全 文 ：收稿日期:2000-01-10初稿;2000-01-27修改稿
　食用菌学报　2000.7(1):19～ 22
　Acta Edulis Fungi
猴头菌多糖调节机体免疫功能的研究
杨　焱　周昌艳　王晨光　白韵琴
(上海市农业科学院食用菌研究所 , 上海　201106)
摘　要　应用保健功能的评价方法对猴头菌子实体中提取的猴头菌多糖进行免疫功能测定。
实验结果表明 ,猴头菌多糖能提高自然杀伤细胞的活性 、促进迟发型超敏反应(DTH)的发生 , 能增
强巨噬细胞的吞噬功能;而对体液免疫和免疫器官的增殖作用不明显。 这说明猴头菌多糖主要是
通过增强免疫细胞的活性来调节机体的免疫功能。
关键词　猴头菌多糖;免疫细胞;免疫调节
猴头菌(Hericium erinaceus)是著名的药食兼用菌 ,其性平 、味甘 ,具有助消化 、利五脏的
功能〔1〕。药效研究表明 ,猴头菌具有提高机体耐缺氧能力 ,提高心血输出量 ,加速血液循环 ,
抑制肿瘤细胞生长等作用 ,尤其对胃粘膜有较好的保护作用〔2〕 。猴头菌的主要有效成分是多
糖和多肽类物质 ,猴头菌多糖具有多方面的免疫调节作用 。本研究以从猴头菌子实体中提取
分离的粗多糖为样品 ,按卫生部规定的有关免疫功能的评价方法进行功能测试 ,探讨了猴头菌
多糖对机体的免疫调节作用。
1　材料和方法
1.1　供试样品及处理
猴头菌子实体粗多糖由上海市农科院食用菌研究所中试车间提供 ,多糖含量为 26.1%。
受试样品以水调成各计量 ,供试。
1.2　受试动物
昆明种小白鼠 ,体重 18 ～ 22g ,雌性 ,系由上海医科大学实验动物部提供的清洁级动物。
1.3　其它试剂
SRBC 、TdR 、TritonX-100 、DNFB 、Giemsa-磷酸缓冲液 、Alsever液均由上海市卫生防疫
站提供。
1.4　试验动物分组与多糖剂量的设定
每个实验均将小白鼠按体重随机分为 0.17g/kg(低剂量)、0.33g/kg(中剂量)、1g/kg(高
剂量)三个组和一个对照组 ,每组 10只小鼠。根据体重将猴头菌多糖按设定的剂量分次定时
灌胃 ,对照组以蒸馏水灌胃 ,每个实验连续喂养 28d ,实验期间一组一笼 ,自由摄食与饮水。
1.5　实验方法
1.5.1　血清溶血素试验
DOI :10.16488/j.cnki.1005-9873.2000.01.005
动物连续给样 4 周后 ,颈椎脱臼处死 , 眼眶采血 ,分离血清。在 96 孔微量血凝板上加
25μL 生理盐水 ,再分别在第一排加 25μL 血清 ,以后各排作对倍稀释 ,每孔加 1%SRBC 1滴 ,
振荡后室温放置 1h ,当血球对照沉落后观察结果。
1.5.2　NK 细胞活性测定
动物连续给样 4周后 ,颈椎脱臼处死 ,取脾脏 ,制成脾细胞悬液 ,取传代后 24hYAC-1细
胞加3H-TdR10u Ci/1×106/mL ,37℃培养 2h ,每 30min振荡 1 次 ,用培养液洗涤 3次 ,配制
成 1×105/mL YAC-1靶细胞 ,加入 96孔培养板 ,每孔加 100μL ,试验孔加入 100μL 1×107/
mL 小鼠脾细胞悬液 ,空白对照孔加入 100μL 培养液 ,最大释放孔加入 100μL 、2.5%Triton X
-100 ,每个样品设 3个重复孔 ,37℃培养 4h后 ,用多头细胞收集器将细胞收集在 49型玻璃纤
维滤纸上 ,60℃烤干后浸入闪烁液过夜 ,用液体闪烁仪测量 CPM 。
1.5.3　胸腺指数与脾指数的测定
动物连续给样 4周后 ,每鼠称重 ,颈椎脱臼处死 ,取胸腺 、脾脏称重 ,分别计算胸腺指数和
脾指数(每 10g 小鼠体重的胸腺或脾脏的毫克数)。
1.5.4　迟发型超敏反应(DTH)测定
1.5.4.1　致敏　动物连续给样 4 周后 ,每鼠腹部去毛 ,范围约 3×3cm , 取 1%DNFB 溶液
50μL 均匀涂抹致敏 。
1.5.4.2　DTH的产生与测定　5d后 ,用 1%DNFB溶液 10μL 均匀涂抹于小鼠右耳(两面)进
行攻击。24h后 ,颈椎脱臼处死小鼠 ,用打孔器取直径约 8mm 的耳片 ,称重并计算肿胀度。
1.5.5　小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验
动物连续给样 4周后 ,每鼠腹腔注射 20%鸡红细胞悬液 1μL ,间隔 30min ,颈椎脱臼处死 ,
固定于鼠板上 ,剪开腹壁皮肤 ,注射生理盐水 2mL ,转动鼠板1min ,吸出腹腔洗液1mL ,分别滴
于 2片玻片上 , 37℃孵化箱温孵 30min ,用生理盐水漂洗 ,晾干 ,以 1∶1丙酮甲醛溶液固定 ,4%
Giemsa-磷酸缓冲液染色 3min ,用蒸馏水漂洗晾干 ,油镜镜检 ,计算吞噬百分数和吞噬指数 。
2　结果与分析
2.1　样品服用量与动物体重的关系
经统计分析 ,多糖剂量对动物体重无明显影响(表 1)。
表 1　不同多糖剂量对动物体重的影响
Table 1　The influence of di fferent polysaccharide dosage on animal weight
组　别 Groups 动物数(只)No.of animals 时间(d)Duration(d) 体重(g)Weigh t(g)
　　对　照　Cont rol 10 28 33±2.6
　　低剂量　Low dose 10 28 35±3.9
　　中剂量　Medium dose 10 28 33±3.4
　　高剂量　High dose 10 28 33±1.6
2.2　血清溶血素实验结果
经计算机统计分析 ,猴头菌子实体粗多糖低 、中 、高三种剂量对血清溶血素的影响与对照
组相比 ,均无显著性差异(表 2)。
2.3　自然杀伤细胞(NK细胞)活性测定结果
经计算机统计分析 ,猴头菌子实体粗多糖高剂量组的自然杀伤细胞活性与对照组相比有
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显著差异 。中 、低剂量组与对照组相比无显著差异(表 3)。
表 2　血清溶血素试验
Table 2　The test of serum hemolysin
组　别 Groups 动物数(只)No.of animals 时间(d)Duration(d) 抗体积数 Ant ibody number
对　照　Cont rol 10 28 99±12.6
低剂量　Low dose 10 8 100±10.4
中剂量　M edium dose 10 28 104±11.5
高剂量　High dose 10 28 102±14.9
表 3　NK细胞活性测定
Table 3　Detection in natural kill cell activity
组　别 Groups 动物数(只)No.of animals 时间(d)Duration(d) NK 细胞活性 Act ivity of NK cells
对　照　Cont rol 10 28 36±8.1
低剂量　Low dose 0 28 43±2.6
中剂量　M edium dose 10 28 44±2.1
高剂量　High dose 10 28 　 48±3.4＊＊
　　＊＊与对照组相比 P<0.05　　Com pared w ith the cont rol , P<0.05
2.4　胸腺指数 、脾指数的测定结果
经计算机统计分析 ,猴头菌子实体粗多糖各剂量组的胸腺指数 、脾指数与对照组相比 ,均
无显著性差异(表 4)。
表 4　胸腺指数与脾指数测定
Table 4　Detection in thymus index and spleen index
组　别 Groups 动物数(只)No.of animals 胸腺指数(%)Thymus index(%)脾指数(%)Spleen index(%)
对　照 Cont rol 10 0.15±0.07 0.51±0.20
低剂量 Low dose 10 0.13±0.05 0.50±0.13
中剂量 Medium dose 10 0.14±0.04 0.49±0.09
高剂量 High dose 10 0.15±0.03 0.52±0.09
2.5　猴头菌多糖对小鼠迟发型超敏反应的影响
经计算机统计分析 ,猴头菌子实体粗多糖高剂量组对小鼠迟发型超敏反应的影响与对照
组相比 ,有显著性差异。中 、低剂量组与对照组相比无显著差异(表 5)。
表 5　DTH的测定结果
Table 5　Detection result of DTH
组　别 Groups 动物(只)No.of animals 耳重均值(mg)Average ear weigh t右　Righ t 左　Lef t 肿胀度 Sw elling degree
对　照　Cont rol 10 40±5.9 22±5.4 18±4.2
低剂量　Low dose 10 38±4.7 21±1.4 17±4.1
中剂量　M edium dose 10 41±3.4 21±4.5 20±3.3
高剂量　High dose 10 46±4.5 20±2.4 　 26±4.5＊＊
　　＊＊与对照组相比 P<0.05 　　Compared w ith the con trol, P<0.05
2.6　小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验
经计算机统计分析 ,猴头菌子实体粗多糖高剂量组的吞噬率和吞噬指数与对照组相比 ,均
存在显著性差异(表 6)。
211 期　　　　　　　　　　　　杨　焱等:猴头菌多糖调节机体免疫功能的研究
表 6　巨噬细胞吞噬试验
Table 6　Phagocytic test of macrophage
组　别 Groups 动物数(只)No.of animals 吞噬率(%)Phagocytic rate(%)吞噬指数 Phagocyt ic index
对　照　Cont rol 10 42±6.4 0.71±0.15
低剂量　Low dose 10 47±6.2 0.74±0.12
中剂量　M edium dose 10 56±7.9 0.86±0.17
高剂量　High dose 10 　 67±7.5＊＊ 　 1.09±0.19＊＊
　　＊＊与对照组相比 P<0.05　Com pared w ith the cont rol , P<0.05
3　讨论
免疫应答包括机体的非特异性免疫应答(即巨噬细胞的吞噬功能)和抗原诱导的特异性免
疫应答(即主要由淋巴细胞介导的细胞免疫和体液免疫)〔3〕 。实验结果显示 ,猴头菌多糖高剂
量组能明显提高自然杀伤细胞的活性 ,促进 T 细胞中介的迟发型超敏反应的发生 ,增强巨噬
细胞的吞噬功能 。因此 ,猴头菌多糖既具有非特异性免疫功能又具有特异性细胞免疫功能。
血清溶血素试验表明 ,猴头菌多糖在体液免疫方面无特殊表现 ,这说明猴头菌多糖的免疫
调节作用不是通过体液免疫来实现的。研究还表明 ,猴头菌多糖对胸腺及脾等免疫器官没有
增殖作用。这说明猴头菌多糖的免疫调节作用主要是通过增强巨噬细胞 、T 淋巴细胞 、NK细
胞等免疫细胞的活性来实现的 。T 细胞是重要的免疫细胞 ,能分泌多种淋巴因子 ,尤其是白细
胞介素-2(IL -2),它是免疫调节的主要介质之一。在这些淋巴因子的影响下 ,单核-巨噬细
胞趋向抗原入侵部位并活化 ,对抗原发生活跃的吞噬和消化过程 ,在抗感染过程中发挥重要作
用。这些作用对机体抵御疾病和病后康复有着重要的意义 。
本研究进一步表明 ,猴头菌有提高机体免疫功能的作用 ,是一种应用前景广阔的药用真
菌。
参　考　文　献
1　徐锦堂.中国药用真菌.北京:北京医科大学 、中国协和医科大学联合出版社 , 1997.48～ 454.
2　杨焱 ,严慧芳 ,陆宏琪等.猴头菌提取物对大鼠胃粘膜损伤保护作用的研究.食用菌学报 , 1999 , 6(1):14 ～ 17.
3　金宗濂.功能食品评价原理及方法.北京:北京大学出版社 , 1995.67 ～ 80.
Studies on Immunoregulatory Function of
Hericium erinaceus Polysaccharide
Yang Yan　Zhou Changyan　Wang Chengguang　Bai Yunqing
(Edible Fungi Institute, Shanghai Academy of Agricultur al Sciences , Shanghai　201106)
Abstract　Hericium erinaceus is a kind of medicinal fungi.It was proved through the investigation on im-
munoregulato ry function of Hericium ernaceus polysaccharides (HEP)that HEP , compared with the control , had
remarkable effects on improving the activities of NK cells , promo ting the genesis of delayed type hypersensitivity and
enhancing the phagocy tosis o f macrophage.While HEP only had unsignificant effect on humoral immunological
function and the proliferation function of immunological organs.And it w as indicated that the immunological func-
tio n of human body could be regulated through the streng thening of the immunocy te activity by Hericium erinaceus
polysaccharide
Key words　Hericium erinaceus polysaccharide;Immunocy te;Immunoregula tion
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