全 文 ：［收稿日期］ 20121119(607)
［基金项目］ 国家自然科学基金项目(81060372) ;教育部科学
技术研究重点项目(211033) ;内蒙古自治区高等
学校科学技术研究项目(NJZY 11189) ;“十二
五”科技部项目支撑计划(2012BAI28B002)
［第一作者］ 王振旺，硕士，讲师，从事蒙药化学成分分离与鉴
定研究，Tel:0472-7166712，E-mail:wzwwangwang
@ yahoo． com． cn
［通讯作者］ * 张春红，博士，副教授，从事中蒙药活性成分研
究，Tel:0472-7167795，E-mail:zchlhh@ 126. com
HPLC测定肋柱花中獐牙菜苦苷和当药黄素的含量
王振旺，龙平，张春红* ，邬国栋，张娜，李旻辉
( 包头医学院，内蒙古 包头 014060)
［摘要］ 目的:建立高效液相色谱法测定肋柱花中獐牙菜苦苷和当药黄素含量的方法。方法:采用高效液相色谱法测定
肋柱花中獐牙菜苦苷和当药黄素的含量。色谱柱为 Phenomenex C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流动相为水(A)和甲醇(B)梯
度洗脱，流速 1. 5 mL·min －1，柱温 25 ℃，检测波长 237 nm。结果:獐牙菜苦苷对照品在 0. 27 ～ 5. 40 mg与峰面积呈现良好的线
性关系(r = 0. 999 8) ，加样回收率为 98. 49%、ＲSD 1. 06%(n = 9) ;当药黄素对照品在 0. 165 ～ 3. 3 mg 与峰面积呈现良好的线
性关系(r = 0. 999 6) ，加样回收率为 97. 35%、ＲSD 1. 45%(n = 9)。结论:该方法简单、快捷、准确、重复性好，可用于肋柱花中
獐牙菜苦苷和当药黄素的含量测定。
［关键词］ 高效液相色谱;肋柱花;獐牙菜苦苷;当药黄素
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)10-0106-03
［doi］ 10． 11653 /syfj2013100106
Determination of Swertiamain and Swertisin
in Herba Lomalogonium rotatum by HPLC
WANG Zhen-wang，LONG Ping，ZHANG Chun-hong* ，WU Guo-dong，ZHANG Na，LI Min-hui
(Baotou Medical College，Baotou 014060，China)
［Abstract］ Objective:To establish an HPLC method for the simultaneous determination of swertiamain
and swertisin in herba Lomalogonium rotatum． Method:Swertiamain and swertisin were simultaneously analyzed
using HPLC accompanied with Phenomenex C18 (4. 6 mm ×250 mm，5 μm)column and UV detector． Methanol-
water was chosen as the mobile phase with gradient elution． The wavelength was set at 237 nm，while the flow rate
was set at 1. 5 mL·min －1 ． Ｒesult:Swertiamain and swertisin were linear within the range of 0. 27-5. 40 mg (r =
0. 999 8) ，0. 165-3. 3 mg (r = 0. 999 6) ，respectively． Meanwhile，the average recoveries were 98. 49% (ＲSD
1. 06%)and 97. 35% (ＲSD 1. 45%) ，respectively． Conclusion:The method is simple，rapid，accurate and
possesses good reproducibility． It can be used for the quality control of Lomalogonium rotatum．
［Key words］ HPLC;Lomalogonium rotatum;swertiamain;swertisin
肋柱花分布在我国内蒙、西藏、云南、四川、青
海、甘肃、新疆等地［1］，是蒙医常用药材，收载于《中
国卫生部药品标准·蒙药分册》(1998 年版) ，蒙药名
为特木尔-地格达，具有平息“协日”，清热，健胃，愈
伤功能，临床用于“协日”热，瘟疫，流感，伤寒，中暑
头痛，肝胆热，黄疸，胃协日，伤热等症［2-3］。肋柱花
主要含有黄酮类、三萜类、环烯醚萜及裂环烯醚萜等
化合物。其中獐牙菜苦苷和当药黄素等成分具有不
同程度的利胆、保肝生物活性，为肋柱花的主要活性
成分之一［4-5］。经文献调研［6-10］，目前尚未有同时测
定肋柱花中獐牙菜苦苷和当药黄素的方法，因此本
·601·
第 19 卷第 10 期
2013 年 5 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 10
May，2013
文研究建立了高效液相色谱法测定肋柱花中的獐牙
菜苦苷和当药黄素，为进一步完善和提高肋柱花的
药品质量，有效地定量控制和保证药品质量提供
参考。
1 材料
岛津 LC-20AT 高效液相色谱仪，配置 LC-
20ATvp 输液泵、SPD-M20Avp 检测器、SCL-20ATvp
色谱工作站(日本岛津) ，FA1004 型电子分析天平
(上海恒平科学仪器有限公司)。
獐牙菜苦苷对照品(中国药品生物制品检定
所，批号 0785-200203) ，当药黄素对照品(上海融
禾医药科技发展公司，批号 080710) ，甲醇为色谱
甲醇(天津市西华特种试剂厂) ，其余试剂均为分
析纯。
肋柱花采自内蒙古锡林郭勒盟东乌旗，经内蒙
古科技大学包头医学院李旻辉教授鉴定为龙胆科植
物肋柱花 Lomatogoium rotatum (L．)Fries ex Nym的
干燥全草［11-13］。
2 方法和结果
2. 1 色谱条件 Phenomenex OOG-4252-EO 色谱柱
(4. 6 mm ×250 mm，5μm) ，流动相水(A)-甲醇(B) ，
梯度洗脱(0 ～ 15 min，20% ～ 50% B;15 ～ 35 min，
50% ～ 100% B;36 ～ 60 min，100% B) ，流 速
1. 5 mL·min －1，柱温 25 ℃，检测波长 237 nm。以上
色谱条件时，肋柱花中獐牙菜苦苷与当药黄素分离
度良好，见图 1。
A. 对照品;B. 样品;1. 獐牙菜苦苷;2. 异荭草素
图 1 肋柱花的高效液相色谱
2. 2 对照品储备液的制备 精密称取獐牙菜苦苷
5. 4 mg、当药黄素 3. 3 mg，置 10 mL 量瓶中，加甲醇
溶解并稀释至刻度，摇匀，过 0. 45 μm 微孔滤膜，备
用(每 1 mL中含獐牙菜苦苷 0. 54 mg、含当药黄素
0. 33 mg)。
2. 3 供试品溶液的制备 取肋柱花药材粉末约
0. 2 g，精密称定，置 50 mL锥形瓶中，精密加入甲醇
溶液 25 mL，密塞，称定质量，超声提取 30 min，放
冷，再称定质量，用甲醇溶液补足减失的质量，摇匀，
过滤，取续滤液，过微孔滤膜，备用。
2. 4 线性关系及工作范围的考察 精密吸取对照
品储备液 0. 5，1. 0，2，4，6，8，10 μL，注入液相色谱
仪，记录色谱图，测定其峰面积(A)。并以峰面积
(Y)对獐牙菜苦苷和当药黄素的进样量(X)进行线
性回归，得回归方程:
獐牙菜苦苷的线性方程 Y = 1 095 589 X －
79 947(r = 0. 999 8)。
当药黄素的线性方程 Y = 1 577 466X － 80 927
(r = 0. 999 6)。
结果表明，獐牙菜苦苷对照品进样量在
0. 27 ～ 5. 40 μg与峰面积呈良好的线性关系;当药黄
素对照品进样量在 0. 165 ～ 3. 3 μg，与峰面积呈良
好的线性关系。
2. 5 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液 10
μL，在上述色谱条件下依法重复进样 5 次，记录色
谱图，测定其峰面积，结果獐牙菜苦苷的 ＲSD
1. 89%，当药黄素的 ＲSD 1. 87%，表明仪器精密度
良好。
2. 6 稳定性试验 同一份供试品溶液，分别于 0，
3，6，9，12，24 h，精密吸取 10 μL，注入液相色谱仪，
记录色谱图，测定其峰面积，结果獐牙菜苦苷的
ＲSD 1. 19%，当药黄素的 ＲSD 1. 28%，表明供试品
溶液在 24 h内测定稳定性良好。
2. 7 重复性试验 称取同一批样品约 0. 2 mg，共 5
份，精密称定，照上述 2. 3 项下方法制备溶液 5 份，
按含量测定方法，分别精密吸取 10 μL，注入液相色
谱仪，记录色谱图，测定其峰面积，并计算含量。结
果獐牙菜苦苷的平均含量为 3. 59%，ＲSD 1. 90%，
当药黄素的平均含量为 0. 41%，ＲSD 2. 10%。表明
该含量测定方法具有良好的重复性。
2. 8 回收率试验 取已知含量的肋柱花粉末，精密
称定 0. 2 g，分别加入一定量的獐牙菜苦苷对照品和
当药黄素对照品，照上述 2. 3 项下方法制得供试品
溶液，在规定色谱条件下，按含量测定方法进行测
定，并按下列公式计算回收率，结果见表 1，2。
2. 9 样品的测定 按 2. 3 项下方法制备供试品溶
液，精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10 μL，进
样，照上述色谱条件分离、测定，以外标法计算样品
含量，结果见表 3。
·701·
王振旺，等:HPLC测定肋柱花中獐牙菜苦苷和当药黄素的含量
表 1 獐牙菜苦苷的回收率
No．
取样量
/ g
样品中量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均
回收率
/%
ＲSD
/%
1 0. 050 0 1. 795 0. 917 2. 676 98. 67
2 0. 049 9 1. 791 0. 917 2. 684 99. 10
3 0. 050 3 1. 806 0. 917 2. 626 96. 45
4 0. 050 5 1. 812 1. 834 3. 593 98. 56
5 0. 050 8 1. 824 1. 834 3. 580 97. 87 98. 49 1. 06
6 0. 050 3 1. 806 1. 834 3. 644 100. 12
7 0. 050 7 1. 813 2. 620 4. 410 99. 48
8 0. 050 5 1. 812 2. 620 4. 358 98. 34
9 0. 050 4 1. 809 2. 620 4. 333 97. 83
表 2 当药黄素的回收率
No．
取样量
/ g
样品中量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均
回收率
/%
ＲSD
/%
1 0. 050 0 0. 205 0. 112 0. 310 97. 65
2 0. 049 9 0. 205 0. 112 0. 305 96. 21
3 0. 050 3 0. 206 0. 112 0. 304 95. 57
4 0. 050 5 0. 207 0. 224 0. 423 98. 17
5 0. 050 8 0. 208 0. 224 0. 430 99. 49 97. 35 1. 45
6 0. 050 3 0. 206 0. 224 0. 416 96. 69
7 0. 050 7 0. 208 0. 320 0. 513 97. 15
8 0. 050 5 0. 207 0. 320 0. 505 95. 83
9 0. 050 4 0. 207 0. 320 0. 524 99. 38
表 3 肋柱花中獐牙菜苦苷和当药黄素的含量 %
No． 獐牙菜苦苷 当药黄素
1 3. 67 0. 42
2 3. 62 0. 40
3 3. 63 0. 41
3 讨论
3. 1 检测波长的测定 采用 SPD-M20A检测器，取
獐牙菜苦苷对照品溶液和当药黄素对照品溶液在
190 ～ 400 nm 进行光谱扫描，结果獐牙菜苦苷在
237，276 nm有吸收峰，其中以 237 nm 处出现峰锐
尖，为最大吸收。当药黄素在 213，270，338 nm处为
3 个吸收峰的最大吸收波长，在 338 nm 处当药黄素
峰形锐尖，但此处獐牙菜苦苷吸收为 0，在 213，270
nm处当药黄素吸收峰均峰形较缓，峰顶峰谷吸收值
相差幅度较小，即在 210 ～ 275 nm 当药黄素吸收值
差别不大，因此综合獐牙菜苦苷和当药黄素两者的
吸收情况，选定 237 nm为检测波长。
3. 2 流动相的选择 考察了流动相甲醇-水、乙腈-
0. 1%磷酸的等度和梯度洗脱效果，结果甲醇-水的
梯度洗脱效果好，故选择了甲醇-水梯度洗脱。
3. 3 提取时间的确定 比较了不同超声时间对供
试品溶液中獐牙菜苦苷和当药黄素含量的影响，结
果表明超声提取 30 min即可。
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中国实验方剂学杂志，2012，18(10) :72.
［责任编辑 顾雪竹］
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第 19 卷第 10 期
2013 年 5 月
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Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 10
May，2013