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鱼腥草素钠(粉针剂)体外抗菌活性的初步研究



全 文 :收稿日期: 2004-11-01; 修订日期: 2005-03-08
作者简介:程训民 ( 1965-) ,男 (汉族 ) ,安徽汤山人 ,现任安徽省淮北市人
民医院副主任技师 ,主要从事微生物检验工作 .
药理药化
鱼腥草素钠 (粉针剂 )体外抗菌活性的初步研究
程训民 1 , 沈继录 2 , 徐元宏 2 , 李 敏1 , 张 琪1 , 朱素珍1
( 1.安徽省淮北市人民医院  235000;  2.安徽医科大学第一附属医院 ,安徽 合肥  230022)
摘要:目的: 测定鱼腥草钠 (粉针剂 )对临床常见致病菌的抗菌能力 ,以期评价其体外抗菌效果 ,为该药物粉针剂
的开发和临床研究提供依据。方法: 使用微量液体稀释法和琼脂稀释法测定鱼腥草素钠 (粉针剂 )不同条件下对
临床常见致病菌最小抑菌浓度 ( M IC)和最小杀菌浓度 ( M BC)。 结果: 鱼腥草素钠 (粉针剂 )对革兰阴性杆菌 (肺
炎克雷伯菌、大肠埃希菌 )和真菌 (白色念珠菌 )抗菌效果较差 , M IC> 1 024μg /ml。 对革兰阳性球菌 (金黄色葡
萄球菌、表皮葡萄球菌及肺炎链球菌 )有较好抑制作用 ,其 M IC在 64μg /ml左右 ,不同 pH值和不同菌液浓度对
鱼腥草素钠 (粉针剂 )的抗菌效果无明显影响。 结论:鱼腥草素钠 (粉针剂 )对革兰阳性球菌 (金黄色葡萄球菌、表
皮葡萄球菌及肺炎链球菌 )有较好抑制作用 ,值得进一步开发和利用。
关键词:鱼腥草素钠 ; 最小抑菌浓度 ; 最小杀菌浓度
中图分类号: R285. 5  文献标识码: A  文章编号: 1008-0805( 2005) 05-封 3-02
Initial Study on Sodium Houttuyfonate( injectable powder) Antimicrobial Activity
in Vitro
CHENG Xun-min
1
, SHEN Ji-lu
2
, XU Yuan-hong
2
, L I M in
1
, ZHAN G Qi
1
, ZHU Su-zhen
1
( 1. Department of Laboratory Science of Huaibei Hospital , Anhui 235000, China; 2. The First
Af f iliated Hospi tal of Anhui Medical University , Hefei 230022, China )
Abstract: Objective: To evaluate Sodium Hout tuy fonate ( injec table powder ) antisepticize effec t by determina-
tion antimicr obial activity in v itro which may be helpful to exploita tion and clinical resear ch.Methods: M IC and
M BC w ere determined by microamount liquid dilution method and aga r dilution method unde r differ ent condi-
tio ns. Results: It is no t effectiv e to g ram nega tiv e bacilli and is effectiv e to g r am positiv e coccus. Antimicrobial
activity wa s no t effec tive in differ ent conditions. Conclusion: The g ram positiv e coccus can be inhibited by Sodi-
um Houttuyfona te ( injectable pow der) , which is v alue of fur th er development and utilization.
Key words: Sodium Houttuy fonate;  MIC;  M BC
  鱼腥草 ( Houttuynia cordata )属三白草科蕺菜属野生草本植
物 ,现代药理学研究表明 ,鱼腥草有抗病毒、抗菌、抗炎镇痛 、止咳
及增强特异性及非特异性免疫的功能 ,是一种理想的标本兼治中
药制剂。以往对鱼腥草的研究较多 ,但主要是对其药用、药理及鱼
腥草注射液的临床治疗效果的报道 ,还未有粉针剂形式的制剂。
本研究主要是测定鱼腥草素钠 (粉针剂 )对临床常见致病菌的抗
菌能力 ,以期探讨其体外抗菌效果 ,为该药物粉针剂的开发和临
床研究提供基础。
1 材料和方法
1. 1 菌株来源 实验菌株来自淮北市人民医院检验科和安徽医
科大学第一附属医院检验科细菌室 ,从临床下呼吸道标本分离获
得。 痰、纤支镜刷片、咽拭子按常规分离、培养 ,经 MicroScan
Wa lk AWay- 40全自动微生物分析仪 , PC11, NC21反应板鉴定
获得。 标准菌株 ATCC25922(大肠埃希氏菌 )、 ATCC25923(金黄
色葡萄球菌 )、 ATCC49619(肺炎链球菌 )、 ATCC90029(白色念球
菌 )购自卫生部临床检验中心。
1. 2 药品来源 实验药: 鱼腥草素钠 (粉针剂 )系皖南医学院药理
教研组提供 ;对照药:阿齐霉素系湖北瑞康药业有限公司生产 ,批
号 200305013。
1. 3 实验方法 微量液体稀释法和琼脂稀释法 ,实验药 -鱼腥草
素钠粉针剂 ( 4 mg /瓶 )用生理盐水稀释后 ,再用 M- H肉汤倍比
稀释 ,使鱼腥草素钠 (粉针剂 )应用浓度为 1 024, 512, 256, 128,
64, 32, 16, 8, 4, 2, 1μg /ml。 相同方法使对照药 -阿齐霉素 ( 0. 25
g /瓶 )浓度成为 256, 128, 64, 32, 16, 8, 4, 2, 1, 0. 5, 0. 25, 0. 125
μg /ml。 细菌浓度采用直接菌落法 ,即挑选分离培养获得单个菌
落于 M- H肉汤增菌 4~ 6 h ,使其达到 0. 5麦氏单位 ,然后稀释使
细菌浓度约为 107 , 106 , 105 , 104 , 103 CFU /ml。
1. 3. 1 最小抑菌浓度 ( M IC)和最小杀菌浓度 ( MBC)的测定 肺
炎克雷伯菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌及表皮葡
萄球菌的 MIC和 M BC测定采用微量液体稀释法 ,培养基为 M-
H肉汤 ,置 35℃ , 24 h观察结果。肺炎链球菌 MIC和 MBC测定采
用琼脂稀释法 ,培养基使用 M- H琼脂+ 5%脱脂羊血 ,置 35℃ ,
5% ~ 7% CO2 , 24 h观察结果。
1. 3. 2 杀 菌曲 线 ( KCs )试验 采 用 金黄 色 葡萄 球菌
( ATCC25923)按微量液体稀释法分别挑取试验药物和对照药物
的最小抑菌浓度孔 ,吸取 10μl稀释后 , M- H琼脂倾注 , 35℃ , 24
h,观察 0, 4, 8, 12, 24 h的细菌菌落数 ,绘制时间 -杀菌曲线。
1. 3. 3  p H对最小抑菌浓度的影响 选择金黄色葡萄球菌
( ATCC25923) ,测定不同 p H( 5, 7, 9)的最小抑菌浓度 ( M IC)和最
小杀菌浓度 ( MBC)。
1. 3. 4 不同菌液浓度对最小抑菌浓度的影响 选择 ATCC25923
(金黄色葡萄球菌 ) ,测定不同菌液浓度 ( 107 , 106 , 105 , 104 , 103
CFU /ml)的最小抑菌浓度 ( M IC)和最小杀菌浓度 ( M BC)。
2 结果
2. 1 鱼腥草素钠 (粉针剂 )对 35株细菌的 MIC测定 见表 1。
2. 2  pH对最小抑菌浓度 MIC的影响 见表 2。
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LISHIZHEN M EDICINE AN D M ATERIA M EDICA RESEARCH 2005 VO L. 16 NO. 5 时珍国医国药 2005年第 16卷第 5期
2. 3 不同菌液浓度对最小抑菌浓度 M IC的影响 见表 3。
2. 4 时间杀菌曲线实验结果 见表 4,图 1。
表 1 鱼腥草素钠 (粉针剂 )对 35株细菌的 MIC测定
菌名 株数
实验药 C /μg· ml-1
MIC范围 M IC
50
M IC
90
对照药 C /μg· ml-1
M IC范围 M IC
50
M IC
90
金黄色葡萄球菌 10 64~ 128 64 128 1~ 8 2 4
表皮葡萄球菌 10 32~ 128 64 128 1~ 4 2 2
大肠埃希菌 10 >     8~ 256 256 > 256
肺炎克雷伯菌 1 > 1 024     256
白色念珠菌 1 > 1 024
A TCC25922 1   128     2
A TCC25923 1 > 1024     256
A TCC49619 1 64     0. 25
表 2  pH对最小抑菌浓度 M IC的影响 μg /ml
菌名 pH 5. 0 pH 7. 0 pH 9. 0
金黄色葡萄球菌 < 1 128 512
表皮葡萄球菌 0. 25 1 4
大肠埃希菌 128 > 1 024 > 1 024
肺炎克雷伯菌 512 > 1 024 > 1 024
白色念珠菌 512 > 1 024 > 1 024
表 3 菌液浓度对最小抑菌浓度 M IC的影响 μg /ml
菌名 107 106 105 104 103 CFUV /ml
金黄色葡萄球菌 256 256 128 128 128
大肠埃希菌 > 1 024 > 1 024 > 1 024 > 1 024
肺炎克雷伯菌 > 1 024 > 1 024 > 1 024 > 1 024
白色念珠菌 > 1 024 > 1 024 > 1 024 > 1 024
肺炎链球菌 64 64 64 64 16
表 4 时间杀菌曲线实验结果
时间 /h 实验药物菌落数 对照药物菌落数
0 2 5
4 10 21
8 7 10
12 22 112
24 2 23
t /h
图 1 时间杀菌曲线实验结果
3 讨论
中医在上千年的发展史中 ,发现了一系列针对细菌感染有确
切疗效的药物 ,近年来中药提取物对细菌的抑制作用研究较多 ,
而中药抑菌作用的研究也是开发利用中药资源的一个重要组成
部分。
现代药理学研究表明 ,鱼腥草有抗病毒、抗菌、抗炎镇痛、止
咳及增强特异性及非特异性免疫的功能 ,是一种理想的标本兼治
中药制剂。 其分布在长江以南及西藏等省区 ,生于背阳山地、林
边、田埂及洼地草丛中 ,全草富含挥发油、鱼腥草素、刺激性蕺菜
碱及钾盐。 主要有效成分为癸酰乙醛 (即鱼腥草素有鱼腥味 )、甲
基正壬酮、月桂醛等挥发油。鱼腥草辛、微寒 ,归肺肝经 ,具有清热
解毒 ,消痈排脓 ,利湿之功效。
现代研究表明鱼腥草有较好的抗菌效果 ,体外抑菌实验表
明 ,鱼腥草素对卡他球菌、金黄色葡萄球菌、流感杆菌、肺炎球菌
有明显的抑制作用 ;对大肠杆菌、痢疾杆菌、变形杆菌、白喉杆菌、
分枝杆菌有一定的抑制作用 ,对伤寒杆菌、钩端螺旋体也有较强
的抑制作用 ;对其他革兰氏阴性菌作用不显著 [1]。另外 ,鱼腥草素
与 TM P配伍还有协同作用 ,抑菌效果显著增强 [2 ]。本研究结果表
明: 鱼腥草素钠 (粉针剂 )对革兰阴性杆菌 (肺炎克雷伯菌、大肠埃
希菌 )和真菌 (白色念珠菌 )抗菌效果较差 , M IC> 1 024μg /ml。
对革兰阳性球菌 (金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌及肺炎链珠菌 )
有较好抑制作用 ,其 M IC在 64μg /ml左右 ,与已有研究相一致。
有资料显示 ,鱼腥草中抑菌的有效成分为鱼腥草素 ,具有抗
菌、抗病毒、利尿、抗炎镇痛等作用 ,可用于呼吸道感染等疾病。翁
氏等应用中药针剂鱼腥草注射液雾化吸入治疗小儿肺炎 ,临床取
得满意疗效 [3]。陈氏等 [4]应用鱼腥草注射液治疗急性感染性疾病
500例 ,临床表明该注射液对急性上呼吸道感染 、肺炎、泌尿系统
感染均有一定疗效 ,尤其对上呼吸道感染疗效较好。 由此可见其
用于上呼吸道感染 ,经临床观察效果较好 ,临床可推广应用。本实
验也验证了其对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎链球菌的
良好作用 ,为今后进一步开发利用鱼腥草资源打下基础。
也有资料显示鱼腥草不仅有抗菌作用 ,还有抗病毒作用 ,能
对多种病毒起抑制作用 ,国内外用组织培养观察到鱼腥草提取物
对亚洲甲型病毒有抑制作用 ,而朱氏等 [5]人观察经流感病毒
( FM I)感染过的小鼠 ,发现鱼腥草的非挥发部分提取物对其有明
显保护作用 ;郑氏 [6]研究证明 ,鱼腥草对出血热病毒 ( EHFV )也
有一定的抑制作用。 其粉针剂形式的制剂抗病毒作用 ,今后还值
得进一步研究。
也有研究表明鱼腥草能够增强机体免疫功能 ,鱼腥草水煎液
对 6Gyx线照射小鼠的白细胞减低有明显的保护作用 ,能提高照
射小鼠的血清溶血素含量 ,增强巨噬细胞吞噬功能 ,表明鱼腥草
对小鼠 x线照射引起的免疫功能损伤有一定的保护作用 [7]。另有
报道 ,鱼腥草能够显著提高外周血 T淋巴细胞的比例 ,增强小鼠
腹腔巨噬细胞的吞噬能力 ,促进绵羊红细胞免疫所致的 IgM的生
成 ,从而可以提高机体的特异性免疫能力 [8]。
此外我们的研究显示不同p H值和不同菌液浓度对鱼腥草素
钠 (粉针剂 )的抗菌效果无明显影响。鱼腥草素钠 (粉针剂 )抗菌效
果弱于对照药物阿齐霉素。
综上所述 ,鱼腥草药理作用的研究表明其生物活性较高 ,由
于它既克服了西药的弊端 ,具有抗菌和抗病毒的持久性 ,同时资
源丰富 ,使用安全 ,所以其临床应用前景乐观 ,值得进一步研究、
开发和利用。
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时珍国医国药 2005年第 16卷第 5期 LISHIZHEN MEDICIN E AND M AT ERIA M EDICA RESEARCH 2005 VOL. 16 NO. 5