全 文 ：淡竹叶中日当药黄素的含量测定研究
邵莹 ,邬云霞 ,吴启南 ,刘明
(南京中医药大学 ,江苏 南京 210046)
摘 要:目的:建立淡竹叶中日当药黄素的含量测定方法 。方法:采用 HPLC法测定不同产地 、不同采收
期淡竹叶中日当药黄素的含量。结果:日当药黄素在 0.672 ～ 4.704μg范围内线性关系良好;平均加样
回收率在 93.9% ～ 104.0%之间 , RSD为 100.92%。结论:该方法操作简便 ,重现性高 ,特异性强 ,能准
确的测定淡竹叶中日当药黄素的含量 ,为评价淡竹叶的质量提供了有效方法 。
关键词:淡竹叶;日当药黄素;含量测定
中图分类号:R286.0 文献标识码:A 文章编号:1002-2406(2010)05-0011-03
StudyonDeterminationofSwertiajaponininHerbaLophatheri
SHAOYing, WUYun-xia, WUQi-nan, LIUMing
(NanjingUniversityofChineseMedicine, Nanjing210046, China)
Abstract:Objective:TodevelopamethodfordeterminationofswertiajaponininLophatherum gracile
Brongn.Method:TheHPLCmethodwasappliedanddeterminedswertiajaponininHerbaLophatherifromdif-
ferenthabitatsandharvestingtime.Result:Intherangeof0.672 ～ 4.704μg, thelinearrelationshipwereex-
celent;themeanrecoverieswerebetween93.9% and104.0%, andRSDvalueswere100.92%.Conclu-
sion:Themethodissimple, highreproducibility, specificity, candeterminatetheswertiajaponininHerbaLo-
phatheriaccurately, whichprovideanefectivemethodtoevaluatethequalityofHerbaLophatheri.
Keywords:HerbaLophatheri;swertiajaponin;determination
基金项目:南京中医药大学科技创新团队项目(2007);江苏省教育厅高
新技术项目基金(JHB04-039);江苏高校科研成果产业化推
进项目(JHZD09-11)
作者简介:邵莹(1987-),女 , 南京中医药大学 2009级硕士研究生 ,主
要研究方向:中药品质评价。
通讯作者:吴启南(1963-),男 ,教授 ,博士 ,主要研究方向:中药品质评
价。
收稿日期:2010-06-10
修回日期:2010-07-05
淡竹叶(HerbaLophatheri)为禾本科(Gramineae)
植物淡竹叶 (LophatherumgracileBrongn.)的干燥茎
叶 。性寒 ,味甘 、淡 ,归心 、胃 、小肠经 。有清热除烦 ,利
尿之功效 , 用于热病烦渴 , 小便赤涩淋痛 , 口舌生
疮 [ 1] 。淡竹叶中含有黄酮 、多糖 、内酯 、叶绿素 、氨基
酸 、维生素和微量元素等成分 ,其中黄酮类化合物具有
较高的生物活性 。袁珂等 [ 2]建立了 RP-HPLC同时
测定不同产地 、不同采收期淡竹叶中荭草苷 、异荭草
苷 、牡荆苷和异牡荆苷的含量测定方法。张靖等[ 3]采
用各种色谱技术分离纯化 ,从淡竹叶中分离得到 14个
化合物 ,包括 2个黄酮木脂素类成分及 7个黄酮类成
分 。本研究在前期对淡竹叶中黄酮类成分的分离与鉴
定研究的基础上 ,在国内首次建立了淡竹叶中日当药
黄素的含量测定方法 ,为淡竹叶质量评价提供有效方
法和实验数据。
1 仪器与材料
1.1 仪器 BP211D(Is09001)电子分析天平;HH-S
水浴锅(巩义英峪予华仪器厂);Agilent1100液相色
谱仪(美国惠普公司);HederaC18色谱柱(4.6mm×
250mm, 5μm);DHG-9140型烘箱(上海精宝实验设
备有限公司);EPED超纯水制备系统 (南京易普易
达)。
1.2 药材与试剂 乙腈 (默克公司 , 色谱纯);甲醇
(上海化学试剂有限公司 ,色谱纯);乙酸(上海化学试
剂有限公司 ,分析纯);乙醚(分析纯);超纯水(实验室
超纯水制备系统自制);日当药黄素(swertiajaponin)对
照品(实验室自制)。淡竹叶药材产地:江西 、广东 、四
川(南溪)、江苏 、安徽 、湖北 (巴东)、浙江 、浙江 (磐
安)、福建(三明)、江苏宝华山 、江苏南京中山植物园。
经南京中医药大学中药鉴定教研室吴启南教授鉴定为
禾本科植物淡竹叶(LophatherumgracileBrongn.)的干
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Vol.27, No.5, 2010
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燥地上部分 。
2 方法与结果
2.1 对照品及供试品溶液制备
2.1.1 对照品溶液制备
称取日当药黄素对照品适量 ,精密称定 ,加超纯水
制成每 1mL含 672μg的溶液 ,即得 。
2.1.2 供试品溶液制备
称取淡竹叶各 2g,精密称定 ,分别加乙醚 60mL用
索氏提取器提取 6h脱脂 ,挥干溶剂 ,加甲醇 60mL回
流提取 5h,滤过 ,滤液浓缩 ,置 5mL量瓶中 ,加甲醇定
容至刻度 ,作为供试品溶液 。
2.2 色谱条件
色谱柱:HederaC18色谱柱 (4.6mm×250mm,
5μm);柱温:25℃;流动相:酸水 -乙腈梯度洗脱;流
速:1.0mL· min-1;检测波长:331nm;分析时间:
87min;进样量:5μL。
2.3 实验结果
2.3.1 标准曲线的绘制
分别吸取日当药黄素对照品溶液 2、 5、 8、 11、
14μL,进样 ,按 2.2项下色谱条件进行测定 。以对照
品质量 Y为纵坐标 ,峰面积积分 X为横坐标 ,绘制标
准曲线 , 得回归方程为:Y=0.0013X+0.0165(r=
0.9998),日当药黄素在 0.672μg～ 4.704μg范围内线性
关系良好。对照品色谱峰的保留时间为 67min,见图 1。
图 1 日当药黄素标准品 HPLC色谱峰
2.3.2 方法学考察
2.3.2.1 精密度试验
精密吸取浙江产淡竹叶样品(S7)供试品溶液
5μL,重复进样 5次 ,将数据导入 《中药指纹图谱相似
度计算软件 》,选峰 ,设定匹配模板 ,将谱峰自动匹配;
设定标准模板 ,进行谱峰差异性评价和整体相似性评
价 ,考察色谱峰相似度的一致性 , 计算精密度 ,结果
RSD=2.40%(n=5)。
2.3.2.2 重现性试验
取淡竹叶样品(S7),按 2.1.2项下方法制备 6份
供试品溶液 , 在所选色谱条件下测定 , 结果 RSD=
3.20%(n=6),表明本法重现性良好。
2.3.2.3 稳定性试验
精密吸取淡竹叶样品(S7)溶液 5μL,分别在 0、2、
4、8、12、24h测定 ,其相对保留时间 RSD小于 3%,主
要共有峰面积 RSD不超过 4%, 表明供试品溶液在
24h内稳定。
2.3.2.4 加样回收率试验
称取已知含量的淡竹叶样品(S7)药材粉末 6份 ,
各 2g,精密称定 ,加入日当药黄素对照品适量 ,日当药
黄素含量为 0.6342mg·g-1 ,按 2.1.2项下方法制备供
试品溶液。测定 ,结果见表 1。计算日当药黄素的平
均回收率为 100.92%, RSD%=2.31%。
2.3.3 样品测定
取采自不同产地以及江苏产不同采收期的淡竹叶
样品 ,按 2.1.2项下制备供试品溶液 ,进样 5μl,按 2.2
项下色谱条件测定 ,淡竹叶中日当药黄素(以干燥品
计)按标准曲线计算 ,样品中日当药黄素的含量结果
见表 2,色谱峰见图 2。
1号峰:日当药黄素
图 2 样品 HPLC色谱图
表 1 加样回收率测定结果(n=6)
样品编号 加入日当药黄素量(mg) 峰面积
测得日当药黄素
总含量(mg)
回收日当药黄素
的量(mg)
日当药黄素
回收率(%) RSD(%)
平均回收
率(%)
1 1.0 1733.461 2.270 0.992 99.2
2 1.1 1819.615 2.382 1.144 104.0
3 1.2 1846.538 2.417 1.149 95.8
2.31 100.92
4 1.2 1829.615 2.395 1.127 93.9
5 1.4 2046.538 2.677 1.409 101.3
6 1.4 1943.461 2.543 1.375 98.2
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表 2 样品淡竹叶中日当药黄素含量测定结果
样品编号 产地 样品来源 收集日期 日当药黄素含量均值(mg·g-1) RSD(%)
S1 江西 安徽丰原铜陵中药饮片有限公司 2006年 03月 0.5990 1.25
S2 广东 安徽丰原铜陵中药饮片有限公司 2006年 03月 0.7791 2.98
S3 四川(南溪) 安徽丰原铜陵中药饮片有限公司 2006年 03月 0.6774 0.99
S4 江苏 安徽丰原铜陵中药饮片有限公司 2006年 03月 0.7029 0.47
S5 安徽 安徽丰原铜陵中药饮片有限公司 2006年 03月 0.5987 3.54
S6 湖北(巴东) 安徽丰原铜陵中药饮片有限公司 2006年 03月 0.6078 2.22
S7 浙江 安徽丰原铜陵中药饮片有限公司 2006年 03月 0.6342 1.78
S8 浙江 浙江皖临泉县杨桥供销站 2007年 11月 1.7020 2.71
S9 浙江(磐安) 浙江磐安益昌供销站 2008年 09月 1.5430 3.36
S10 福建(三明) 自采 2008年 07月 2.2890 1.27
S11 江苏宝华山 自采 2008年 05月 0.3126 2.56
S12 江苏宝华山 自采 2008年 07月 0.5698 2.43
S13 江苏宝华山 自采 2008年 08月 0.6218 2.82
S14 江苏宝华山 自采 2007年 09月 2.1310 4.14
S15 江苏宝华山 自采 2008年 10月 2.0050 1.06
S16 南京中山植物园 自采 2007年 07月 0.4183 1.04
S17 南京中山植物园 自采 2007年 09月 0.6516 0.88
3 讨论
实验结果表明 ,不同产地淡竹叶中日当药黄素的
含量存在明显差异。
通过对不同产地淡竹叶中日当药黄素的含量的比
较 ,可将其品质的不同归因于环境变化 。中药品质的
形成与生态环境密切相关 ,气候 、地形 、土壤 、生物和人
类等环境因子 ,对中药品质有重要的影响。环境因素
影响生物代谢产物和性状特征 ,从而引起中药品质的
改变。各产地气候条件 、土壤环境及采收 、加工 、贮藏
条件等差异较大 ,野生和家种亦有较大差别。例如 ,样
品 S14和 S17为同年同月采收 ,由于产地不同 ,其日当
药黄素含量差别达 3倍以上 。因此 ,对淡竹叶质量的
影响因素尚需进一步深入研究。
目前 ,中药材市场生产秩序混乱 ,饮片厂随意贴牌
现象普遍存在 ,给中药材质量监管带来很大困难 ,确定
淡竹叶道地产区还需要更可靠的药材来源 ,更多的产
地 、批次及更全面的评价指标 ,以期为淡竹叶道地产区
的评价提供参考 ,从源头解决淡竹叶品质问题。安徽
丰原铜陵饮片厂产 7个样品 S1 ～ S7 ,平均含量较低 ,
各产地含量差别较小;浙江产样品 S8、S9中日当药黄
素含量约为安徽丰原铜陵饮片厂样品的 2倍多;福建
三明产自采样品 S10中日当药黄素含量居 17批样品
之首。
中药采收有一定的时间节律 ,采收期对淡竹叶中
日当药黄素的含量影响比较明显 ,其中 9月份采收的
淡竹叶的日当药黄素含量最高 。传统观念认为 ,淡竹
叶 5 ～ 7月未抽穗时采收。同年 7月和 9月采自南京
中山植物园的淡竹叶中日当药黄素含量分别为
0.42‰和 0.65‰,与传统采收期有一定的差异。考察
淡竹叶最佳采收期 ,还需要进一步研究淡竹叶总黄酮
的动态积累 ,为淡竹叶的 GAP栽培管理提供深入的研
究依据 。
本文对不同产地 、不同采收期淡竹叶中日当药黄
素的含量进行测定比较 ,为制定淡竹叶质量标准 ,评定
淡竹叶道地产区 ,确定采收期提供参考 。要制定较为
完善的质量标准和合理的采收期还需要更全面的指
标 ,收集更完全的样品以及更深入的药效研究 。
参考文献:
[ 1] 国家药典委员会 .中华人民共和国药典 [ S] .北京:化学工业出
版社 , 2005:230.
[ 2] 袁珂 ,薛月芹 ,殷明文 ,等 .RP-HPLC同时测定淡竹叶中 4种黄
酮苷的含量 [ J].中国中药杂志, 2008, 33(19):2215-2218.
[ 3] 张靖 ,王英 ,张晓琦 ,等 .淡竹叶化学成分研究(英文)[ J].中国
天然药物 , 2009, 7(6):428-431.
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