -镁
粉反应呈阳性 。1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6)
(H:13.10 (1H, s, 5-OH), 9.82 (1H, s, 3 -
OH), 9.45 (1H, s, 4 -OH), 7.70 (1H, d, J=
2.4Hz, H-2), 7.52(1H, dd, J=8.4, 2.4Hz, H
-6), 6.80 (1H, d, J=8.4 Hz, H-5), 6.72
(1H, s, H-3), 6.55(1H, d, J=2.2Hz, H-8),
6.28(1H, d, J=2.2Hz, H-6), 3.86(3H, s, 7-
OCH3)。 13C-NMR(100 MHz, DMSO-d6)(C:
165.0 (C-2), 103.2 (C-3), 182.9 (C-4),
161.9 (C-5), 98.6(C-6), 166.3(C-7), 93.4
(C-8), 158.1(C-9), 105.2(C-10), 122.0(C
-1), 114.2(C-2), 147.1 (C-3), 150.12 (C
-4), 117.0(C-5), 120.1 (C-6), 56.4 (7-
OCH3)。以上光谱数据与文献 [ 5]报道的 5, 3, 4-
三羟基 -7-甲氧基黄酮基本一致。
化合物 V:白色粉末 , m.p.289-290℃,难溶于
石油醚 、氯仿和乙酸乙酯等大多数有机溶剂 ,可溶于
吡啶 , Liebermann-Burchard和 Molish反应阳性 ,说
明该化合物为含糖化合物 。将化合物 V与胡萝卜
苷标准品进行共薄层分析 ,发现化合物 V与胡萝卜
苷标准品的 Rf值和显色特点一致 。将化合物 V与
胡萝卜苷标准品混合后测定熔点不下降。综上所
示 ,化合物 V为胡萝卜苷(daucostero1, V)。
3 讨 论
本研究表明 ,鄱阳湖野生藜蒿乙醇提取物的较
低极性部位中含有种类较多的黄酮类成分 ,这些黄
酮类成分结构极为相似 ,需要借助多种分离填料和
分离方法才可以得到较好的分离 。已有研究结果表
明 ,黄酮类化合物抗氧化作用等生理活性 [ 6] 。因
此 ,本研究结果为鄱阳湖野生藜蒿的深层次开发 ,即
以其为原料开发功能性食品提供了更多的理论依据
和参考资料。后续研究中 ,我们将对鄱阳湖野生藜
蒿乙醇提取物的高极性部位进行系统的分离和纯
化 ,分离得到更多的单体化合物 ,阐明其化学组成 ,
为鄱阳湖野生藜蒿的深层次研究开发和利用提供更
全面的资料。
参考文献:
[ 1] 江纪武.拉汉药用植物名称和检索手册 [ M].北京:中国医药
科技出版社 , 1988:135.
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3, 8-biflavanoidsfromGarciniaspeciesandofrelatedflavanones
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[ 4] WangerH, ChariVM.13C-NMRspectrumofnaturalflavonoide
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[ 5] AgrawalPK.Carbon-13NMRofflavonoids[ M] .Amsterdam,
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[ 6] 杨安树 ,邓丹雯 ,郑功源.藜蒿中黄酮类物质抗氧化作用的研
究 [ J] .食品科学 , 2003, 24(7):67-70.
(上接第 63页)
逐步加强对其生药学 、化学 、药理学的研究 ,推进其
开发的深度和广度。
参考文献:
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Polypodiodesniponica[ J] .TetrahedronLeters, 1989, 30(51):
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中 国 野 生 植 物 资 源 第 28卷