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当代医学 2010年12月第16卷第34期总第225期 Contemporary Medicine, Dec. 2010,Vol.16 No.34 Issue No.225
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马勃,又名灰包,为真菌类中药,始载于《名医别录》,具有
消肿、解毒、和止血的功用。历代的本草对其功用和植物来源各有
增益,随着近年中药药理学的发展及人们对低等植物如藻类和真
菌类良好的保健作用以及较好的生物活性的重视,马勃中的化学
成份和各种制剂,在抗菌和抗癌等方面表现出了特殊的作用,受
到医药界的关注。对马勃的化学成分、药理活性和临床应用等方
面有了更多的认识。本文对中国药典2005版所规定的正品马勃之
一的脱皮马勃所含的小分子化合物II、Ⅵ进行体外抗肿瘤活性的
初步研究,以期探讨脱皮马勃的抗肿瘤活性。
1 实验方法
1.1 提取和分离
本文采用乙醇为溶剂,回流提取,再用石油醚(60~90C)萃取
得到浸膏,采用硅胶柱层析、葡聚糖凝胶、高效液相、制备薄层等
方法分离纯化得到了11个化合物,通过理化性质和NMR等波谱
手段鉴定了其中的l0个化合物的结构,其中9个麦角甾类衍生物和
1个脂肪酸类成分。
1.2 化合物的体外抗肿瘤活性研究
1.2.1 细胞培养:K562细胞(悬浮细胞)、A549细胞(贴壁细
胞)在3712,5%C02饱和湿度条件下,用1640培养液培养。
1.2.2 药物配制 将化合物II(Img1mg),化合物VI(1Mg)用
200UL DMSO溶解,配成浓度为5mg/ml的溶液,放置在冰箱里
保存,备用。
1.2.3 实验步骤
①取对数生长期的K562白血病细胞,用1640培养液调整细
doi:10.3969/j.issn.1009-4393.2010.34.021
脱皮马勃抗肿瘤活性研究
黄文琴
[摘要] 目的 探讨脱皮马勃的抗肿瘤活性。方法 采用MTT法测定从脱皮马勃中分离到的化合物Ⅱ、Ⅵ对红白血病细胞K562和肺癌细胞A549
的增殖抑制作用。结果 实验表明:化合物Ⅱ在50Ug/ml时对K562细胞细胞具有较好的增殖抑制作用,增殖抑制率达64%。化合物II、Ⅵ在50Ug/ml
时对K562和A549细胞的抑制作用较低。 结论 化合物Ⅱ、Ⅵ均具有抑制肿瘤细胞增殖的作用。
[关键词] 脱皮马勃;MTT;抗肿瘤活性
胞浓度1×l05个/ml,接种于96孔板上,每孔l00ul。取对数生长期
的A549肺癌细胞,调整细胞悬液浓度,接种于96孔板上,用1640
培养液调整细胞浓度8×x104个/ml,每孔l00ul。置37℃、5%CO2
培养箱培养使细胞贴壁。②向细胞中加入化合物Ⅱ、Ⅵ,每个化合物
设三个复孔、6个不同的浓度:50ug/ml、25ug/ml、12.5ug/ml、
6.25ug/ml、3.125ug/ml、1.563ug/ml。③将培养板于培养箱
中放置72小时后,每孔加入5mg/ml MTT 20ul,培养箱中放置
4小时后,用离心机(3500转/分钟)离心8分钟,以快速翻板法弃上
清液,每孔加150m DMSO,培养箱中放置10min使MTT溶解。
④用酶标仪测定各孔的光密度值,检测波长为570nm,参比波长
630rim。细胞增殖抑制率计算公式如下:细胞增殖抑制率%=(卜
实验组光密度/正常对照组光密度)×100%。
2 试验结果
表1 化合物II、Ⅵ对K562细胞的体外抑制作用
化合物 药物浓度(pg/m1) 光密度 抑制率(%)
正常对照组 1.279
化合物II 50 0.963 24.7
25 1.028 19.6
12.5 1.06 17.1
6.25 1.09 14.8
3.125 1.10 14.0
1.562 1.138 11.0
化合物Ⅵ 50 0.831 35.0
25 1.113 33.9
12.5 0.849 30.5
6.25 0.899 29.6
3.125 0.901 13.0
1.562 0.954 12.1
作者单位:336000 宜春市人民医院药剂科(黄文琴)
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增殖抑制率高达64.1%,而对A549的抑制作用较弱,在实验最大
浓度时对细胞的增殖抑制率仅为24.7%。表明这两个化合物均具
有抑制肿瘤细胞增殖的作用。
参考文献
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图2—1化合物II、Ⅵ对K562细胞的增殖抑制作用的量效曲线
图2-2化合物对A549细胞的增值抑制作用的量效曲线
3 讨论
马勃包体灰褐色或浅褐色,紧密,有弹性,用手撕之,内有
灰褐色棉絮状的丝状物。触之则孢子呈尘土样飞扬,手捻有细腻
感,臭似尘土,无味[1]。本草记载最早见于陶弘景《名医别录》,称
其“味辛平无毒,主治恶疮马疥”,生长环境为“园中久腐处”。最
早关于马勃的药材性状描述的是南梁陶弘景,在《本草经集注》
中说:“马勃……,紫色虚软,状如狗肺,弹之粉出,傅诸疮用之
甚良也。”马勃中所含的化学成分比较复杂,由于马勃品种复杂,
马勃种属的多样性更加剧了这种复杂性。但其化学成分主要含有
小分子的氨基酸、甾体化合物、萜类化合物以及大分子的马勃多
糖、蛋白质和多肽,此外还有一些微量元素等。马勃中含有很多
种类的甾体化合物,这些化合物被认为马勃中活性成分的主要部
分。曾有文献报道灰包科脱皮马勃属真菌脱皮马勃Lasiosphaera
Fenzlii Reieh.的子实体含有麦角甾、麦角甾醇过氧化物、啤酒甾
醇等[2]。
MTT法是二十世纪八十年代发展起来的一种快速、简便的体
外抗癌药物敏。
感性的测试方法,MTT法具有操作简便、快速、准确、廉价
及不使用同位素等。
优点,目前已被广泛用于抗肿瘤药物体外筛选试验。本文采
用MTT法,对分离得到的麦角甾类化合物进行抗肿瘤活性的初步
评价。由图1、图2可以看出,化合物II、Ⅵ对K562和A549细胞均匀
不同程度的增殖抑制作用,化合物II在50Ug/ml时对K562细胞的
无差异。主要是由于瘤体被膜内外及淋巴间质中均有数量不
等的大小血管分布且呈扩张状态,间质含量越多,瘤体内血供越
丰富,因而表现出某些恶性肿瘤的特征。
超声检查诊断腮腺Warthin瘤时应注意与腮腺混合瘤相鉴
别:本组病例中2例误诊为腮腺混合瘤合并癌变。其中1例女性,
1例男性,表现为Ⅱ型均匀性低回声。回顾性分析:早期对该病认
识不足,彩色多普勒血流显像见丰富血流信号,RI:1.0,即误认
为混合瘤合并癌变。检查时仅关注血流及RI情况,忽视了腮腺
Warthin瘤血供丰富这一特点。腮腺Warthin瘤部位较恒定,男
性多见,超声多表现为均匀的网格状回声,典型者内可见网管内移
动的点状回声,均表现为光滑、整齐完整的边缘回声,质软具有可
压缩性,彩色多普勒血流丰富。腮腺混合瘤女性多见,40岁左右好
发,以耳垂为中心生长;通常质地中等偏硬;肿瘤部位不定,质地
中等偏硬,肿瘤可及呈,甚至可见皮肤呈凹凸不平状结节状]。声
像图上回声多为相对均匀实性低回声,常见有斑点状强回声。
超声检查诊断腮腺Warthin瘤时应注意与恶性肿瘤相鉴别,
我们应主要以二维图像上的结构如境界清晰,形态规则,呈椭圆
形或类圆形,包膜完整,不侵入周围组织,肿块有“网格状”结构
等特点结合临床检查区分腮腺Warthin瘤与恶性肿瘤。
综上所述,作为一种简便的检查方法,在识别二维特征
性声像图和彩色多普勒血流显像基础上,高频超声在诊断腮腺
Warthin瘤中具有重要价值。
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