全 文 ：　　　　 天然产物研究与开发　 　　　　　
2003　Vo1.15　No.4 NATU RAL PRODUCT RESEARCH AND DEVELOPMENT　 　　　　　　　　　　
　
　
　
　
　　收稿日期:2003-01-22　　　修回日期:2003-03-31
＊国家“九五”攻关(96-C02-03-06)和山西省青年基金资助项
目(981049)
金耳菌丝发酵产物抗血栓的生物活性研究＊
刘春卉　谢　红　苏槟楠　韩建欣　刘艳萍
(山西省生物研究所　太原　030006)
摘　要　本试验研究了药用真菌 9800 金耳菌丝发酵产物对小白鼠血栓形成的影响和对大鼠脑脂质过
氧化物等指标的影响。结果表明 , 0.8 g/kg·d剂量的金耳菌丝发酵产物能明显对抗小鼠体内血栓的形
成 ,高剂量组对脑组织缺血其过氧化脂质的分解产物丙二醛含量明显增多有显著的抑制作用 , 能明显抑
制ADP诱导的血小板聚集 , 对动物凝血酶原的作用时间有延长作用 , 给药 5 分钟后能明显增加动物脑
膜血流量。本实验结果表明该产物对动物血栓形成有较好的抑制作用。
关键词　金耳;菌丝发酵产物;血栓形成;抑制作用
　　药用真菌金耳(Tremel la aurantialba Bandoni
et Zang.)分类地位属担子菌纲 ,银耳目 ,银耳科 ,银
耳属 ,其药用功能早为《本草纲目》所记载 , 《名医别
录》也记述其有益气延年 ,轻身益脑 ,逐风散寒的功
效 ,《西藏常用中草药》有“金耳 6 ～ 8 g ,白糖适量 。
金耳用清水泡发后 ,煮沸 10 ～ 15分钟 ,再用文火炖
成胶状浓汁 ,加白糖调服 ,连用 10天 ,停 3 ～ 4 天后
继续服用 。治虚痨咳嗽 、咳血 、肺结核 、气喘 、高血
压 、老年慢性支气管炎”的叙述。《中国药用真菌》
中 ,对金耳有“性温微寒 ,味甘 ,能滋阴润肺 ,具有化
痰止咳 ,平肝阳”的论述[ 4] 。金耳多糖有较好的降
血糖作用[ 1～ 3 ,11] 。但由于其生活史和生境较为独
特 ,成为野生分布珍稀的物种 , 尚未被充分开发利
用。经对其进行深层发酵研究 ,发现菌丝发酵产物
与原子实体相比无论成分与药用价值 ,前者均具有
很大的应用价值[ 5] ,该产物经初步临床观察对治疗
脑梗塞 、脑缺氧引起的肌力丧失 、手足麻木 、意识不
清等症 ,有效率达 97.5%[ 6 , 7] 。因此我们选定以菌
丝发酵产物为研究对象 ,深入探讨其药理活性 。缺
血性中风病常由脑血栓形成引起 ,脑血栓形成是在
脑动脉膜病变基础上产生的 ,引起血管腔狭窄或闭
塞 ,常致脑梗塞而出现偏瘫等症状 。本产物通过对
动物抗脑血栓形成及改善脑缺血性损伤项目和指标
进行验证 ,可以获得有关药理作用的证据 ,为其临床
应用提供一定的药效学依据。
1　材料和方法
1.1　实验材料
1.1.1　受试动物:小鼠 ,昆明种 , 22±0.89 g ,雌雄
各半。大鼠 ,Wistar 种 , 体重 261±1.56g ,雌雄各
半 。均由中国医学科学院实验动物中心提供 ,合格
证号:(95)01-3008。
1.1.2　阳性对照药:天宝宁胶囊:浙江康恩贝制药
公司产品 , 批号:19990821 , 规格:银杏叶提取物
0.4 g 40 mg/粒 。
1.1.3　受试药物:金耳 9800菌丝发酵物(简写为
TM),采用山西省生物研究所自主分离驯化的金耳
9800菌种发酵制得 ,批号:19991011。
1.1.4　药品:ADP(购自 Sigma公司)
1.1.5　仪器:BS-631血小板聚集仪;JI-200激光微
循环仪;国产 752紫外可见分光光度计。
1.2　实验方法:[ 8～ 10]
1.2.1　受试药物对小鼠体内血栓形成的实验方法
将小鼠随机分为 5组 ,口服给药 3天 ,高剂量组
0.8 g/kg·d ,低剂量组 0.2 g/kg·d ,阳性对照药 0.4
g/kg·d ,于最后一次给药后 ,1小时尾静脉注射配制
好的鼠脑粉试剂 0.1 ml/10g ,待小鼠出现呼吸困难 、
惊厥 、小便失禁直至死亡 ,存活者按 5分钟计 ,记录
小鼠存活时间及死亡率 。
1.2.2　受试药物对脑脂质过氧化物升高的抑制实
验方法
取正常大鼠 ,断头取出大脑 ,做组织匀浆 ,每管
加入组织匀浆液 0.2 ml ,再加入受试药物 0.1 ml ,
置于 37 ℃水浴培养 20 min ,后测定 MDA(丙二醛)
含量。实验分 4 组:生理盐水组 、金耳菌丝发酵物
289
高 、中 、低剂量组 ,剂量分别为 8.33 mg/ml , 2.08
mg/ml , 0.52 mg/ml。每组做 3 复管 , 观测指标
MDA表达采用每克蛋白所含 MDA 的摩尔数(×
M/g),采用改良 TBA 法测定。蛋白采用双缩脲法
测定 。
1.2.3　受试药物对 ADP诱导的血小板聚集的作用
取健康的 Wistar大鼠 ,乌拉坦(1.5 g/kg)麻醉
后 ,固定 ,腹主动脉取血 , 3.8%枸橼酸钠抗凝 ,离心
分离富含血小板血浆 。用血小板聚集仪做血小板聚
集试验 。将受试药物制成终浓度为:高剂量组 2.75
mg/ml ,中剂量组 0.55 mg/ml ,低剂量组 0.11 mg/
ml的溶液 ,取血小板液 0.1 ml ,诱导剂 ADP(1 mg/
ml)0.05 ml ,受试药物 0.05 ml ,总体积为 0.2 ml。
对照组加入等体积的生理盐水 ,观测指标为血小板
聚集百分率。
1.2.4　药物对凝血酶原作用的影响
受试药物分别制成终浓度为:高剂量组 12.5
mg/ml ,中剂量组 3.13 mg/ml ,低剂量组 0.78 mg/
ml的溶液。乌拉坦(1.5 g/kg)麻醉大鼠 ,固定 ,分
离腹主动脉 取血(3.8%枸橼酸钠抗凝)。离心分离
血浆 ,测凝血因子。每管血浆 0.1 ml ,加入不同浓
度的受试药物 0.05 ml ,致凝剂 0.05 ml ,总体积为
0.20 ml ,凝血酶原试剂为 0.06 g/ml 鼠脑粉 。记录
从加入凝血因子到血浆凝固时间 。
1.2.5　药物对脑膜血流的作用
取小鼠乌拉坦(1.0 g/kg)麻醉后 ,固定头部 ,切
开皮肤 ,于大脑皮质运动区(AP-1 , L2)安置激光探
头 ,记录给药前后脑膜血流量的变化 。受试药物剂
量分别为高剂量组 200 mg/kg 体重 ,低剂量组 50
mg/kg 体重 ,脑膜血流量计算方法:脑膜血流量增
加百分率=〔(给药后血流量-给药前血流量)/给药
前血流量〕×100%。
2　结果与分析
2.1　对小鼠体内血栓形成的作用
以 0.8 g/kg·d和 0.2 g/kg·d剂量的 TM 给药 ,
对小鼠分组进行试验 ,结果见表 1。
表 1　金耳菌丝发酵物对体内血栓形成小鼠存活时间的影响
Table 1　The effect of living time of the thrombus fo rmation in mice from TM
组别
Group
剂量
Dose(g/ kg·d)
n(只)
Number
死亡数(只)
Num ber of death
死亡率(%)
Percentage of death(%)
存活时间( x ±SD)
Time of life(second)
生理盐水 S aline group 9 7 77.78 189.56±81.63
阳性对照药 Con trol group 0.4 9 4 44.44 256.89±51.81
TM-1 0.8 8 1 12.5 289.50±29.70＊＊■
TM-2 0.2 8 4 50 258.63±67.09
＊＊与生理盐水比较:P<0.01 , ■与阳性对照药 P <0.05.
　　从表 1可见 ,在实验浓度下 , TM-1对小鼠血栓
死亡抑制率达 12.5%,与生理盐水组比较有显著性
差异 P<0.01 ,对阳性对照组也有显著性差异 P <
0.05 ,表明 TM 的 0.8 mg/kg·d剂量有对抗小鼠体
内血栓形成的作用 ,从而提高其耐缺氧的能力 ,明显
降低缺氧小鼠的死亡率。
2.2　对脑脂质过氧化物升高的抑制作用
以 TM-1 、TM-2 、TM-3为高 、中 、低剂量组分别
给药 ,对大鼠进行体外试验 ,结果见表 2。
由表 2可知 ,在实验浓度下 , TM-1与生理盐水
组比较有显著性差异 P<0.01 ,表明对由于脑组织
缺血其过氧化脂质的分解产物丙二醛含量明显增多
有显著的抑制作用。中 、低剂量组与生理盐水组比
较虽差异不显著 P >0.05 ,但也有剂量效应关系 ,提
示该制剂有抑制脑脂质过氧化物升高的趋势 。
表 2　金耳菌丝发酵物对大鼠脑体外培养 20 分钟后
MDA 含量的影响( x±SD)
Table 2　The effect of MAD in brain tissue of rats in chemia
state after cultured 20 minutes in vitro
组别Group 剂量(mg/ml)
Dose of TM
脑MAD(×10-5 M/ g)
MAD of b rain
生理盐水 Saline group 0.1797±0.0296
TM-1 8.33 0.0911±0.0035＊＊
TM-2 2.08 0.1799±0.0550
TM-3 0.52 0.1855±0.0857
＊＊与生理盐水组比较 P <0.01
2.3　对 ADP 诱导的血小板聚集的作用
以 TM-1 、TM-2 、TM-3为高 、中 、低剂量组分别
给药 ,对大鼠进行体外试验 ,结果见表 3 。
由表 3可知 ,在实验浓度下 , TM-1与生理盐水
组比较差异显著 P〈0.01 ,提示TM 高剂量组能明显
抑制ADP 诱导的血小板聚集作用 。
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表 3　金耳菌丝发酵物对大鼠体外部分凝血因子的影
响( x±SD)
Table 3　The effect of the platelet ag gregation of rats in vitro
induced by ADP from TM
组别
Group
剂量(mg/ml)
Dose of TM
聚集百分率(%)
Percentage of platelet aggregat ion
生理盐水
S aline group
65.72±6.73
TM-1 2.75 33.83±3.43＊＊
TM-2 0.55 45.89±21.53
TM-3 0.11 50.17±11.97
＊＊与生理盐水组比较 P <0.01
2.4　对凝血酶原时间的影响
以 TM-1 、TM-2 、TM-3为高 、中 、低剂量组分别
给药 ,对大鼠进行体外试验 ,结果见表 4。
表 4　金耳菌丝发酵物对大鼠体外部分凝血因子的影
响( x ±SD)
Table 4　The effect of the coagulation time in rats from TM
组别
Group
剂量(mg/ml)
Dose of TM
凝血酶原时间(秒)
Coagulation t ime(second)
生理盐水
Saline group
16.43±0.47
TM-1 12.5 17.55±0.25＊＊
TM-2 3.13 16.35±0.28
TM-3 0.78 16.28±0.07
＊＊与生理盐水组比较 P <0.01
由表 4可知 ,在实验浓度下 , TM-1与生理盐水
组比较差异显著 P〈0.01 ,提示TM 高剂量组对于凝
血酶原作用时间有明显延长作用 。
2.5　对脑血流的作用
以 200 mg/kg·d和 50 mg/kg·d剂量的 TM 给
药 ,对小鼠进行试验 ,结果见表 5。
表 5　金耳菌丝发酵物对正常小鼠脑膜血流量的影响( x ±SD)
Table 5　The effect of the volume of menings′blood flow in no rmal mice from TM
组别 Group
剂量
(mg/ kg·d)
Dose of TM
血流量增加百分比率(%)
Percentage of the volume of menings′blood flow(%)
0 2 5 10 15(min)
生理盐水 Saline group 1.43±2.88 1.85±0.68 2.65±3.99 1.08±1.91
TM-1 200 0 16.86±18.55 22.67±8.67＊＊ 6.22±5.79 5.03±10.61
TM-2 50 0 16.72±22.06 14.87±9.84＊ 8.85±13.55 13.16±10.88
与生理盐水组比较:＊P<0.05 , ＊＊P <0.01 , n=5
　　由表 5可知 ,在实验浓度下 , TM-1 、TM-2 与生
理盐水组比较在给药 5分钟差异均显著 P<0.01 ,
P<0.05。表明 TM 对正常小鼠脑膜血流量 ,在给
药 5分钟时有明显增加作用。在其它时间与对照组
比较虽无显著性差异 ,但也有增加趋势 ,提示 TM
有利于改善脑血流动力学 。
3　讨论
综上所述 ,金耳菌丝发酵产物具有较好的对抗
体内血栓和血小板聚集的作用 ,也有利于改善脑血
流动力学 ,延长血液凝固凝血时间和凝血酶原作用
时间 ,对脑脂质过氧化物升高也有抑制作用。本研
究作为金耳菌丝发酵产物具有防治缺血性脑中风 、
治疗脑梗塞 、脑缺氧导致的肌力丧失 、手足麻木 、意
识不清等症有效仅进行了初步的探索 ,还需进一步
确定作用靶标继续深入研究该产物的有效部位及其
作用机理 。从文中可以看出金耳菌丝发酵物其药理
作用显著性均表现在较高的剂量组 ,提示是否存在
一些微量的活性物质 ,有待进一步研究。本研究对
于控制发酵产物质量也具有指导意义。另外 ,一些
研究还证明本品具有滋补强壮 、延缓衰老 、防治慢性
乙肝 、化痰止咳等功效[ 11] 。药用真菌在深层培养过
程中 ,除菌丝或孢子会大量增殖外 ,还会在发酵液中
产生多糖 、多肽 、生物碱 、萜类化合物 、甾醇 、甙类 、酚
类 、酶 、核酸 、氨基酸 、维生素 、植物激素及具抗生素
作用的各种化合物等多种生理活性物质。这些物质
分别对心血管 、肝脏 、神经系统 、肾脏 、性器官等人体
器官具有防病治病作用 ,并有抗癌 、抗炎 、抗菌 、抗衰
老 、抗溃疡等功效。因此进行药用真菌液体深层发
酵获取以上具有生物活性的次生代谢产物也将是今
后主要的研究开发方向 。
参考文献
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ANTI-THROMBUS EFFECTON THE FERMENTED PRODUCTS OF
MYCELIUM FROM TREMELLA AURANTIALBA
LIU Chun-hui ,XIE Hong ,SU Bing-nan ,HAN Jian-xin , LIU Yan-ping
(Shanxi Institute of Biology , Taiyuan　030006 , China)
Abstract　After the fermented products of mycelium from Tremel la aurantialba 9800 0.8 g/kg .d were given
to thrombusis mice , the anti-thrombus effect w as prominent ly efficient in comparison wi th the control.The g roup
of the high dose could significantly inhibit the pero xide lipid f rom decomposing into MDA in brain tissue of is-
chemia state , as well as the platelet aggregation that induced by ADP in normal rats.The fermented products
could remarkablely prolong the clot ting time of the thrombogen and increase the volume of meninges′blood f low
af ter given the products(in vit ro)in 5min.The conclusion is that the fermented products of mycelium from
Tremella aurant ialba 9800 have distinct biological activeness on anti-thrombus.
Key words　Tremella aurant ialba;mycelium;the fermented products;thrombus formation;inhibition
《天然产物研究与开发》荣获
四川省第二届优秀期刊评选
优　秀　期　刊
中共四川省委宣传部
四 川 省科学 技术 厅　
四川省新闻出版局
　　　　　　　
二★★★年八月
《天然产物研究与开发》荣获
四川省首届优秀期刊评选
优　秀　期　刊
中共四川省委宣传部
四川省科学技术委员会　
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一九九五年七月
292　　　　　　　　　 天然产物研究与开发 2003　Vo1.15　No.4