全 文 ：书收稿日期:2012-08-25; 修订日期:2012-12-31
基金项目:全军医学科技“十二五”重大项目( No． AWS11J003)
作者简介:陈 伟( 1981-) ，男( 汉族) ，湖北宜昌人，第二军医大学硕士研
究生，现任海军医学研究所助理研究员，主要从事中药药效学研究工作．
* 通讯作者简介:沈先荣( 1965-) ，男( 汉族) ，福建永定人，现任海军医学
研究所研究员，博士研究生导师，主要从事中药药效学研究作．
木蹄复方水提物对小鼠化学性肝损伤的
保护作用研究
陈 伟1，2，何 颖2，蒋定文2，侯登勇2，莫琳芳2，沈先荣2*
(1．第二军医大学研究生管理大队，上海 200433;2．海军医学研究所，上海 200433)
摘要:目的 观察木蹄复方水提物对四氯化碳( CCl4 ) 所致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法 将雄性昆明小鼠 50 只随机
分为正常组，模型组，木蹄复方水提物高、中、低剂量组，每组 10 只，连续给药 10 d。腹腔注射 1%CCl4 植物油溶液 5ml /kg
造模，眼眶取血，检测血清丙氨酸氨基转移酶( ALT) 、天冬氨酸氨基转移酶( AST) 含量、肝匀浆超氧化物歧化酶( SOD) 活
性、丙二醛( MDA) 含量，并作肝组织切片病理观察。结果 木蹄复方水提物可明显降低小鼠血清中升高的 ALT 水平，提
高肝组织中 SOD活性，抑制肝组织中上升的 MDA水平，病理镜检显示有明显的保肝作用。结论 木蹄复方水提物对 CCl4
所致小鼠急性肝损伤具有一定的保护作用，其机制可能与其抗氧化清除自由基、抑制脂质过氧化损伤有关。
关键词:木蹄复方; 肝损伤; 四氯化碳; 丙氨酸氨基转移酶; 天门冬氨酸氨基转移酶
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2013． 03． 038
中图分类号:Ｒ962 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2013) 03-0605-02
Protective effect of Fomes fomentarius extracts on CCl4 － induced acute liver injury in
mice
CHEN Wei，HE Ying，JIANG Ding-wen，HOU Deng-yong，MO Ling-fang，SHEN Xian-rong
( Naval Medical Ｒesearch Institute PLA，Shanghai 200433，China)
Abstract: Objective To investigate the protective effect of Fomes fomentarius extracts on CCl4 － induced acute liver injury in
mice．Methods 50 Kunming mice were randomly divided into control guoup，CCl4 model group and low，medium，high dosage of
Fomes fomentarius extracts groups． Acute hepatic injury models of mice were induced by 1%CCl4 through intraperitoneal injection．
The protective liver effect of Fomes fomentarius extracts was observed by measuring ALT，AST activity in serum and MDA content，
SOD activity in hepatic tissue． Liver index and histopathological changes were also observed． Ｒesults the liver index，ALT and
AST activity and the content of MDA decreased and the activity of SOD increased in Fomes fomentarius extracts groups． Liver his-
tological section test under a microscope denmonstrated that Fomes fomentarius extracts could relieve hepatic injury of mice in-
duced by CCl4 ． Conclusion Fomes fomentarius extracts can protect the CCl4 induced experimental liver injury，and its mechanism
might be related to antioxidant activity of Fomes fomentarius extracts．
Key words: Compound Fomes fomentarius; Liver injury; Carbon tetrachloride; ALT; AST
肝脏疾病是影响人类健康的最为常见的疾病之一，从传统中
药或食物中寻找有效部位或有效成分治疗肝脏疾病已成为目前
研究的热点。木蹄复方水提物，主要由木蹄、树舌、赤芝等中药提
取而成，经多年临床验证表明其确有显著的保肝作用。木蹄层孔
菌 Fomes fomentarius又名火绒层孔菌，为多孔菌科、层孔菌属真
菌，其粗提物具有抗氧化性，利尿性，退烧，消积化，止痛，消炎和
抗肿瘤等作用，已经被应用于传统药物［1，2］。在中国和其它亚洲
国家，木蹄作为药物广泛用于治疗肝硬化、癌症、口腔溃疡、肠胃
失调、发炎和各种感冒等疾病［3，4］。树舌 Ganoderma applanatum
隶属灵芝科、灵芝属真菌植物，能祛风除湿，清热，止痛，化积，止
血，化痰，民间多用以治疗急慢性肝炎、食道癌、胰腺癌、消化道溃
疡、早期肝硬化［5］。赤芝 Ganoderma lucidum (Leyss． ex Fr．)Karst
为多孔菌科、灵芝属真菌植物，在我国已有悠久的药用历史，始载
于《神农本草经》，具有补中益气、滋补强壮、扶正固本、延年益寿
等功效，已被广泛地用作治疗各种病因引起的肝炎［6］。本研究
首次以木蹄、树舌、赤芝组成的复方为研究对象，考察其水提物
(water extract of compound Fomes fomentarius，WECFF)对化学性
肝损伤的保护作用，为开发新药及保健品提供一定的药理学依
据。
1 材料
1． 1 动物 昆明种小鼠，18 ～ 22 g，雄性，由复旦大学实验动物部
提供的清洁级小鼠。实验动物饲养室温度 20 ～ 24℃，相对湿度
50% ～70%。
1． 2 药物 木蹄复方水提物，主要由木蹄、树舌、赤芝等中药提取
而成，药材由北京军科联创医药技术研究院提供。
1． 3 试剂 四氯化碳(CCl4) ，由上海国药试剂有限公司生产。植
物油，由金龙鱼公司生产。丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定试剂
盒、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)测定试剂盒、超氧化物歧化酶
(SOD)测定试剂盒、丙二醛(MDA)测定试剂盒、考马斯亮蓝试剂
盒均由南京建成生物工程研究所生产。
2 方法
2． 1 动物分组 设高［0． 5 g /(kg·d) ］、中［0． 1 g /(kg·d) ］、低
［0． 02 g /(kg·d) ］3 个木蹄复方水提物剂量组、肝损伤模型组和
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书正常对照组(给予蒸馏水)等 5 个组，每组 10 只动物。适应性喂
养 1 周后，称重。每天受试组分别给予木蹄复方水提物 10g /kg
灌胃，模型组和正常对照组灌胃等体积蒸馏水。连续给药 10 d，
每天称体质量，按体质量变化调整给样量。模型组及各给药组于
实验结束后一次腹腔注射 1%CCl4 植物油溶液 5ml /kg，正常对照
组给植物油，禁食不禁水，20 h后处死动物。
2． 2 血清转氨酶检测 摘眼球取血，静置半小时后，3 000 r /min
离心 15 min，留取上清，按试剂盒操作步骤，使用酶标仪测定
ALT、AST吸光度值(OD 值)。测得 OD 值查找标准曲线求得响
应酶活力值。
2． 3 肝组织匀浆生化检测 称取 0． 1 g肝组织，于 9 倍体积匀浆
介质匀浆，所得匀浆液于 4℃ 4 000 r /min离心 30 min，留取上清
液。按照试剂盒操作步骤，使用酶标仪测定 SOD、MDA 吸光度
值。所得 OD值经试剂盒提供的换算公式计算得到相应的含量。
2． 4 组织病理学观察 取出肝脏，生理盐水冲洗，取肝中间叶组
织固定于 10%福尔马林溶液中 24 h，石蜡包埋。4 μm切片，常规
脱蜡后进行苏木素 －伊红(HE)染色。
2． 5 统计学方法 实验结果用 SPSS 统计软件进行分析，结果以
珋x ± s表示，用方差分析方法进行统计学检验。
3 结果
3． 1 对化学性肝损伤小鼠肝脏指数的影响 肝脏指数是反映肝
细胞肿胀和炎性浸润的指标。从表 1 可知，模型组肝脏指数增
大，说明 CCl4 肝损伤导致肝细胞肿胀和炎性浸润，不同浓度的给
药组可降低肝脏指数，对抗 CCl4 肝损伤所致炎性浸润，说明木蹄
复方水提物对化学性肝损伤有一定的保护作用。
表 1 木蹄复方水提物对肝损伤小鼠肝脏指数的影响(珋x ± s)
组别 肝脏指数
正常对照 3． 83 ± 0． 34＊＊
CCl4 模型 5． 14 ± 0． 35
WECFF低剂量 4． 77 ± 0． 27*
WECFF中剂量 4． 77 ± 0． 24*
WECFF高剂量 4． 90 ± 0． 48
与 CCl4 模型组比较，经方差分析，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01;n = 10
3． 2 对化学性肝损伤小鼠血清 AST、ALT含量的影响 从表 2 可
知，正常对照组的 ALT、AST与模型组相比，均存在非常显著性差
异(P ＜ 0． 01) ，说明模型成立。中、高剂量组的 ALT 与模型组相
比，均非常显著下降(P ＜ 0． 01) ，说明木蹄复方水提物对化学性
肝损伤有一定的保护作用。
表 2 木蹄复方水提物对肝损伤小鼠
血清 AST、ALT含量的影响(珋x ± s) U·L －1
组别 ALT AST
正常对照 15． 89 ± 4． 03＊＊ 50． 05 ± 7． 91＊＊
CCl4 模型 347． 78 ± 31． 63 270． 34 ± 55． 28
WECFF低剂量 345． 87 ± 46． 92 258． 42 ± 54． 72
WECFF中剂量 262． 96 ± 35． 83＊＊ 235． 87 ± 32． 45
WECFF高剂量 281． 51 ± 44． 05＊＊ 250． 47 ± 43． 22
与 CCl4 模型组比较，经方差分析，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01;n = 10
3． 3 对化学性肝损伤小鼠肝组织 SOD、MDA含量的影响 从表 3
可知，正常对照组的 SOD、MDA 含量与模型组相比，均存在显著
性差异(P ＜ 0． 01，P ＜ 0． 05) ，进一步说明造模是成功的。与模型
组相比，各剂量组的 SOD活性均显著提高(P ＜ 0． 01) ;中剂量组
对 CCl4 致肝损伤小鼠肝匀浆中 MDA 含量的升高具有明显的拮
抗作用(P ＜ 0． 05) ，说明木蹄复方水提物对化学性肝损伤有一定
的保护作用。
3． 4 对化学性肝损伤小鼠的肝组织学观察 正常组小鼠肝脏外
观为红褐色，肝索排列规则，肝小叶结构清晰，细胞形态正常。模
型组小鼠肝脏外观颜色呈黄白色，肝细胞索紊乱，肝细胞变性，细
胞浊肿，空泡，点片状坏死，嗜酸性变和脂肪性变严重，大量炎症
细胞浸润。各给药组肝小叶结构、细胞形态基本正常，肝细胞变
性、坏死较轻，有轻微的炎细胞浸润，表明木蹄复方水提物可显著
降低 CCl4 肝损伤程度。见图 1。
表 3 木蹄复方水提物对肝损伤小鼠
肝组织 SOD、MDA含量的影响(珋x ± s)
组别 SOD /U·mgprot － 1 MDA /nmol·mgprot － 1
正常对照 72． 69 ± 7． 61＊＊ 6． 76 ± 1． 98*
CCl4 模型 53． 22 ± 7． 10 14． 39 ± 2． 83
WECFF低剂量 65． 91 ± 8． 75＊＊ 10． 14 ± 2． 54
WECFF中剂量 69． 20 ± 6． 69＊＊ 8． 31 ± 1． 59*
WECFF高剂量 69． 08 ± 4． 64＊＊ 9． 89 ± 1． 19
与 CCl4 模型组比较，经方差分析，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01;n = 10
图 1 木蹄复方水提物对化学性肝损伤肝病理组织学的影响
4 讨论
CCl4 肝损伤模型是肝损伤的经典模型，常用来研究保肝、护
肝药物的药效及其作用机制，国内外多采用 CCl4 作为建立肝损
伤模型试剂［7］。目前公认 CCl4 引起肝损伤的机制系 CCl4 在肝
微粒体细胞色素 P450 激活下生成自由基 CCl3·和 Cl·，这些自
由基可与肝细胞内大分子发生共价结合，也可攻击膜下不饱和脂
质，引起脂质过氧化，使肝细胞受损，细胞质内 ALT、AST 大量进
入血液。其中，ALT广泛存在于肝脏、心肌中，而且肝内该酶的活
性较血清中高 100 倍，当组织损伤或者坏死时，ALT 就被释放出
来，导致其活性升高，所以它是最为敏感的肝功能检测指标之一。
而 AST也广泛存在于肝脏、心肌中，其中在心肌含量中最高，所
以当肝脏组织损伤或者坏死时，AST 释放较 ALT 少。因此，测定
血清中 ALT、AST 的含量成为评价肝损伤的重要指标。本实验中
给药组的 ALT与模型组相比，显著降低，对 CCl4 致小鼠急性肝损
伤具有一定保护作用。
CCl4 在肝内代谢产生自由基，攻击细胞膜结构的磷脂分子中
不饱合脂肪酸产生脂质过氧化物，后者代谢的终产物 MDA可以反
映机体内氧化反应程度，也可作为损害因子引起细胞的损伤。
SOD是细胞内主要的防御性抗氧化酶，能够清除自由基，并可抑制
自由基启动的脂质过氧化反应，从而起到保护细胞膜结构与功能
完整的作用。MDA 和 SOD 含量可间接反映机体氧自由基的高
低［8］。通过实验结果可以看出，木蹄复方水提物能明显增加 CCl4
急性肝损伤小鼠肝组织 SOD 活性，且降低 MDA 含量，表明其具有
增强肝脏抗氧化能力、减少脂质过氧化物生成的作用。
在本实验研究中，模型组小鼠的肝脏指数，血清 ALT、AST的
含量，肝组织中 SOD、MDA 的含量相对正常对照组都有显著差
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时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 3 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 3
书异，说明肝损伤造模成功;与模型组比较，木蹄复方水提物给药组
ALT含量显著降低，SOD、MDA 的含量也有显著差异，说明木蹄
复方水提物对 CCl4 复制的化学性肝损伤有较好的保护作用。本
实验结果为进一步了解木蹄复方水提物药理作用奠定基础，为利
用真菌这一宝贵植物资源、开发新药及保健品，提供了一定的药
理学依据。
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收稿日期:2012-07-05; 修订日期:2012-12-20
基金项目:贵州省教育厅自然科学研究项目( 黔教科 2007036) ;
贵阳中医学院院内项目( 2008)
作者简介:敖新平( 1954-) ，男( 汉族) ，贵州思南人，现任贵阳中医学院副
教授，主要从事体育教学及运动训练研究工作．
* 通讯作者简介:钱 宁( 1959-) ，男( 汉族) ，贵州贵阳人，现任贵阳中医
学院实验动物研究所教授，硕士研究生导师，学士学位，主要从事实验动
物学研究工作．
金匮肾气丸抗雄性大鼠力竭性疲劳的研究
敖新平，王明镇，王兴友，吴曙光，钱 宁*
(贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002)
摘要:目的 研究金匱肾气丸对力竭性游泳运动疲劳雄性大鼠的影响。方法 将大鼠随机分成对照组、模型组、中药组。
模型与中药组大鼠进行负重力竭游泳训练，持续 21 d; 中药组每日根据体重灌服金匮肾气丸混悬液;第 21 天测定大鼠血
清超氧化物歧化酶( SOD) 、丙二醛( MDA) 、尿素氮( BUN) 、肌酐( Cr) ，并测定大鼠肾、前列腺、睾丸、附睾各脏器指数。结
果 中药组大鼠血清 SOD较模型组明显升高，血清 MDA、BUN、Cr含量显著降低; 中药组体重增长和采食量增长趋势明显
高于运动组。模型组与对照组、中药组比较，肾脏系数明显升高，睾丸系数明显降低，中药组与对照组相比差异不显著。
结论 金匮肾气丸对力竭性游泳运动疲劳雄性大鼠有明显的抗疲劳作用。
关键词:金匮肾气丸; 力竭性游泳; 大鼠
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2013． 03． 039
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:B 文章编号:1008-0805( 2013) 03-0607-02
中医药在消除运动性疲劳和增强运动能力方面有独特优势，
金匮肾气丸为经典补肾阳方，能改善长期的运动疲劳对肾造成的
影响。为此，本研究通过制作“力竭性游泳运动疲劳”雄性大鼠
模型，观察力竭性游泳运动疲劳对雄性大鼠的损伤，进一步探讨
金匮肾气丸对力竭性游泳运动疲劳大鼠雄性大鼠的抗疲劳作用。
1 材料
1． 1 动物及饲养 清洁级雄性 SD大鼠 45 只，体质量(250 ± 20)
g，购于重庆市中药研究院，合格证号:SCXK(渝)20020004。分笼
饲养，自由摄水和取食。适应性饲养 7 d后进行实验。
1． 2 药品与试剂 金匮肾气丸，购自北京同仁堂科技发展股份有
限公司制药厂，规格:6g /丸，批号:5012298。SOD 测试盒、MDA
测试盒、BUN测试盒、Cr 测试盒均购自南京建成生物工程研究
所。
1． 3 仪器设备 721 型分光光度计(上海欣茂仪器有限公司) ，
HH2600 型数显循环恒温水箱(金坛市双捷实验仪器厂) ，800 型
离心沉淀器(上海手术器械厂) ，Gl288B 型旋涡混合器(海门市
其林贝尔仪器制造有限公司)。
2 方法
2． 1 动物模型建立方法 将大鼠随机分成:对照组、模型组、中
药组，每组 15 只。金匮肾气丸用蒸馏水溶解，配成 7． 15 %溶
液，按 1． 4 g /kg体质量灌服。模型组与中药组进行 21 d 负重
力竭游泳训练，负重为大鼠自身体重的 5%:调节玻璃缸水深
为大鼠总长(身长 +尾长)的 1． 5 倍，水温 32 ～ 34℃。于实验
前适应性游泳 2 d，20 min /d。正式实验开始后，两组大鼠每
天负重游泳至接近力竭。训练在上午进行。中药组每天在
16:00 ～ 18:00 灌服药物一次。力竭判断标准:即以负重大鼠
游泳动作明显失调，不能再坚持或沉入水底超过 10 s 不能自
主浮上水面且放在平面无法完成翻正反射为力竭［1］。若出现
上述情况，及时捞起，注意保暖。每日游泳 1 次，连续 21 d。
对照组不采取任何干预措施。末次游泳后，处死各组大鼠，取
血制备血清和称量肾、前列腺、睾丸、附睾重量。
2． 2 指标选择及检测方法
2． 2． 1 各组大鼠采食情况 比较各组大鼠采食量变化情况，见图
1。
2． 2． 2 各组大鼠体质量变化情况 比较各组大鼠体质量变化情
况，见图 2。
2． 2． 3 分离血清测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)
含量、尿素氮(BUN) ，肌酐(Cr) ，各指标测定方法均按试剂盒说
明书进行。
2． 2． 4 大鼠肾、前列腺、睾丸、附睾各脏器指数的测定 处死大鼠
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 3 时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 3 期