全 文 ：255※工艺技术 食品科学 2006, Vol. 27, No. 10
体萃取物含有一定比例的β,β-胡萝卜素几何异构体，在
食品添加剂产品中具有一定的代表性。图6为番茄果皮
的丙酮—二氯甲烷萃取液反相C30柱高效液相色谱图。
根据组分I、III、IV与碘诱导反应产物中相关化合物电
子吸收光谱的比较，鉴定组分I、III、IV分别为13,
13’-、9,9’-顺式和全反式异构体。
图6 番茄果皮的丙酮—二氯甲烷萃取液反相C30柱高效液相色谱图
Fig.6 C30-RP-HPLC chromatogram of extract from tomato
fruit skin
色谱条件：见1.2.5节。组分鉴定：I=13,13’-顺式异构体；III=9,
9’-顺式异构体；IV=全反式异构体。
0.19
0.15
0.11
0.07
0.03
-0.01
0 5 10 15 20 25 30 35
吸
光
值
保留时间(min)
IIII
IV
3 结 论
本项研究的结果表明：应用C30-HPLC-PDA色谱系
统，在乙腈-甲醇(75:25；流动相A)和MTBE(流动相B)
的线性梯度洗脱条件下，β,β-胡萝卜素的13,13’-、
11,11’-、9,9’-顺式异构体和全反式异构体4个组分
获得了良好的分离。根据其电子吸收光谱特征，辅助
以化学反应验证，这4个组分可被鉴定。这一结果奠定
了应用C30-HPLC-PDA检测β,β-胡萝卜素几何异构体的
基础。
参考文献：
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收稿日期：2006-08-09
作者简介：张胜帮(1964-)，男，副教授，研究方向为食品资源开发与分析化学。
淡竹叶中黄酮类化合物的提取研究
张胜帮，赵玲玲
(温州大学应用技术学院，浙江 温州 325035)
摘 要：为了研究淡竹叶中黄酮类化合物提取方法。本文采用超声波-醇提-酯萃法，研究了提取的各种影响因
素,通过正交试验设计，寻找最佳提取条件。试验结果表明，以60%乙醇为溶剂，固液比为1:30，经20kHz超声
波提取30min，再经70℃水浴回流3h为最佳，在最佳实验条件下得到2.27%的收率。在试验影响因素中，影响
程度从大到小依次为溶剂＞回流温度＞超声时间＞超声强度＞回流时间＞溶剂浓度＞固液比。
关键词：淡竹叶；黄酮类化合物；超声波-醇提-酯萃法；提取
Study on Extraction Method of the Flavones in the Herbal Lophatheri
ZHANG Sheng-bang，ZHAO Ling-ling
(College of Applied Technology, Wenzhou University, Wenzhou 325035, China)
Abstract ：To study the way of the flavonoid compounds extracted. The ultrasound-grade to-esters-crafts act was used, the
various factors influencing extraction through orthogonal tests designed to find the best conditions was studied. The experimental
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results show that recovery was best in 60% ethanol as solvents, solid/liquid for 1:30, after 20kHz ultrasound extraction 30min
via 70℃ water bath for returning 3h best in the best experimental conditions to be 2.27% in the rate. The experimental factors,
the impact will activate by solvents, returning temperature, ultrasonic time, ultrasonic intensity, return time, solvent concentration,
solid/liquid in order draw.
Key words：herbal lophatheri；fl vono d compounds；ultrasound-grade to-esters and crafts act； x raction
中图分类号：Q623.54 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2006)10-0255-04
黄酮类化合物是广泛存在于植物体内的一类极具有
开发前景的天然有机抗氧化剂。目前食品中常用的抗氧
化剂有丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)、
叔丁基对苯二酚(TBHQ)、没食子酸丙酯(PG)等。由于
毒性和致癌作用等原因，许多国家已停止或严格限制使
用。寻找和开发无毒的天然抗氧化剂已成为人们关心的
焦点。我国植物资源丰富，许多植物体中都含有天然
抗氧化成分。黄酮类化合物是广泛存在于植物体内，无
不良反应，同时还有显著的清除人体内自由基、抗老
化、抗突变、调血脂、降血压等药理保健功能，是
一类极具开发前景的天然有机抗氧化剂[1]。
淡竹叶黄酮资源丰富，安全性高，提取工艺简
单，而且具有一定的药理作用。研究和开发菊花资源，
使其成为合成抗氧化剂的替代品是很有意义的。因此，
目前对竹叶黄酮类物质的提取纯化及功能作用的研究已
成为一个热点[2～5]。
竹叶总黄酮的提取方法，主要有水提法、有机溶
剂提取法、大孔村脂法、超临界CO2萃取法、微波法、
超声波等，以醇提-酯萃法、超声波法使用较多。
本文通过正交试验考察多种因素对于竹叶黄酮提取
效果的影响，采用比色法，寻找最佳提取条件。结果
表明，以60%乙醇为溶剂，固液比为1:30，经20kHz
超声波提取30min，再经70℃水浴回流3h为最佳。影
响主次为溶剂＞回流温度＞超声时间＞超声强度＞回流
时间＞溶剂浓度＞固液比，且溶剂、回流温度的极差
明显比其它因素大。在试验最佳条件下最大得到2.27%
的收率。
1 材料与方法
1.1试剂与仪器
1.1.1试剂
芦丁标准物 成都欧康植化科技有限公司；甲醇、
乙醇、乙酸乙酯(均为A.R) 中国上海试剂总厂。
1.1.2仪器
RE-52A型转蒸发器 上海亚荣生化仪器厂；
AS20500A型超声波发生器(总功率40kHz,可调，30%～
100%) 天津子安科学仪器有限公司；BP110S型电子天
平 北京赛多利斯仪器系统有限公司；UV-2501PC型紫
外分光光度仪 日本岛津公司；HH-S型水浴锅、SHZ-
D(Ⅲ)型循环水多用真空泵 巩义市英峪予华仪器厂。
1.2方法
1.2.1黄酮的提取
1.2.1.1干燥粉碎
将淡竹叶洗净，以蒸馏水浸泡24h，60℃烘箱烘干。
将干燥的淡竹叶剪碎，研磨粉碎，过30目筛，备用。
1.2.1.2超声波-回流提取
将处理好的样品粉末1.000g，放入碘量瓶，按一
定的比例加入相应的溶剂，在一定频率下进行空化一段
时间。取出碘量瓶，放入水浴锅，水浴回流。过滤，
收集液体。
1.2.1.3回收溶剂
将滤液放入旋转蒸发器中回收溶剂，将浓缩得到的
膏体以蒸馏水洗涤除渣(抽滤)，合并清液，以乙酸乙酯
萃取3次，合并萃取的乙酸乙酯液，放入旋转蒸发器中
回收溶剂，以60%乙醇溶解。
1.2.2正交试验设计
本实验采用超声波提取法和溶液萃取法相结合，先
通过超声波提取，使样品中的有效成分在最短的时间内
进入溶剂中，再通过溶剂的回流，进一步提取，再经
过分离提纯，即可用于UV的含量分析。
通过正交试验考察多种因素对于竹叶黄酮提取效果
的影响，寻找最适合的提取条件。正交表选用L32(49)，
8、9列为空白列[9]。
1.2.3总黄酮的测定
1.2.3.1标准曲线的绘制
测定波长的选择(芦丁及样品的最大吸收峰)：分别
对芦丁标样、提取液在200～400nm范围内，以即定条
件进行多次(3～5)扫描，重复平均得到两条吸收谱线，
取重叠峰中，提取液的最高吸收值的峰位为测定波长。
1.2.3.2总黄酮浓度的测定
将提取液转入50ml容量瓶，以60%乙醇溶液定容。
移取1.00ml至10ml比色管以60%乙醇溶液定容至10.0ml。
在λmax(274.0nm)下测定吸收度和样品浓度。
2 结果与分析
257※工艺技术 食品科学 2006, Vol. 27, No. 10
2.1标准曲线的绘制
测定波长的选择(芦丁及样品的最大吸收峰)：分别
对芦丁标样、提取液在200～400nm范围内，以即定条
件进行多次(3～5)扫描，重复平均得到两条吸收谱线，
取重叠峰中，提取液的最高吸收值的峰位为测定波长，
实验结果表明，最佳波长为274.0nm。
芦丁标准溶液的配制：精确称取8.00mg已烘干至恒
重的芦丁标样，以60%乙醇溶液定容至25ml，配制系
列浓度20.00、40.00、60.00、80.00、100.0mg/L于10ml
比色管中，以60%乙醇溶液定容至刻度备用。在所取
得的最大吸收波长下测定各溶液吸光度，并制成浓度-
吸光度曲线，曲线方程为：
y=0.0209x(mg/L)，线性相关系数R为0.9991。
2.2淡竹叶黄酮提取工艺研究
为了优化淡竹叶黄酮提取条件，通过实验，选择
乙醇作为溶剂，确定溶剂种类、溶剂浓度、超声波强
度、超声波时间、回流时间、回流温度、固液比作
为本实验主要的考察因素。对实验的主要因素，溶剂、
溶剂浓度、超声波强度、超声波时间、回流时间、回
流温度、固液比进行正交实验L32(49)设计，设计的各因
素水平见表1，按照表2所示的条件进行正交试验，试
验结果列于表2中。
从表2可以分析得到，各项试验结果中，以14号
实验(A3B2C4D1E4F4G3)结果最为理想，产率为2.27%。
而从K值分析可以看出，A4B2C4D3E4F3G3为最佳提
取工艺条件。即以60%乙醇为溶剂，固液比为1:30，
经20kHz超声波30min后，再经70℃回流3h的工艺，淡
竹叶黄酮类化合物的产率较高。重复实验结果较好。
从极差R分析可以得到，影响主次为A＞F＞D＞
C＞E＞B＞G，即溶剂＞回流温度＞超声时间＞超声
强度＞回流时间＞溶剂浓度＞固液比。且溶剂的选择与
回流温度的影响最大，固液比影响最小。
3 讨 论
淡竹叶总黄酮的提取在采用乙醇作溶剂，经20kHz
超声波空化30min后，再经70℃回流3h产率较高。影
响主次为溶剂＞回流温度＞超声时间＞超声强度＞回流
时间＞溶剂浓度＞固液比。且A、F的极差明显比其它
影响大，溶剂影响最大，回流温度其次，固液比影响
序号 溶剂A 溶剂浓度B(%) 超声波强度C(kHz)超声波时间D(min) 回流时间E(h) 回流温度F(℃) 固液比G
1 水 50 50 10 0.5 50 1:10
2 水 60 40 20 1.0 60 1:20
3 甲醇 70 30 30 2.0 70 1:30
4 乙醇 80 20 40 3.0 80 1:40
表1 因素水平表
Table 1 Table of the different factors’ and levels
序号 A B C D E F G 产率(%)
1 1 2 3 2 3 3 2 1.45
2 3 4 1 2 2 1 2 1.89
3 2 4 3 3 4 1 1 1.16
4 4 2 1 3 1 3 1 2.03
5 1 3 1 4 4 4 1 1.84
6 3 1 3 4 1 2 1 1.08
7 2 1 1 1 3 2 2 1.21
8 4 3 3 1 2 4 2 1.18
9 1 1 4 3 2 1 4 1.69
10 3 3 2 3 3 3 4 2.24
11 2 3 4 2 1 3 3 1.40
12 4 1 2 2 4 1 3 1.62
13 1 4 2 1 1 2 3 0.90
14 3 2 4 1 4 4 3 2.27
15 2 2 2 4 2 4 4 1.26
16 4 4 4 4 3 2 4 1.53
17 1 2 1 4 3 1 3 1.51
18 3 4 3 4 2 3 3 1.85
19 2 4 1 1 4 3 4 1.36
20 4 2 3 1 1 1 4 1.72
21 1 3 3 2 4 2 4 1.26
22 3 1 1 2 2 2 4 1.03
23 2 1 3 3 3 4 3 1.51
24 4 3 1 3 2 2 3 2.13
25 1 1 2 1 2 3 1 1.39
26 3 3 4 1 3 1 1 1.63
27 2 3 2 4 1 1 2 1.39
28 4 1 4 4 4 3 2 2.15
29 1 4 4 3 1 4 2 1.81
30 3 2 2 3 4 2 2 1.61
31 2 2 4 2 1 4 1 1.29
32 4 4 2 2 3 4 1 1.34
K1 11.8511. 6812.9911.6611.6212.6011.73
K2 10.5813.1411.7511.2912.4210.7512.70
K3 13.6013.0711.2214.1612.4213.8813.18
K4 13.7011.8413.7712.613.2712.5012.09
k1 1.4801.4591.6241.4581.4521.5751.469
k2 1.3231.6431.4681.411.5531.3441.587
k3 1.7001.6341.4021.7701.5521.7341.648
k4 1.7131.4801.7211.5771.6601.5621.512
R 0.390.1840.3190.3590.2080.390.179
表2 正交试验结果 L32(49)
Table 2 The results of the orthogonal test L32(49)
最小。
淡竹叶黄酮资源丰富，安全性高，提取工艺简
单，而且具有一定的药理作用。研究和开发淡竹叶资
源，使其成为合成抗氧化剂的替代品是很有意义的。
2006, Vol. 27, No. 10 食品科学 ※工艺技术258
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收稿日期：2006-06-23
基金项目：黑龙江省自然科学基金重点项目(ZJY04-08)
作者简介：吴春(1962-)，女，教授，研究方向为天然产物研究与开发。
纤维素酶法提取葡萄籽中原花青素的研究
吴 春，张 艳
(哈尔滨商业大学食品工程学院，黑龙江 哈尔滨 150076)
摘 要：研究了葡萄籽中原花青素的酶法提取工艺。以葡萄籽中原花青素的提取率为指标,采用单因素法和正交设
计法对纤维素酶解法提取工艺条件进行优选。实验结果表明，影响酶法提取原花青素的因素次序为：酶解温度＞
酶解浓度＞pH值＞乙醇浓度，其最佳工艺条件为：酶解浓度为0.10%，酶解温度为50℃，pH值为5.5，乙醇浓
度为60%，所得葡萄籽中原花青素的提取率为4.16%。
关键词：葡萄籽；原花青素；纤维素酶；提取工艺
Studies on Extraction of Proanthocyanidins from Grape Seed with Cellulase
WU Chun，ZHANG Yan
(Department of Food Engineering, Harbin University of Commerce, Harbin 150076, China)
Abstract ：A new technology of extracting Proanthocyanidins from grape seed was studied. Took content of Proanthocyanidins
as target, adopted single factor method and orthogonal test design to determine the best extraction condition. The result showed
that the factors affecting extraction efficiency of Proanthocyanidins were as follows: the enzyme temperature ＞ enzyme
concentration ＞ pH ＞ethanol concentration. The best technics of enzyme together with ethanol extraction are as fo1lows: enzyme
concentration 0.10%, enzyme temperature 50℃, pH5.5, thanol concentration 60%. The extraction rate is about 4.16% under
these conditions.
Key words：g ape seed；Proanthocyanidins；cellula e anzyme； xtraction procedure
中图分类号：TS264.4 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2006)10-0258-04
目前，原花青素的提取方法有水提取、有机溶剂
提取、超临界流体提取等方法。水提法成本低，但浸
提提取率差，原料利用率不高，资源浪费严重；超临
界流体法虽提取率高,但因设备昂贵，普及受限制。葡
萄籽中的活性成分几乎被以纤维素为主构成的细胞壁所
包围，根据传质理论[1]，溶剂向固体表面扩散，渗透
固体表面，进入固体内部及固体内部微孔隙内，溶解
原花青素，通过固体微孔隙向固体表面扩散，在表面
与溶剂主体间，由于浓度差作用力，原花青素向溶剂
主体扩散，完成提取传质过程。基于以上原理建立了
以纤维素酶酶解法结合醇提法提取原花青素的工艺，以
期得到较高的提取率。
1 材料与方法